عضوي النمط ثقافة كاملة ، سمك الشبكية خنزيري الكبار
Summary
نحن هنا وصف تقنية فعالة من حيث التكلفة للثقافة عضوي النمط الشبكية الخنزيري الكبار لمدة سبعة أيام. لفترة وجيزة ، تم استخدام ورقة فلتر العقيمة لرفع الشبكية العصبية الخروج من RPE ومكان الجانب مبصرة حتى على إدراج التي أثارها موقف مخصص الصنع.
Abstract
هناك طلب المعترف بها في النماذج المختبرية التي يمكن أن تحل محل أو تقليل التجارب على الحيوانات. الخنزيري الشبكية لديها بنية مماثلة لشبكية العين البشرية العصبية ، وبالتالي نوعا قيما لدراسة آليات إصابة شبكية العين البشرية والأمراض التنكسية. نحن هنا وصف تقنية فعالة من حيث التكلفة للثقافة عضوي النمط الشبكية الخنازير معزولة عن أعين الكبار الحصول عليها من مسلخ. بعد إزالة الجزء الأمامي ، استخدمت شفرة منقب لإنشاء عدة العصبية الشبكية ، بروك الأغشية المشيمية RPE – – explants الصلبة من الجزء الخلفي من العين الخنزيري الكبار. تم استخدام قطعة من ورق الترشيح العقيمة لرفع الشبكية العصبية الخروج من كل ازدراع. كان المثقف مرشح الورق الشبكية المعقدة (الجانب مبصرة متابعة) an فوق إدراج ، والتي عقدت بعيدا عن قاع الطبق الثقافة من خلال موقف مخصص الصنع. موقف يسمح للتداول جيدة من الثقافة المتوسطة لكلا الجانبين من شبكية العين. عموما ، هذا الإجراء هو بسيط ، واستنساخه ، وتصاريح الحفاظ على بنية شبكية الأصلي لسبعة أيام على الأقل ، مما يجعلها نموذجا مفيدا لمجموعة متنوعة من الدراسات المورفولوجية والدوائية والكيميائية الحيوية على شبكية الثدييات.
Protocol
Discussion
وقد أنشأت الباحثين رؤية مجموعة متنوعة من النظم الشبكية الثقافة ، بما في ذلك نظم عضوي النمط ، لدراسة مجموعة متنوعة من القضايا ، مثل زرع الخلايا الجذعية في شبكية العين 1 ، 2 التجدد الشبكية ، والتعبير الجيني الخارجية 3-5. ومع ذلك ، شبكية الثدييات الكبار م?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح EY 012031 (ET – A) ، على جائزة من مؤسسة كيربي FM (ET – A) والبحوث للوقاية من العمى ، وشركة (MAZ) ، وعين جديدة ليونز جيرسي مؤسسة أبحاث (MAZ) معهد عين ولاية نيو جيرسي (MAZ) ، وجيه يوسف ومارغريت DiSepio الشبكية صندوق أبحاث (MAZ) ، وميتشل فاسار جانيس وآشبي ميتشل زمالة (AMK).
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| MEM | Invitrogen-Gibco | 10370-021 | |
| 5 mL pipette tip | ISC BioExpress | P-3250-19 | |
| NUNC cell culture insert | Thermal | 137443 | 8μm, Polycarbonate |
| Whatman 4M Filter paper | Whatman | 1004 | |
| DMEM | Cellgro-mediatech Inc | 10-013-CV | |
| Agar | Fluka | 05040 | |
| Fungizone Amphotericin B | Invitrogen-Gibco | 15290018 | |
| Trephine blades | Bausch and Lomb | T3096 | 6.00mm |
| O.C.T. Compound | Electron Microscopy Sciences | 62550-01 | 4583 |
| Sciences | |||
| Cryostat | Leica | CM1900 | |
| Vibratome | Leica | Series 1000 | |
| Confocal microscopy; | Carl Zeiss | LSM510 | |
| Anti-Synaptic Vesicle Protein 2 (SV2) mouse monoclonal antibody | DSHB | N/A | |
| Anti-Glial Fibrillary Acidic Protein (GFAP) polyclonal rabbit antibody | DAKO | DAKO | |
| Propidium Iodide (PI) | Sigma | P4170 |
References
- Johnson, T. V., Martin, K. R. Development and characterization of an adult retinal explant organotypic tissue culture system as an in vitro intraocular stem cell transplantation model. Invest Ophthalmol Vis Sci. 49, 3503-3512 (2008).
- Kretz, A., Marticke, J. K., Happold, C. J., Schmeer, C., Isenmann, S. A primary culture technique of adult retina for regeneration studies on adult CNS neurons. Nat Protoc. 2, 131-140 (2007).
- Donovan, S. L., Dyer, M. A. Preparation and square wave electroporation of retinal explant cultures. Nat Protoc. 1, 2710-2718 (2006).
- Koizumi, A., Zeck, G., Ben, Y., Masland, R. H., Jakobs, T. C. Organotypic culture of physiologically functional adult mammalian retinas. PLoS One. 2, e221-e221 (2007).
- Lye, M. H., Jakobs, T. C., Masland, R. H., Koizumi, A. Organotypic culture of adult rabbit retina. J Vis Exp. , (2007).
- Ames, A., Li, Y. Y., Heher, E. C., Kimble, C. R. Energy metabolism of rabbit retina as related to function: high cost of Na+ transport. J Neurosci. 12, 840-853 (1992).
- Kobuch, K. Maintenance of adult porcine retina and retinal pigment epithelium in perfusion culture: characterisation of an organotypic in vitro model. Exp Eye Res. 86, 661-668 (2008).
- Kaempf, S., Walter, P., Salz, A. K., Thumann, G. Novel organotypic culture model of adult mammalian neurosensory retina in co-culture with retinal pigment epithelium. J Neurosci Methods. 173, 47-58 (2008).
- Guduric-Fuchs, J. Immunohistochemical study of pig retinal development. Mol Vis. 15, 1915-1928 (2009).
- Chandler, M. J., Smith, P. J., Samuelson, D. A., MacKay, E. O. Photoreceptor density of the domestic pig retina. Vet Ophthalmol. 2, 179-184 (1999).
