Protocoles pour l'inoculation vaginale et prélèvement d'échantillons dans le modèle expérimental chez la souris des Candida Vaginite
Summary
Techniques clés à utiliser dans l'évaluation des<em> Candida</emVaginite> dans un modèle animal expérimental sont décrits. Les méthodes permettant la collecte rapide des échantillons vaginaux et des lymphocytes de ganglions lymphatiques lombaires. Ces techniques pourraient donner lieu à des souris modèles de d'autres maladies dans le tractus génital féminin inférieur.
Abstract
Vulvo-vaginale candidose (VVC), causée par les espèces de Candida, est une infection fongique des voies génitales inférieures femelles qui affecte environ 75% des femmes en bonne santé pendant leurs années reproductives 18,32-34. Les facteurs prédisposants comprennent l'utilisation des antibiotiques, le diabète non contrôlé et la perturbation des niveaux d'hormones de reproduction en raison de la grossesse, contraceptifs oraux ou traitements hormonaux substitutifs 33,34. VVC récurrente (RVVC), définie comme trois épisodes ou plus par an, affecte un 5 séparée à 8% des femmes sans facteurs prédisposants 33.
Un modèle expérimental chez la souris de VVC a été établi et utilisé pour étudier la pathogenèse et la réponse de l'hôte des muqueuses à Candida 3,4,11,16,17,19,21,25,37. Ce modèle a également été employée pour tester le potentiel de traitements antifongiques in vivo 13,24. Le modèle exige que les animaux soient maintenus dans un état de pseudoestrus pour optiMAL Candida colonisation / infection 6,14,23. Dans ces conditions, les animaux inoculés aura détectable vaginale charge fongique pendant des semaines ou des mois. Des études antérieures montrent un parallèle extrêmement élevée entre le modèle animal et l'infection humaine par rapport à des propriétés immunologiques et physiologiques 3,16,21. Les différences, cependant, incluent un manque de Candida flore vaginale normale et un pH neutre vaginale chez la souris.
Ici, nous démontrons une série de méthodes clés dans le modèle de la souris vaginite qui incluent l'inoculation vaginale, la collecte rapide des échantillons vaginaux, évaluation de la charge fongique vaginale, et des préparations de tissus cellulaires pour l'extraction / isolement. Il est suivi par des résultats représentatifs pour constituants de liquide de lavage vaginal, charge fongique, et le drainage des ganglions lymphatiques rendements des leucocytes. Avec l'utilisation d'anesthésiques, des échantillons de lavage peuvent être collectées à plusieurs moments sur les mêmes souris pour l'évaluation longitudinale deinfection / colonisation. Par ailleurs, ce modèle ne nécessite pas des agents immunosuppresseurs pour déclencher l'infection, permettant des études immunologiques dans des conditions d'accueil définie. Enfin, le modèle et chaque technique présenté ici pourrait donner lieu à l'utilisation des méthodologies d'examiner d'autres maladies infectieuses du tractus génital inférieur féminine (bactériennes, parasitaires, virales) et défenses de l'hôte respectifs locales ou systémiques.
Protocol
Discussion
Un modèle expérimental chez la souris de Candida vaginite a été établi et historiquement utilisé pour les dernières décennies pour étudier la réponse d'hôte des muqueuses à Candida ainsi que pour les tests traitements antifongiques 3,4,11,13,16,17,19,21,24, 25,37. Les protocoles présentés ici intègrent des méthodes efficaces et moins de main-d'œuvre, et semblent être l'un des systèmes modèle le plus optimisé de Candida vaginite décrites à ce jour. …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ce travail a été soutenu par R01 AI32556 (NIAID, Institut national de santé). Ce travail a également été soutenu en partie par la Louisiane Vaccine Center et sud de la Louisiane Institut de recherche sur les maladies infectieuses commandité par le Conseil ontarien des affaires collégiales en Louisiane.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Female CBA/J mice | Charles River Laboratories | 01C38 | 5-6 weeks of age |
| Candida albicans (3153A) | National Collection of Pathogenic Fungi, UK | NCPF3153 | |
| Sesame oil | Sigma-Aldrich | S3547 | Does not need to be pre-sterilized before use |
| Β-estradiol 17-valerate | Sigma-Aldrich | E1631 | 0.1-0.5mg in sesame oil |
| Phytone peptone | Becton Dickinson | 211906 | Supplement with 0.1% glucose |
| Trypan blue solution | Sigma-Aldrich | T8154 | |
| Sabouraud dextrose agar | Becton Dickinson | 211584 | |
| Collagenase type IV | Sigma-Aldrich | C5138 | 0.25% |
| Dispase | Invitrogen | 17105-041 | 1.7 U/ml |
| Wire mesh screens | TWP | 060X060S0065W36T | No. 60 mesh, stainless |
| Hanks’ balanced salt solution | Invitrogen | 24020-117 | |
| CytoPrep fixative | Fisher Scientific | 12-570-10 | Preserves smear slides |
| Papanicolaou stain EA-65 | EMD Chemicals | 7054X-85 | |
| Papanicolaou stain OG-6 | EMD Chemicals | 7052X-85 | |
| Harris’ Alum hematoxylin | EMD Chemicals | 638A-85 | |
| Isoflurane | Baxter Healthcare | NDC 10019-773-60 | Used with isoflurane vaporizer or in a drop system closed anesthetic chamber |
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