Основные методы, используемые в оценке<em> Candida</em> Вагинита в экспериментальной животной модели описаны. Методы позволят быстрый сбор образцов вагинального и лимфоцитов из слив поясничных лимфатических узлов. Эти методы могут привести к мышиных моделях других заболеваний в женской нижних половых путей.
Вульвовагинального кандидоза (ВВЦ), вызванного видами Candida, является грибковой инфекцией нижних половых путей женщины, которая затрагивает около 75% здоровых женщин в течение репродуктивного возраста 18,32-34. Предрасполагающие факторы включают антибиотик использования, неконтролируемого диабета и нарушение репродуктивных гормонов в связи с беременностью, оральных контрацептивов или гормональной терапии 33,34. Периодические ВВЦ (RVVC), определяется как три и более эпизодов в год, влияет на отдельном от 5 до 8% женщин, не имеющих предрасполагающие факторы 33.
Экспериментальной модели мышей ВВЦ была создана и используется для изучения патогенеза и слизистых ответ принимающей Candida 3,4,11,16,17,19,21,25,37. Эта модель также была использована для испытаний потенциальной противогрибковое лечение в естественных условиях 13,24. Модель предполагает, что животные содержаться в состоянии выбрать для pseudoestrusimal Candida колонизации / инфекции 6,14,23. В таких условиях, затравленных животных будет обнаружено вагинальных грибковых нагрузку на несколько недель или месяцев. Прошлые исследования показывают чрезвычайно высокую параллель между моделью человека и животных инфекция относительно иммунологических и физиологических свойств 3,16,21. Различия, однако, в том числе отсутствие Candida в качестве нормальной влагалищной флоры и нейтральный рН влагалища у мышей.
Здесь мы демонстрируем ряд ключевых методов в модели вагинит мыши, которые включают вагинальные прививки, быстрый сбор образцов вагинального, оценка вагинальных грибковых бремя, и тканевые препараты для сотовых добычи / изоляции. Далее следуют представитель результаты для трехсторонних промывания влагалища жидкости, грибковые бремя, и осушения лимфатических узлов дает лейкоцитов. При использовании анестетиков, промывание образцы могут быть собраны в нескольких точках времени на тех же мышей для продольной оценкиинфекции / колонизации. Кроме того, эта модель не требует иммуносупрессивных препаратов для инфицирования, что позволяет иммунологических исследований при определенных условиях хозяина. Наконец, модель и каждая техника введенные здесь, может привести к использованию методологии для изучения других инфекционных заболеваний нижних женских половых путей (бактериальные, паразитарные, вирусные) и соответствующего местного или системного защиту хозяина.
Экспериментальной модели мышей Candida вагинит был создан и исторически использовались в течение последних нескольких десятилетий исследования слизистой оболочки ответ принимающей Candida, а также для тестирования противогрибковое лечение 3,4,11,13,16,17,19,21,24, 25,37. Протоколы, пре?…
The authors have nothing to disclose.
Эта работа была поддержана R01 AI32556 (NIAID, Национальный институт здравоохранения). Эта работа также была частично поддержана Луизиана вакцины Центр и Юг Луизиана Институт исследований в области инфекционных болезней поддержке Луизиана Совет регентов.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
Female CBA/J mice | Charles River Laboratories | 01C38 | 5-6 weeks of age |
Candida albicans (3153A) | National Collection of Pathogenic Fungi, UK | NCPF3153 | |
Sesame oil | Sigma-Aldrich | S3547 | Does not need to be pre-sterilized before use |
Β-estradiol 17-valerate | Sigma-Aldrich | E1631 | 0.1-0.5mg in sesame oil |
Phytone peptone | Becton Dickinson | 211906 | Supplement with 0.1% glucose |
Trypan blue solution | Sigma-Aldrich | T8154 | |
Sabouraud dextrose agar | Becton Dickinson | 211584 | |
Collagenase type IV | Sigma-Aldrich | C5138 | 0.25% |
Dispase | Invitrogen | 17105-041 | 1.7 U/ml |
Wire mesh screens | TWP | 060X060S0065W36T | No. 60 mesh, stainless |
Hanks’ balanced salt solution | Invitrogen | 24020-117 | |
CytoPrep fixative | Fisher Scientific | 12-570-10 | Preserves smear slides |
Papanicolaou stain EA-65 | EMD Chemicals | 7054X-85 | |
Papanicolaou stain OG-6 | EMD Chemicals | 7052X-85 | |
Harris’ Alum hematoxylin | EMD Chemicals | 638A-85 | |
Isoflurane | Baxter Healthcare | NDC 10019-773-60 | Used with isoflurane vaporizer or in a drop system closed anesthetic chamber |