Protocollen voor Vaginale Inenting en Sample Collection in het experimenteel muismodel van Candida Vaginitis
Summary
Belangrijke technieken om te worden gebruikt bij de evaluatie van<em> Candida</em> Vaginitis in een experimenteel diermodel beschreven. De methoden zal een snelle inzameling van vaginale specimens en lymfocyten uit drainerende lumbale lymfeklieren. Deze technieken zou kunnen leiden tot muismodellen van andere ziekten in de vrouwelijke lagere genitale tractus.
Abstract
Vulvovaginale candidiasis (VVC), veroorzaakt door Candida-soorten, is een schimmelinfectie van de lagere vrouwelijke geslachtsorganen dat ongeveer 75% van anders gezonde vrouwen treft tijdens hun reproductieve jaren 18,32-34. Predisponerende factoren zijn onder meer het gebruik van antibiotica, ongecontroleerde diabetes en verstoring van de voortplanting hormoonspiegels ten gevolge van zwangerschap, orale anticonceptiva of hormoonvervangende therapieën 33,34. Recurrente VVC (RVVC), gedefinieerd als drie of meer episodes per jaar, van invloed op een aparte 5 tot 8% van de vrouwen met geen predisponerende factoren 33.
Een experimenteel muismodel van VVC is vastgesteld en gebruikt om de pathogenese en mucosale gastheer reactie op Candida 3,4,11,16,17,19,21,25,37 studeren. Dit model is ook gebruikt om potentiële anti-schimmel therapieën te testen in vivo 13,24. Het model vereist dat de dieren worden gehouden in een staat van pseudoestrus voor optiMAL Candida kolonisatie / infectie 6,14,23. Onder dergelijke omstandigheden zal geënte dieren hebben aantoonbaar vaginale schimmel last voor weken tot maanden. Verleden studies tonen een extreem hoge parallel tussen het diermodel en menselijke besmetting met betrekking tot immunologische en fysiologische eigenschappen van 3,16,21. Verschillen zijn echter ook een gebrek aan Candida als normale vaginale flora en een neutrale vaginale pH in de muizen.
Hier tonen we een reeks belangrijke methoden in de muis vaginitis model dat vaginale inenting, een snelle inzameling van vaginale exemplaren, de beoordeling van de vaginale schimmel last, en weefsel de voorbereidingen voor mobiele extractie / isolatie te nemen. Dit wordt gevolgd door representatieve resultaten voor de bestanddelen van vaginale lavage vocht, schimmel last, en de drainerende lymfeklier leukocyten oplevert. Met het gebruik van verdoving, kan lavage monsters worden verzameld op verschillende tijdstippen op dezelfde muizen voor longitudinale evaluatie van deinfectie / kolonisatie. Bovendien is dit model vereist geen immunosuppressieve middelen te initiëren infectie, waardoor immunologische studies onder gedefinieerde omstandigheden gastheer. Ten slotte is het model en elke techniek introduceerde hier zou kunnen leiden tot het gebruik van de methoden om andere besmettelijke ziekten van de lagere vrouwelijke geslachtsorganen (bacteriële, parasitaire, virale) en de respectieve lokale of systemische afweer van de gastheer te onderzoeken te geven.
Protocol
Discussion
Een experimenteel muismodel van Candida vaginitis is vastgesteld en historisch gebruikt voor de afgelopen decennia mucosale gastheer reactie op Candida studie en voor het testen van antischimmel therapieën 3,4,11,13,16,17,19,21,24, 25,37. De protocollen die hier nemen efficiënte en minder arbeidsintensieve methoden, en lijken een van de meest optimale model systemen van Candida vaginitis beschreven. Deze technieken maken een snelle kwantificering van de schimmel last en het verzam…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Dit werk werd ondersteund door R01 AI32556 (NIAID, National Institute of Health). Dit werk werd ook gedeeltelijk ondersteund door Louisiana Vaccine Center en Zuid-Louisiana Instituut voor Besmettelijke Ziekte onderzoek gesponsord door het Louisiana College van Regenten.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Female CBA/J mice | Charles River Laboratories | 01C38 | 5-6 weeks of age |
| Candida albicans (3153A) | National Collection of Pathogenic Fungi, UK | NCPF3153 | |
| Sesame oil | Sigma-Aldrich | S3547 | Does not need to be pre-sterilized before use |
| Β-estradiol 17-valerate | Sigma-Aldrich | E1631 | 0.1-0.5mg in sesame oil |
| Phytone peptone | Becton Dickinson | 211906 | Supplement with 0.1% glucose |
| Trypan blue solution | Sigma-Aldrich | T8154 | |
| Sabouraud dextrose agar | Becton Dickinson | 211584 | |
| Collagenase type IV | Sigma-Aldrich | C5138 | 0.25% |
| Dispase | Invitrogen | 17105-041 | 1.7 U/ml |
| Wire mesh screens | TWP | 060X060S0065W36T | No. 60 mesh, stainless |
| Hanks’ balanced salt solution | Invitrogen | 24020-117 | |
| CytoPrep fixative | Fisher Scientific | 12-570-10 | Preserves smear slides |
| Papanicolaou stain EA-65 | EMD Chemicals | 7054X-85 | |
| Papanicolaou stain OG-6 | EMD Chemicals | 7052X-85 | |
| Harris’ Alum hematoxylin | EMD Chemicals | 638A-85 | |
| Isoflurane | Baxter Healthcare | NDC 10019-773-60 | Used with isoflurane vaporizer or in a drop system closed anesthetic chamber |
References
- Abraham, M. C. Inducible immunity to Trichomonas vaginalis in a mouse model of vaginal infection. Infect. Immun. 64, 3571-3571 (1996).
- Black, C. A. Major histocompatibility haplotype does not impact the course of experimentally induced murine vaginal candidiasis. Lab. Anim. Sci. 49 (6), 668-668 (1999).
- Black, C. A. Acute neutropenia decreases inflammation associated with murine vaginal candidiasis but has no effect on the course of infection. Inf. Immun. 66, 1273-1273 (1998).
- Black, C. A. Increased severity of Candida vaginitis in BALB/c nu/nu mice versus the parent strain is not abrogated by adoptive transfer of T cell enriched lymphocytes. J. Reprod. Immunol. 45, 1-1 (1999).
- Buchannan, D. L. Role of stromal and epithelial estrogen receptors in vaginal epithelial proliferation, stratification, and cornification. Endocrinology. 139 (10), 4345-4345 (1998).
- Clemons, K. V. Genetic susceptibility of mice to Candida albicans vaginitis correlates with host estrogen sensitivity. Infect. Immun. 72, 4878-4878 (2004).
- Conrady, C. D., Halford, W. P., Carr, D. J. Loss of the type I interferon pathway increases vulnerability of mice to genital Herpes simplex virus 2 infection. J. Virol. 85 (4), 1625-1625 (2011).
- Cunha, G. R., Cooke, P. S., Kurita, T. Role of estromal-epithelial interaction in hormonal responses. Arch Histol Cytol. 67 (5), 417-417 (2004).
- Enjalbert, B. A multifunctional, synthetic Caussia princeps luciferase reporter for live imaging of Candida albicans infections. 77 (11), 4847-4847 (2009).
- Feinen, B. Critical role of Th17 responses in a murine model of Neisseria gonorrhoeae genital infection. Mucosal Immunol. 3 (3), 312-312 (2010).
- Fidel, P. L. Distinct protective host defenses against oral and vaginal candidiasis. Med. Mycol. 40, 359-359 (2002).
- Fidel, P. L. An intravaginal live Candida challenge in humans leads to new hypotheses for the immunopathogenesis of vulvovaginal candidiasis. Infect. Immun. 72, 2939-2939 (2004).
- Fidel, P. L., Cutright, J. L., Sobel, J. D. Efficacy of D0870 treatment of experimental Candida vaginitis. Antimicrob. Agents. Chemother. 41, 1455-1455 (1997).
- Fidel, P. L., Cutright, J. L., Steele, C. Effects of Reproductive hormones on experimental vaginal candidiasis. Infect. Immun. 68, 651-651 (2000).
- Fidel, P. L. A murine model of Candida glabrata vaginitis. J. Inf. Dis. 173, 425-425 (1996).
- Fidel, P. L. Analysis of vaginal cell populations during experimental vaginal candidiasis. Inf. Immun. 67, 3135-3135 (1999).
- Fidel, P. L., Lynch, M. E., Sobel, J. D. Candida-specific cell-mediated immunity is demonstrable in mice with experimental vaginal candidiasis. Infect. Immun. 61, 1990-1990 (1993).
- Fidel, P. L., Sobel, J. D. Immunopathogenesis of recurrent vulvovaginal candidiasis. Clin. Microbiol. Rev. 9. 9, 335-335 (1996).
- Fidel, P. L., Sobel, J. D., Zak, O., Sande, M. . Murine Models of Candida Vaginal Infections, In Experimental models in antimicrobial chemotherapy. , 741-748 (1999).
- Fidel, P. L., Vazquez, J. A., Sobel, J. D. Candida glabrata: Review of epidemiology, pathogenesis, and clinical disease with comparison to C. albicans. Clin. Microbiol. Rev. 12, 80-80 (1999).
- Fulurija, A., Ashman, R. B., Papadimitriou, J. M. Neutrophil depletion increases susceptibility to systemic and vaginal candidiasis in mice, and reveals differences between brain and kidney in mechanisms of host resistance. Microbiology. 142, 3487-3487 (1996).
- Gill, N. NK cells require type I IFN receptor for antiviral responses during genital HSV-2 infection. Cell Immunol. 269 (1), 29-29 (2011).
- Hamad, M., Abu-Elteen, K. H., Ghaleb, M. Estrogen-dependent induction of persistent vaginal candidosis in naive mice. Cell. Immunol. 47 (7), 304-304 (2004).
- Hamad, M. Utility of the oestrogen-dependent vaginal candidosis murine model in evaluating the efficacy of various therapies against vaginal Candida albicans infection. Mycoses. 49 (2), 104-104 (2006).
- LeBlanc, D. M., Barousse, M. M., Fidel, P. L. A role for dendritic cells in immunoregulation during experimental vaginal candidiasis. Infect. Immun. 74, 3213-3213 (2006).
- McGrory, T., Garber, G. E. Mouse intravaginal infection with Trichomonas vaginalis and role of Lactobacillus acidophilus in sustaining infection. Infect. Immun. 60, 2375-2379 (1992).
- Naglik, J. R., Fidel, P. L., Odds, F. C. Animal models of mucosal Candida infection. FEMS. Microbiol. Lett. 283 (2), 129-129 (2008).
- Nomanbhoy, F. Vaginal and oral epithelial cell anti-Candida activity. Inf. Immun. 70, 7081-7081 (2002).
- Pietrella, D. A beta-glucan-conjugate vaccine and anti-beta-glucan antibodies are effective against murine vaginal candidiasis as assessed by a novel in vivo imaging technique. Vaccine. 28 (7), 1717-1717 (2010).
- Redondo-Lopez, V., Cook, R. N., Sobel, J. D. Emerging role of Lactobacilli in the control and maintenance of the vaginal bacterial microflora. Rev Infect Dis. 12 (5), 856-856 (1990).
- Saavedra, M. Local production of chemokines during experimental vaginal candidiasis. Inf. Immun. 67, 5820-5820 (1999).
- Sobel, J. D. Pathogenesis and epidemiology of vulvovaginal candidiasis. Ann. N. Y. Acad. Sci. 544, 547-547 (1988).
- Sobel, J. D. Pathogenesis and treatment of recurrent vulvovaginal candidiasis. Clin. Infect. Dis. 14, S148-S153 (1992).
- Sobel, J. D. Vulvovaginal candidiasis: Epidemiologic, diagnostic, and therapeutic considerations. Am. J. Obstet. Gynecol. 178 (2), 203-203 (1998).
- Song, W. Local and humoral immune responses against primary and repeat Neisseria gonorrhoeae genital tract infections of 17β-estradiol-treated mice. Vaccine. 26, 5741-5741 (2008).
- Taylor, B. N. In vivo virulence of Candida albicans isolates causing mucosal infections in people infected with the human immunodeficiency virus. J. Infect. Dis. 182, 955-955 (2000).
- Taylor, B. N., Saavedra, M., Fidel, P. L. Local Th1/Th2 cytokine production during experimental vaginal candidiasis. Med. Mycol. 38, 419-419 (2000).
- Tirabassi, R. S. A mucosal vaccination approach for herpes simplex virus type 2. Vaccine. 29 (5), 1090-1090 (2011).
- Broeck, W. V. a. n. d. e. n., Derore, A., Simoens, P. Anatomy and nomenclature of murine lymph nodes: descriptive and nomenclatory standardization in BALB/cAnNCrl mice. J. Immunol. Methods. 312 (1-2), 12-12 (2006).
- Wormley, F. L., Chaiban, J., Fidel, P. L. Cell adhesion molecule and lymphocyte activation marker expression during experimental vaginal candidiasis. J. Immunol. Methods. 69, 5072-5072 (2001).
- Yano, J. Epithelial cell-derived S100 calcium-binding proteins as key mediators in the hallmark acute neutrophil response during Candida vaginitis. Infect. Immun. 78 (12), 5126-5126 (2010).
