Summary

بروتوكولات لتلقيح المهبل وجمع العينات في النموذج التجريبي للماوس المبيضات المهبل

Published: December 08, 2011
doi:

Summary

مفتاح التقنيات المستخدمة في تقييم<em> المبيضات</emموصوفة> المهبل في نموذج حيواني التجريبية. وسوف تسمح الأساليب جمع العينات السريع لمفاوي من المهبل وتجفيف الغدد الليمفاوية أسفل الظهر. هذه التقنيات يمكن أن تؤدي إلى نماذج الماوس من الأمراض الأخرى في المسالك التناسلية للإناث أقل.

Abstract

الفرجية المهبلية المبيضات (VVC) ، التي تسببها الأنواع المبيضات ، هو عدوى فطرية لانخفاض المسالك التناسلية للإناث الذي يؤثر على ما يقرب من 75 ٪ من النساء الأصحاء خلال سنوات الإنجاب 18،32-34. وتشمل العوامل المؤهبة استخدام المضادات الحيوية ، والسكري غير المنضبط واضطراب في مستويات الهورمونات التناسلية بسبب الحمل ، وحبوب منع الحمل أو العلاج بالهرمونات البديلة 33،34. VVC المتكررة (RVVC) ، على النحو المحدد ثلاثة أو أكثر من نوبات سنويا ، ويصيب 5 منفصلة إلى 8 ٪ من النساء مع عدم وجود عوامل مؤهبة 33.

وقد تم إنشاء نموذج الفأر VVC التجريبية واستخدامها لدراسة والمرضية المخاطية استجابة المضيف ل3،4،11،16،17،19،21،25،37 المبيضات. كما تم توظيف هذا النموذج لاختبار العلاجات المضادة للفطريات محتملة في الجسم الحي 13،24. نموذج يتطلب أن يكون الحفاظ على الحيوانات في حالة pseudoestrus لتختارimal المبيضات الاستعمار / 6،14،23 العدوى. في ظل هذه الظروف ، لن يكون تلقيح الحيوانات الفطرية المهبلية للكشف العبء لمدة أسابيع أو شهور. دراسات سابقة تظهر موازية عالية للغاية بين النموذج الحيواني والعدوى البشرية بالنسبة إلى الخصائص المناعية والفسيولوجية 3،16،21. الخلافات ، ولكن ، وتشمل عدم وجود المبيضات المهبلي والنباتات الطبيعية ودرجة الحموضة المهبلية محايدة في الفئران.

هنا ، علينا أن نظهر سلسلة من الطرق الرئيسية في الفأر نموذج المهبل والتي تشمل التلقيح المهبلي ، وجمع عينات من المهبل السريع ، وتقييم عبء الفطرية المهبلية ، والتحضيرات لاستخراج الأنسجة الخلوية / العزلة. ويعقب ذلك من خلال نتائج ممثلة لمكونات السائل غسل المهبل ، وعبء الفطرية ، وتجفيف المحاصيل الكريات البيض العقدة اللمفية. مع استخدام مواد التخدير ، ويمكن جمع عينات غسيل عند نقاط زمنية متعددة على نفس الفئران لتقييم الطولي للالعدوى / الاستعمار. وعلاوة على ذلك ، فإن هذا النموذج يتطلب أية عوامل مناعة لبدء العدوى ، والسماح للدراسات مناعية في ظل ظروف محددة المضيفة. أخيرا ، عرض نموذج وأسلوب كل هنا يمكن أن يحتمل أن يؤدي إلى استخدام منهجيات لدراسة الأمراض المعدية الأخرى لانخفاض المسالك التناسلية للإناث (البكتيرية والطفيلية والفيروسية) ، ومنها دفاعات المضيف المحلي أو النظامية.

Protocol

1. التلقيح المهبلي مع المبيضات البيض قبل ثلاثة أيام من التلقيح ، في حين أن تقييد الحيوان لكشف البطن ، وضخ 100 ميكرولتر من زيت السمسم يحتوي على 0،1-0،5 ملغ من استراديول β – تحت الجلد في أسفل البطن. دفع إبرة حوالي 5 إلى 10 م?…

Discussion

وقد تم إنشاء نموذج الفأر تجريبية من المهبل والمبيضات تستخدم تاريخيا على مدى العقود القليلة الماضية لدراسة المخاطية استجابة المضيف لالمبيضات وكذلك لاختبار العلاجات المضادة للفطريات 3،4،11،13،16،17،19،21،24 ، 25،37. قدم البروتوكولات تتضمن هنا أقل كفاءة وسائل…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

وأيد هذا العمل من قبل R01 AI32556 (المعدية ، المعهد الوطني للصحة). وأيد أيضا هذا العمل في جزء من ولاية لويزيانا الجنوبية واللقاحات مركز ولاية لويزيانا معهد بحوث الأمراض المعدية التي يرعاها المجلس ولاية لويزيانا من الحكام.

Materials

Name of the reagent Company Catalogue number Comments
Female CBA/J mice Charles River Laboratories 01C38 5-6 weeks of age
Candida albicans (3153A) National Collection of Pathogenic Fungi, UK NCPF3153  
Sesame oil Sigma-Aldrich S3547 Does not need to be pre-sterilized before use
Β-estradiol 17-valerate Sigma-Aldrich E1631 0.1-0.5mg in sesame oil
Phytone peptone Becton Dickinson 211906 Supplement with 0.1% glucose
Trypan blue solution Sigma-Aldrich T8154  
Sabouraud dextrose agar Becton Dickinson 211584  
Collagenase type IV Sigma-Aldrich C5138 0.25%
Dispase Invitrogen 17105-041 1.7 U/ml
Wire mesh screens TWP 060X060S0065W36T No. 60 mesh, stainless
Hanks’ balanced salt solution Invitrogen 24020-117  
CytoPrep fixative Fisher Scientific 12-570-10 Preserves smear slides
Papanicolaou stain EA-65 EMD Chemicals 7054X-85  
Papanicolaou stain OG-6 EMD Chemicals 7052X-85  
Harris’ Alum hematoxylin EMD Chemicals 638A-85  
Isoflurane Baxter Healthcare NDC 10019-773-60 Used with isoflurane vaporizer or in a drop system closed anesthetic chamber

References

  1. Abraham, M. C. Inducible immunity to Trichomonas vaginalis in a mouse model of vaginal infection. Infect. Immun. 64, 3571-3571 (1996).
  2. Black, C. A. Major histocompatibility haplotype does not impact the course of experimentally induced murine vaginal candidiasis. Lab. Anim. Sci. 49 (6), 668-668 (1999).
  3. Black, C. A. Acute neutropenia decreases inflammation associated with murine vaginal candidiasis but has no effect on the course of infection. Inf. Immun. 66, 1273-1273 (1998).
  4. Black, C. A. Increased severity of Candida vaginitis in BALB/c nu/nu mice versus the parent strain is not abrogated by adoptive transfer of T cell enriched lymphocytes. J. Reprod. Immunol. 45, 1-1 (1999).
  5. Buchannan, D. L. Role of stromal and epithelial estrogen receptors in vaginal epithelial proliferation, stratification, and cornification. Endocrinology. 139 (10), 4345-4345 (1998).
  6. Clemons, K. V. Genetic susceptibility of mice to Candida albicans vaginitis correlates with host estrogen sensitivity. Infect. Immun. 72, 4878-4878 (2004).
  7. Conrady, C. D., Halford, W. P., Carr, D. J. Loss of the type I interferon pathway increases vulnerability of mice to genital Herpes simplex virus 2 infection. J. Virol. 85 (4), 1625-1625 (2011).
  8. Cunha, G. R., Cooke, P. S., Kurita, T. Role of estromal-epithelial interaction in hormonal responses. Arch Histol Cytol. 67 (5), 417-417 (2004).
  9. Enjalbert, B. A multifunctional, synthetic Caussia princeps luciferase reporter for live imaging of Candida albicans infections. 77 (11), 4847-4847 (2009).
  10. Feinen, B. Critical role of Th17 responses in a murine model of Neisseria gonorrhoeae genital infection. Mucosal Immunol. 3 (3), 312-312 (2010).
  11. Fidel, P. L. Distinct protective host defenses against oral and vaginal candidiasis. Med. Mycol. 40, 359-359 (2002).
  12. Fidel, P. L. An intravaginal live Candida challenge in humans leads to new hypotheses for the immunopathogenesis of vulvovaginal candidiasis. Infect. Immun. 72, 2939-2939 (2004).
  13. Fidel, P. L., Cutright, J. L., Sobel, J. D. Efficacy of D0870 treatment of experimental Candida vaginitis. Antimicrob. Agents. Chemother. 41, 1455-1455 (1997).
  14. Fidel, P. L., Cutright, J. L., Steele, C. Effects of Reproductive hormones on experimental vaginal candidiasis. Infect. Immun. 68, 651-651 (2000).
  15. Fidel, P. L. A murine model of Candida glabrata vaginitis. J. Inf. Dis. 173, 425-425 (1996).
  16. Fidel, P. L. Analysis of vaginal cell populations during experimental vaginal candidiasis. Inf. Immun. 67, 3135-3135 (1999).
  17. Fidel, P. L., Lynch, M. E., Sobel, J. D. Candida-specific cell-mediated immunity is demonstrable in mice with experimental vaginal candidiasis. Infect. Immun. 61, 1990-1990 (1993).
  18. Fidel, P. L., Sobel, J. D. Immunopathogenesis of recurrent vulvovaginal candidiasis. Clin. Microbiol. Rev. 9. 9, 335-335 (1996).
  19. Fidel, P. L., Sobel, J. D., Zak, O., Sande, M. . Murine Models of Candida Vaginal Infections, In Experimental models in antimicrobial chemotherapy. , 741-748 (1999).
  20. Fidel, P. L., Vazquez, J. A., Sobel, J. D. Candida glabrata: Review of epidemiology, pathogenesis, and clinical disease with comparison to C. albicans. Clin. Microbiol. Rev. 12, 80-80 (1999).
  21. Fulurija, A., Ashman, R. B., Papadimitriou, J. M. Neutrophil depletion increases susceptibility to systemic and vaginal candidiasis in mice, and reveals differences between brain and kidney in mechanisms of host resistance. Microbiology. 142, 3487-3487 (1996).
  22. Gill, N. NK cells require type I IFN receptor for antiviral responses during genital HSV-2 infection. Cell Immunol. 269 (1), 29-29 (2011).
  23. Hamad, M., Abu-Elteen, K. H., Ghaleb, M. Estrogen-dependent induction of persistent vaginal candidosis in naive mice. Cell. Immunol. 47 (7), 304-304 (2004).
  24. Hamad, M. Utility of the oestrogen-dependent vaginal candidosis murine model in evaluating the efficacy of various therapies against vaginal Candida albicans infection. Mycoses. 49 (2), 104-104 (2006).
  25. LeBlanc, D. M., Barousse, M. M., Fidel, P. L. A role for dendritic cells in immunoregulation during experimental vaginal candidiasis. Infect. Immun. 74, 3213-3213 (2006).
  26. McGrory, T., Garber, G. E. Mouse intravaginal infection with Trichomonas vaginalis and role of Lactobacillus acidophilus in sustaining infection. Infect. Immun. 60, 2375-2379 (1992).
  27. Naglik, J. R., Fidel, P. L., Odds, F. C. Animal models of mucosal Candida infection. FEMS. Microbiol. Lett. 283 (2), 129-129 (2008).
  28. Nomanbhoy, F. Vaginal and oral epithelial cell anti-Candida activity. Inf. Immun. 70, 7081-7081 (2002).
  29. Pietrella, D. A beta-glucan-conjugate vaccine and anti-beta-glucan antibodies are effective against murine vaginal candidiasis as assessed by a novel in vivo imaging technique. Vaccine. 28 (7), 1717-1717 (2010).
  30. Redondo-Lopez, V., Cook, R. N., Sobel, J. D. Emerging role of Lactobacilli in the control and maintenance of the vaginal bacterial microflora. Rev Infect Dis. 12 (5), 856-856 (1990).
  31. Saavedra, M. Local production of chemokines during experimental vaginal candidiasis. Inf. Immun. 67, 5820-5820 (1999).
  32. Sobel, J. D. Pathogenesis and epidemiology of vulvovaginal candidiasis. Ann. N. Y. Acad. Sci. 544, 547-547 (1988).
  33. Sobel, J. D. Pathogenesis and treatment of recurrent vulvovaginal candidiasis. Clin. Infect. Dis. 14, S148-S153 (1992).
  34. Sobel, J. D. Vulvovaginal candidiasis: Epidemiologic, diagnostic, and therapeutic considerations. Am. J. Obstet. Gynecol. 178 (2), 203-203 (1998).
  35. Song, W. Local and humoral immune responses against primary and repeat Neisseria gonorrhoeae genital tract infections of 17β-estradiol-treated mice. Vaccine. 26, 5741-5741 (2008).
  36. Taylor, B. N. In vivo virulence of Candida albicans isolates causing mucosal infections in people infected with the human immunodeficiency virus. J. Infect. Dis. 182, 955-955 (2000).
  37. Taylor, B. N., Saavedra, M., Fidel, P. L. Local Th1/Th2 cytokine production during experimental vaginal candidiasis. Med. Mycol. 38, 419-419 (2000).
  38. Tirabassi, R. S. A mucosal vaccination approach for herpes simplex virus type 2. Vaccine. 29 (5), 1090-1090 (2011).
  39. Broeck, W. V. a. n. d. e. n., Derore, A., Simoens, P. Anatomy and nomenclature of murine lymph nodes: descriptive and nomenclatory standardization in BALB/cAnNCrl mice. J. Immunol. Methods. 312 (1-2), 12-12 (2006).
  40. Wormley, F. L., Chaiban, J., Fidel, P. L. Cell adhesion molecule and lymphocyte activation marker expression during experimental vaginal candidiasis. J. Immunol. Methods. 69, 5072-5072 (2001).
  41. Yano, J. Epithelial cell-derived S100 calcium-binding proteins as key mediators in the hallmark acute neutrophil response during Candida vaginitis. Infect. Immun. 78 (12), 5126-5126 (2010).

Play Video

Cite This Article
Yano, J., Fidel, Jr., P. L. Protocols for Vaginal Inoculation and Sample Collection in the Experimental Mouse Model of Candida vaginitis. J. Vis. Exp. (58), e3382, doi:10.3791/3382 (2011).

View Video