Encyclopedia of Experiments: Cancer Research
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Transcript
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Para empezar, coloque un ratón anestesiado en una cama quirúrgica e inyecte buprenorfina, un analgésico para aliviar el dolor, subcutáneamente en el hombro. A continuación, inserte la nariz del ratón en una máscara nasal para proporcionar un suministro continuo de oxígeno y anestesia, como isoflurano al animal. Usando un poco de cinta de laboratorio, inmovilizar las extremidades y esterilizar la piel del pecho con clorhexidina y yodo, dos desinfectantes y etanol.
Ahora usa tijeras para hacer una incisión en el medio de la pared torácica anterior e invierte la piel con fórceps para exponer la almohadilla de grasa mamaria blanca. Inyecte cuidadosamente la suspensión de la célula cancerosa que expresa una proteína bioluminiscente en la almohadilla de grasa mamaria. Espere 5 segundos antes de sacar la aguja para evitar el flujo posterior. Suelte suavemente la almohadilla de grasa y use suturas estériles para coser y cerrar la incisión.
Las células cancerosas inyectadas dentro de la almohadilla de grasa mamaria se dividen rápidamente para formar un tumor. Devuelve al animal a una jaula después del procedimiento. Vigile de cerca al animal hasta que se recupere de la anestesia y comience a moverse libremente.
En el siguiente protocolo, implantaremos células de adenocarcinoma mamarias que expresan luciferasa en la almohadilla de grasa mamaria de un ratón adulto.
Comience confirmando la falta de respuesta a la pellizco del dedo del pie en un ratón hembra anestesiado y pegando las extremidades del animal a una tabla quirúrgica. Usando hisopos de algodón estériles, esterilizar el área quirúrgica con clorhexidina, yodo y 75% etanol, y hacer una incisión de piel de cinco milímetros en el medio de la pared torácica anterior. A continuación, levante el lado derecho de la piel adyacente a la incisión y use tijeras estériles de microdissección para separar la piel de la pared torácica.
Invierta la piel para exponer la almohadilla de grasa mamaria número dos derecha y use una jeringa de insulina de un mililitro equipada con una aguja de calibre 28.5 para inyectar cuidadosamente 20 microlitros de suspensión de células cancerosas a través de la herida en la almohadilla de grasa. Sostenga la aguja dentro de la almohadilla de grasa durante cinco segundos para permitir que la mezcla gelatinosa de proteína de células cancerosas se solidifique antes de extraer la aguja, y cierre la incisión con suturas estériles no absorbibles 5-0. Luego, coloque al animal en una jaula limpia con monitoreo hasta que se recumbencia completa.
