Summary

Протоколы для Вагинальные Прививка и сбора проб в экспериментальной модели мышей Candida Вагинит

Published: December 08, 2011
doi:

Summary

Основные методы, используемые в оценке<em> Candida</em> Вагинита в экспериментальной животной модели описаны. Методы позволят быстрый сбор образцов вагинального и лимфоцитов из слив поясничных лимфатических узлов. Эти методы могут привести к мышиных моделях других заболеваний в женской нижних половых путей.

Abstract

Вульвовагинального кандидоза (ВВЦ), вызванного видами Candida, является грибковой инфекцией нижних половых путей женщины, которая затрагивает около 75% здоровых женщин в течение репродуктивного возраста 18,32-34. Предрасполагающие факторы включают антибиотик использования, неконтролируемого диабета и нарушение репродуктивных гормонов в связи с беременностью, оральных контрацептивов или гормональной терапии 33,34. Периодические ВВЦ (RVVC), определяется как три и более эпизодов в год, влияет на отдельном от 5 до 8% женщин, не имеющих предрасполагающие факторы 33.

Экспериментальной модели мышей ВВЦ была создана и используется для изучения патогенеза и слизистых ответ принимающей Candida 3,4,11,16,17,19,21,25,37. Эта модель также была использована для испытаний потенциальной противогрибковое лечение в естественных условиях 13,24. Модель предполагает, что животные содержаться в состоянии выбрать для pseudoestrusimal Candida колонизации / инфекции 6,14,23. В таких условиях, затравленных животных будет обнаружено вагинальных грибковых нагрузку на несколько недель или месяцев. Прошлые исследования показывают чрезвычайно высокую параллель между моделью человека и животных инфекция относительно иммунологических и физиологических свойств 3,16,21. Различия, однако, в том числе отсутствие Candida в качестве нормальной влагалищной флоры и нейтральный рН влагалища у мышей.

Здесь мы демонстрируем ряд ключевых методов в модели вагинит мыши, которые включают вагинальные прививки, быстрый сбор образцов вагинального, оценка вагинальных грибковых бремя, и тканевые препараты для сотовых добычи / изоляции. Далее следуют представитель результаты для трехсторонних промывания влагалища жидкости, грибковые бремя, и осушения лимфатических узлов дает лейкоцитов. При использовании анестетиков, промывание образцы могут быть собраны в нескольких точках времени на тех же мышей для продольной оценкиинфекции / колонизации. Кроме того, эта модель не требует иммуносупрессивных препаратов для инфицирования, что позволяет иммунологических исследований при определенных условиях хозяина. Наконец, модель и каждая техника введенные здесь, может привести к использованию методологии для изучения других инфекционных заболеваний нижних женских половых путей (бактериальные, паразитарные, вирусные) и соответствующего местного или системного защиту хозяина.

Protocol

1. Вагинальные инокуляции Candida Albicans За три дня до прививки, в то время как сдерживающее животных подвергать живот, вводят 100 мкл кунжутное масло, содержащее 0,1-0,5 мг β-эстрадиола подкожно в нижнюю часть живота. Advance иглу от 5 до 10 мм сбоку от кожи, чтобы минимизировать утечки из мес…

Discussion

Экспериментальной модели мышей Candida вагинит был создан и исторически использовались в течение последних нескольких десятилетий исследования слизистой оболочки ответ принимающей Candida, а также для тестирования противогрибковое лечение 3,4,11,13,16,17,19,21,24, 25,37. Протоколы, пре?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Эта работа была поддержана R01 AI32556 (NIAID, Национальный институт здравоохранения). Эта работа также была частично поддержана Луизиана вакцины Центр и Юг Луизиана Институт исследований в области инфекционных болезней поддержке Луизиана Совет регентов.

Materials

Name of the reagent Company Catalogue number Comments
Female CBA/J mice Charles River Laboratories 01C38 5-6 weeks of age
Candida albicans (3153A) National Collection of Pathogenic Fungi, UK NCPF3153  
Sesame oil Sigma-Aldrich S3547 Does not need to be pre-sterilized before use
Β-estradiol 17-valerate Sigma-Aldrich E1631 0.1-0.5mg in sesame oil
Phytone peptone Becton Dickinson 211906 Supplement with 0.1% glucose
Trypan blue solution Sigma-Aldrich T8154  
Sabouraud dextrose agar Becton Dickinson 211584  
Collagenase type IV Sigma-Aldrich C5138 0.25%
Dispase Invitrogen 17105-041 1.7 U/ml
Wire mesh screens TWP 060X060S0065W36T No. 60 mesh, stainless
Hanks’ balanced salt solution Invitrogen 24020-117  
CytoPrep fixative Fisher Scientific 12-570-10 Preserves smear slides
Papanicolaou stain EA-65 EMD Chemicals 7054X-85  
Papanicolaou stain OG-6 EMD Chemicals 7052X-85  
Harris’ Alum hematoxylin EMD Chemicals 638A-85  
Isoflurane Baxter Healthcare NDC 10019-773-60 Used with isoflurane vaporizer or in a drop system closed anesthetic chamber

References

  1. Abraham, M. C. Inducible immunity to Trichomonas vaginalis in a mouse model of vaginal infection. Infect. Immun. 64, 3571-3571 (1996).
  2. Black, C. A. Major histocompatibility haplotype does not impact the course of experimentally induced murine vaginal candidiasis. Lab. Anim. Sci. 49 (6), 668-668 (1999).
  3. Black, C. A. Acute neutropenia decreases inflammation associated with murine vaginal candidiasis but has no effect on the course of infection. Inf. Immun. 66, 1273-1273 (1998).
  4. Black, C. A. Increased severity of Candida vaginitis in BALB/c nu/nu mice versus the parent strain is not abrogated by adoptive transfer of T cell enriched lymphocytes. J. Reprod. Immunol. 45, 1-1 (1999).
  5. Buchannan, D. L. Role of stromal and epithelial estrogen receptors in vaginal epithelial proliferation, stratification, and cornification. Endocrinology. 139 (10), 4345-4345 (1998).
  6. Clemons, K. V. Genetic susceptibility of mice to Candida albicans vaginitis correlates with host estrogen sensitivity. Infect. Immun. 72, 4878-4878 (2004).
  7. Conrady, C. D., Halford, W. P., Carr, D. J. Loss of the type I interferon pathway increases vulnerability of mice to genital Herpes simplex virus 2 infection. J. Virol. 85 (4), 1625-1625 (2011).
  8. Cunha, G. R., Cooke, P. S., Kurita, T. Role of estromal-epithelial interaction in hormonal responses. Arch Histol Cytol. 67 (5), 417-417 (2004).
  9. Enjalbert, B. A multifunctional, synthetic Caussia princeps luciferase reporter for live imaging of Candida albicans infections. 77 (11), 4847-4847 (2009).
  10. Feinen, B. Critical role of Th17 responses in a murine model of Neisseria gonorrhoeae genital infection. Mucosal Immunol. 3 (3), 312-312 (2010).
  11. Fidel, P. L. Distinct protective host defenses against oral and vaginal candidiasis. Med. Mycol. 40, 359-359 (2002).
  12. Fidel, P. L. An intravaginal live Candida challenge in humans leads to new hypotheses for the immunopathogenesis of vulvovaginal candidiasis. Infect. Immun. 72, 2939-2939 (2004).
  13. Fidel, P. L., Cutright, J. L., Sobel, J. D. Efficacy of D0870 treatment of experimental Candida vaginitis. Antimicrob. Agents. Chemother. 41, 1455-1455 (1997).
  14. Fidel, P. L., Cutright, J. L., Steele, C. Effects of Reproductive hormones on experimental vaginal candidiasis. Infect. Immun. 68, 651-651 (2000).
  15. Fidel, P. L. A murine model of Candida glabrata vaginitis. J. Inf. Dis. 173, 425-425 (1996).
  16. Fidel, P. L. Analysis of vaginal cell populations during experimental vaginal candidiasis. Inf. Immun. 67, 3135-3135 (1999).
  17. Fidel, P. L., Lynch, M. E., Sobel, J. D. Candida-specific cell-mediated immunity is demonstrable in mice with experimental vaginal candidiasis. Infect. Immun. 61, 1990-1990 (1993).
  18. Fidel, P. L., Sobel, J. D. Immunopathogenesis of recurrent vulvovaginal candidiasis. Clin. Microbiol. Rev. 9. 9, 335-335 (1996).
  19. Fidel, P. L., Sobel, J. D., Zak, O., Sande, M. . Murine Models of Candida Vaginal Infections, In Experimental models in antimicrobial chemotherapy. , 741-748 (1999).
  20. Fidel, P. L., Vazquez, J. A., Sobel, J. D. Candida glabrata: Review of epidemiology, pathogenesis, and clinical disease with comparison to C. albicans. Clin. Microbiol. Rev. 12, 80-80 (1999).
  21. Fulurija, A., Ashman, R. B., Papadimitriou, J. M. Neutrophil depletion increases susceptibility to systemic and vaginal candidiasis in mice, and reveals differences between brain and kidney in mechanisms of host resistance. Microbiology. 142, 3487-3487 (1996).
  22. Gill, N. NK cells require type I IFN receptor for antiviral responses during genital HSV-2 infection. Cell Immunol. 269 (1), 29-29 (2011).
  23. Hamad, M., Abu-Elteen, K. H., Ghaleb, M. Estrogen-dependent induction of persistent vaginal candidosis in naive mice. Cell. Immunol. 47 (7), 304-304 (2004).
  24. Hamad, M. Utility of the oestrogen-dependent vaginal candidosis murine model in evaluating the efficacy of various therapies against vaginal Candida albicans infection. Mycoses. 49 (2), 104-104 (2006).
  25. LeBlanc, D. M., Barousse, M. M., Fidel, P. L. A role for dendritic cells in immunoregulation during experimental vaginal candidiasis. Infect. Immun. 74, 3213-3213 (2006).
  26. McGrory, T., Garber, G. E. Mouse intravaginal infection with Trichomonas vaginalis and role of Lactobacillus acidophilus in sustaining infection. Infect. Immun. 60, 2375-2379 (1992).
  27. Naglik, J. R., Fidel, P. L., Odds, F. C. Animal models of mucosal Candida infection. FEMS. Microbiol. Lett. 283 (2), 129-129 (2008).
  28. Nomanbhoy, F. Vaginal and oral epithelial cell anti-Candida activity. Inf. Immun. 70, 7081-7081 (2002).
  29. Pietrella, D. A beta-glucan-conjugate vaccine and anti-beta-glucan antibodies are effective against murine vaginal candidiasis as assessed by a novel in vivo imaging technique. Vaccine. 28 (7), 1717-1717 (2010).
  30. Redondo-Lopez, V., Cook, R. N., Sobel, J. D. Emerging role of Lactobacilli in the control and maintenance of the vaginal bacterial microflora. Rev Infect Dis. 12 (5), 856-856 (1990).
  31. Saavedra, M. Local production of chemokines during experimental vaginal candidiasis. Inf. Immun. 67, 5820-5820 (1999).
  32. Sobel, J. D. Pathogenesis and epidemiology of vulvovaginal candidiasis. Ann. N. Y. Acad. Sci. 544, 547-547 (1988).
  33. Sobel, J. D. Pathogenesis and treatment of recurrent vulvovaginal candidiasis. Clin. Infect. Dis. 14, S148-S153 (1992).
  34. Sobel, J. D. Vulvovaginal candidiasis: Epidemiologic, diagnostic, and therapeutic considerations. Am. J. Obstet. Gynecol. 178 (2), 203-203 (1998).
  35. Song, W. Local and humoral immune responses against primary and repeat Neisseria gonorrhoeae genital tract infections of 17β-estradiol-treated mice. Vaccine. 26, 5741-5741 (2008).
  36. Taylor, B. N. In vivo virulence of Candida albicans isolates causing mucosal infections in people infected with the human immunodeficiency virus. J. Infect. Dis. 182, 955-955 (2000).
  37. Taylor, B. N., Saavedra, M., Fidel, P. L. Local Th1/Th2 cytokine production during experimental vaginal candidiasis. Med. Mycol. 38, 419-419 (2000).
  38. Tirabassi, R. S. A mucosal vaccination approach for herpes simplex virus type 2. Vaccine. 29 (5), 1090-1090 (2011).
  39. Broeck, W. V. a. n. d. e. n., Derore, A., Simoens, P. Anatomy and nomenclature of murine lymph nodes: descriptive and nomenclatory standardization in BALB/cAnNCrl mice. J. Immunol. Methods. 312 (1-2), 12-12 (2006).
  40. Wormley, F. L., Chaiban, J., Fidel, P. L. Cell adhesion molecule and lymphocyte activation marker expression during experimental vaginal candidiasis. J. Immunol. Methods. 69, 5072-5072 (2001).
  41. Yano, J. Epithelial cell-derived S100 calcium-binding proteins as key mediators in the hallmark acute neutrophil response during Candida vaginitis. Infect. Immun. 78 (12), 5126-5126 (2010).

Play Video

Cite This Article
Yano, J., Fidel, Jr., P. L. Protocols for Vaginal Inoculation and Sample Collection in the Experimental Mouse Model of Candida vaginitis. J. Vis. Exp. (58), e3382, doi:10.3791/3382 (2011).

View Video