Tam kalınlıkta Yetişkin Domuz Retina Organotipik Kültür
Summary
Burada yedi gün yetişkin porcine retinanın Organotipik kültürü için bir maliyet-etkin bir yöntem açıklanmaktadır. Kısaca, steril bir filtre kağıdı nöral retina ısmarlama stand tarafından gündeme getirilen bir ekleme RPE ve yer fotoreseptör yüzü yukarı kaldırmak için kullanılır oldu.
Abstract
Hayvan deneylerinde değiştirmek veya azaltabilir in vitro modeller için tanınan bir talep vardır. Domuz retina nöronal insan retina benzer bir yapısı vardır ve bu nedenle insan retina hasarı ve dejeneratif hastalık mekanizmaları çalışmak için değerli bir türdür. Burada bir mezbahaya elde gözleri izole yetişkin porcine retinanın Organotipik kültürü için bir maliyet-etkin bir tekniktir. Ön segment çıkardıktan sonra, trefin bıçak yetişkin porcine gözlerin arka segment birden fazla nöral retina Bruch membran RPE-koroid-sklerasına eksplantlar oluşturmak için kullanılmıştır. Nöral retina her eksplant kaldırmak için bir parça steril filtre kağıdı kullanıldı. Filtre kağıdı-retina kompleks, ısmarlama stand kültür çanak alt uzak yapıldı bir ekleme tepesine (en fotoreseptör yan) kültüre edildi. Stand retinanın her iki taraf için kültür ortamı iyi sirkülasyonu sağlar. Genel olarak, bu işlem tekrarlanabilir, basit ve en az yedi gün için doğal retina yapısının korunmasına izin verir, bir memeli retina üzerine çeşitli morfolojik, farmakolojik ve biyokimyasal çalışmalar için faydalı model.
Protocol
Discussion
Vizyon araştırmacılar, retina kök hücre nakli 1, retina rejenerasyon 2, ve dışsal gen ekspresyonu 3-5 gibi çeşitli sorunları, çalışma Organotipik sistemleri de dahil olmak üzere, çeşitli retina kültür sistemleri kurduk . Ancak, yetişkin memeli retina, in vitro fotoreseptörlerin 6 yüksek enerji talepleri nedeniyle muhafaza edilmesi güçtür. Koizumi ve ark. Fotoreseptörlerin için oksijen kaynağı, kültür eklemek yüksekliği yükselt…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu çalışma NIH hibe 012.031 EY (ET-A), Körlük, Inc (MAZ), New Jersey Lions Göz Araştırma Vakfı (MAZ) Önlemek için bir ödül FM Kirby Vakfı (ET-A), Araştırma, tarafından desteklenen New Jersey (MAZ), Joseph J. ve Marguerite DiSepio Retina Araştırma Fonu (MAZ) ve Janice Mitchell Vassar ve Ashby Mitchell Bursu (AMK) Göz Enstitüsü.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| MEM | Invitrogen-Gibco | 10370-021 | |
| 5 mL pipette tip | ISC BioExpress | P-3250-19 | |
| NUNC cell culture insert | Thermal | 137443 | 8μm, Polycarbonate |
| Whatman 4M Filter paper | Whatman | 1004 | |
| DMEM | Cellgro-mediatech Inc | 10-013-CV | |
| Agar | Fluka | 05040 | |
| Fungizone Amphotericin B | Invitrogen-Gibco | 15290018 | |
| Trephine blades | Bausch and Lomb | T3096 | 6.00mm |
| O.C.T. Compound | Electron Microscopy Sciences | 62550-01 | 4583 |
| Sciences | |||
| Cryostat | Leica | CM1900 | |
| Vibratome | Leica | Series 1000 | |
| Confocal microscopy; | Carl Zeiss | LSM510 | |
| Anti-Synaptic Vesicle Protein 2 (SV2) mouse monoclonal antibody | DSHB | N/A | |
| Anti-Glial Fibrillary Acidic Protein (GFAP) polyclonal rabbit antibody | DAKO | DAKO | |
| Propidium Iodide (PI) | Sigma | P4170 |
References
- Johnson, T. V., Martin, K. R. Development and characterization of an adult retinal explant organotypic tissue culture system as an in vitro intraocular stem cell transplantation model. Invest Ophthalmol Vis Sci. 49, 3503-3512 (2008).
- Kretz, A., Marticke, J. K., Happold, C. J., Schmeer, C., Isenmann, S. A primary culture technique of adult retina for regeneration studies on adult CNS neurons. Nat Protoc. 2, 131-140 (2007).
- Donovan, S. L., Dyer, M. A. Preparation and square wave electroporation of retinal explant cultures. Nat Protoc. 1, 2710-2718 (2006).
- Koizumi, A., Zeck, G., Ben, Y., Masland, R. H., Jakobs, T. C. Organotypic culture of physiologically functional adult mammalian retinas. PLoS One. 2, e221-e221 (2007).
- Lye, M. H., Jakobs, T. C., Masland, R. H., Koizumi, A. Organotypic culture of adult rabbit retina. J Vis Exp. , (2007).
- Ames, A., Li, Y. Y., Heher, E. C., Kimble, C. R. Energy metabolism of rabbit retina as related to function: high cost of Na+ transport. J Neurosci. 12, 840-853 (1992).
- Kobuch, K. Maintenance of adult porcine retina and retinal pigment epithelium in perfusion culture: characterisation of an organotypic in vitro model. Exp Eye Res. 86, 661-668 (2008).
- Kaempf, S., Walter, P., Salz, A. K., Thumann, G. Novel organotypic culture model of adult mammalian neurosensory retina in co-culture with retinal pigment epithelium. J Neurosci Methods. 173, 47-58 (2008).
- Guduric-Fuchs, J. Immunohistochemical study of pig retinal development. Mol Vis. 15, 1915-1928 (2009).
- Chandler, M. J., Smith, P. J., Samuelson, D. A., MacKay, E. O. Photoreceptor density of the domestic pig retina. Vet Ophthalmol. 2, 179-184 (1999).
