Cultura organotípicos de espesor completo Retina adulto porcino
Summary
Aquí se describe una técnica coste-efectiva para la cultura de la retina organotípicos adulto porcino durante siete días. En pocas palabras, un papel de filtro estéril se utilizó para levantar la retina neural fuera de la EPR y los fotorreceptores hasta el lugar parte de una inserción que plantea un soporte a medida.
Abstract
Existe una demanda reconocida por los modelos in vitro que pueden sustituir o reducir los experimentos con animales. Retina porcina tiene una estructura similar neuronal de la retina humana y por lo tanto, es una especie valiosa para el estudio de los mecanismos de lesión de retina humana y las enfermedades degenerativas. Aquí se describe una técnica coste-efectiva para la cultura de la retina organotípicos adulto porcino aislado de ojos obtuvo de un matadero. Después de retirar el segmento anterior, una hoja de trépano se utiliza para crear múltiples neural retina, la membrana de Bruch-RPE-coroides-esclera explantes del segmento posterior de ojos porcinos adultos. Un pedazo de papel de filtro estéril se utilizó para levantar la retina neural lejos de cada explante. El filtro de papel-retina complejos, se cultivó (lado de los fotorreceptores hasta) encima de una inserción, que se celebró fuera de la parte inferior de la placa de cultivo por un soporte a medida. El soporte permite una buena circulación del medio de cultivo a ambos lados de la retina. En general, este procedimiento es simple, reproducible, y permite la preservación de la estructura de la retina nativos por lo menos durante siete días, por lo que es un modelo útil para una variedad de estudios morfológicos, farmacológicos y bioquímicos en la retina de mamíferos.
Protocol
Discussion
Investigadores de la visión han establecido una variedad de sistemas de cultivo de la retina, incluyendo los sistemas de organotípicos, para estudiar una variedad de temas, tales como el trasplante de células madre de la retina 1, la regeneración de la retina 2, y la expresión de genes exógenos 3-5. Sin embargo, la retina de mamíferos adultos es difícil de mantener in vitro, principalmente debido a las altas demandas de energía de los 6 fotorreceptores. Koizu…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabajo fue apoyado por el NIH subvención EY 012.031 (ET-A), un premio de la Fundación FM Kirby (ET-A), Investigación para Prevención de la Ceguera, Inc. (MAZ), The New Lions Jersey Eye Research Foundation (MAZ), El Eye Institute de Nueva Jersey (MAZ), J. José y Margarita DiSepio Retina del Fondo de Investigación (MAZ), y el Vassar Janice Mitchell y Ashby Mitchell Fellowship (AMK).
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| MEM | Invitrogen-Gibco | 10370-021 | |
| 5 mL pipette tip | ISC BioExpress | P-3250-19 | |
| NUNC cell culture insert | Thermal | 137443 | 8μm, Polycarbonate |
| Whatman 4M Filter paper | Whatman | 1004 | |
| DMEM | Cellgro-mediatech Inc | 10-013-CV | |
| Agar | Fluka | 05040 | |
| Fungizone Amphotericin B | Invitrogen-Gibco | 15290018 | |
| Trephine blades | Bausch and Lomb | T3096 | 6.00mm |
| O.C.T. Compound | Electron Microscopy Sciences | 62550-01 | 4583 |
| Sciences | |||
| Cryostat | Leica | CM1900 | |
| Vibratome | Leica | Series 1000 | |
| Confocal microscopy; | Carl Zeiss | LSM510 | |
| Anti-Synaptic Vesicle Protein 2 (SV2) mouse monoclonal antibody | DSHB | N/A | |
| Anti-Glial Fibrillary Acidic Protein (GFAP) polyclonal rabbit antibody | DAKO | DAKO | |
| Propidium Iodide (PI) | Sigma | P4170 |
References
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