مفتاح التقنيات المستخدمة في تقييم<em> المبيضات</emموصوفة> المهبل في نموذج حيواني التجريبية. وسوف تسمح الأساليب جمع العينات السريع لمفاوي من المهبل وتجفيف الغدد الليمفاوية أسفل الظهر. هذه التقنيات يمكن أن تؤدي إلى نماذج الماوس من الأمراض الأخرى في المسالك التناسلية للإناث أقل.
الفرجية المهبلية المبيضات (VVC) ، التي تسببها الأنواع المبيضات ، هو عدوى فطرية لانخفاض المسالك التناسلية للإناث الذي يؤثر على ما يقرب من 75 ٪ من النساء الأصحاء خلال سنوات الإنجاب 18،32-34. وتشمل العوامل المؤهبة استخدام المضادات الحيوية ، والسكري غير المنضبط واضطراب في مستويات الهورمونات التناسلية بسبب الحمل ، وحبوب منع الحمل أو العلاج بالهرمونات البديلة 33،34. VVC المتكررة (RVVC) ، على النحو المحدد ثلاثة أو أكثر من نوبات سنويا ، ويصيب 5 منفصلة إلى 8 ٪ من النساء مع عدم وجود عوامل مؤهبة 33.
وقد تم إنشاء نموذج الفأر VVC التجريبية واستخدامها لدراسة والمرضية المخاطية استجابة المضيف ل3،4،11،16،17،19،21،25،37 المبيضات. كما تم توظيف هذا النموذج لاختبار العلاجات المضادة للفطريات محتملة في الجسم الحي 13،24. نموذج يتطلب أن يكون الحفاظ على الحيوانات في حالة pseudoestrus لتختارimal المبيضات الاستعمار / 6،14،23 العدوى. في ظل هذه الظروف ، لن يكون تلقيح الحيوانات الفطرية المهبلية للكشف العبء لمدة أسابيع أو شهور. دراسات سابقة تظهر موازية عالية للغاية بين النموذج الحيواني والعدوى البشرية بالنسبة إلى الخصائص المناعية والفسيولوجية 3،16،21. الخلافات ، ولكن ، وتشمل عدم وجود المبيضات المهبلي والنباتات الطبيعية ودرجة الحموضة المهبلية محايدة في الفئران.
هنا ، علينا أن نظهر سلسلة من الطرق الرئيسية في الفأر نموذج المهبل والتي تشمل التلقيح المهبلي ، وجمع عينات من المهبل السريع ، وتقييم عبء الفطرية المهبلية ، والتحضيرات لاستخراج الأنسجة الخلوية / العزلة. ويعقب ذلك من خلال نتائج ممثلة لمكونات السائل غسل المهبل ، وعبء الفطرية ، وتجفيف المحاصيل الكريات البيض العقدة اللمفية. مع استخدام مواد التخدير ، ويمكن جمع عينات غسيل عند نقاط زمنية متعددة على نفس الفئران لتقييم الطولي للالعدوى / الاستعمار. وعلاوة على ذلك ، فإن هذا النموذج يتطلب أية عوامل مناعة لبدء العدوى ، والسماح للدراسات مناعية في ظل ظروف محددة المضيفة. أخيرا ، عرض نموذج وأسلوب كل هنا يمكن أن يحتمل أن يؤدي إلى استخدام منهجيات لدراسة الأمراض المعدية الأخرى لانخفاض المسالك التناسلية للإناث (البكتيرية والطفيلية والفيروسية) ، ومنها دفاعات المضيف المحلي أو النظامية.
وقد تم إنشاء نموذج الفأر تجريبية من المهبل والمبيضات تستخدم تاريخيا على مدى العقود القليلة الماضية لدراسة المخاطية استجابة المضيف لالمبيضات وكذلك لاختبار العلاجات المضادة للفطريات 3،4،11،13،16،17،19،21،24 ، 25،37. قدم البروتوكولات تتضمن هنا أقل كفاءة وسائل…
The authors have nothing to disclose.
وأيد هذا العمل من قبل R01 AI32556 (المعدية ، المعهد الوطني للصحة). وأيد أيضا هذا العمل في جزء من ولاية لويزيانا الجنوبية واللقاحات مركز ولاية لويزيانا معهد بحوث الأمراض المعدية التي يرعاها المجلس ولاية لويزيانا من الحكام.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
Female CBA/J mice | Charles River Laboratories | 01C38 | 5-6 weeks of age |
Candida albicans (3153A) | National Collection of Pathogenic Fungi, UK | NCPF3153 | |
Sesame oil | Sigma-Aldrich | S3547 | Does not need to be pre-sterilized before use |
Β-estradiol 17-valerate | Sigma-Aldrich | E1631 | 0.1-0.5mg in sesame oil |
Phytone peptone | Becton Dickinson | 211906 | Supplement with 0.1% glucose |
Trypan blue solution | Sigma-Aldrich | T8154 | |
Sabouraud dextrose agar | Becton Dickinson | 211584 | |
Collagenase type IV | Sigma-Aldrich | C5138 | 0.25% |
Dispase | Invitrogen | 17105-041 | 1.7 U/ml |
Wire mesh screens | TWP | 060X060S0065W36T | No. 60 mesh, stainless |
Hanks’ balanced salt solution | Invitrogen | 24020-117 | |
CytoPrep fixative | Fisher Scientific | 12-570-10 | Preserves smear slides |
Papanicolaou stain EA-65 | EMD Chemicals | 7054X-85 | |
Papanicolaou stain OG-6 | EMD Chemicals | 7052X-85 | |
Harris’ Alum hematoxylin | EMD Chemicals | 638A-85 | |
Isoflurane | Baxter Healthcare | NDC 10019-773-60 | Used with isoflurane vaporizer or in a drop system closed anesthetic chamber |