Encyclopedia of Experiments: Cancer Research
Se requiere una suscripción a JoVE para ver este contenido. Inicie sesión o comience su prueba gratuita.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
Om te beginnen, plaats een verdoofde muis op een chirurgisch bed en injecteer buprenorfine, een pijnstiller om pijn te verlichten, subcutaan in de schouder. Steek vervolgens de muisneus in een neusmasker om een continue toevoer van zuurstof en verdoving te bieden, zoals isofluraan voor het dier. Gebruik wat labtape, immobiliseer de ledematen en steriliseer de borsthuid met chloorhexidine en jodium, twee ontsmettingsmiddelen en ethanol.
Gebruik nu een schaar om een incisie te maken in het midden van de voorste borstwand en keer de huid om met een tang om het witte borstvetkussen bloot te leggen. Injecteer voorzichtig de suspensie van de kankercel die een bioluminescent eiwit uitdrukt in het borstvetkussen. Wacht 5 seconden voordat u de naald eruit trekt om terugstroming te voorkomen. Laat het vetkussen voorzichtig los en gebruik steriele hechtingen om de incisie te hechten en te sluiten.
De geïnjecteerde kankercellen in het borstvetkussen delen zich snel om een tumor te vormen. Breng het dier na de procedure terug in een kooi. Houd het dier nauwlettend in de gaten totdat het herstelt van anesthesie en vrij begint te bewegen.
In het volgende protocol implanteren we borstadenocarcinoomcellen die luciferase uitdrukken in het borstvetkussen van een volwassen muis.
Begin met het bevestigen van een gebrek aan reactie op teenknijpen in een verdoofde vrouwelijke muis en het vastkleven van de ledematen van het dier aan een chirurgisch bord. Steriliseer het operatiegebied met steriele wattenstaafjes met chloorhexidine, jodium en 75% ethanol en maak een huidincisie van vijf millimeter in het midden van de voorste borstwand. Til vervolgens de rechterkant van de huid naast de incisie op en gebruik steriele microdissectieschaar om de huid van de borstwand los te maken.
Keer de huid om om de juiste nummer twee borstvetkussen bloot te leggen en gebruik een insulinespuit van één milliliter uitgerust met een naald van 28,5 gauge om voorzichtig 20 microliters kankercelsuspensie door de wond in het vetkussen te injecteren. Houd de naald vijf seconden in het vetkussen zodat het gelatineachtige kankerceleiwitmengsel stolt voordat u de naald verwijdert en sluit de incisie met steriele 5-0 niet-absorbeerbare hechtingen. Plaats het dier vervolgens in een schone kooi met bewaking tot volledige liggedrag.
