Encyclopedia of Experiments: Cancer Research
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Transcript
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Para começar, coloque um rato anestesiado em uma cama cirúrgica e injete buprenorfina, um analgésico para aliviar a dor, subcutâneamente no ombro. Em seguida, insira o nariz do rato em uma máscara de nariz para fornecer um suprimento contínuo de oxigênio e anestésico, como isoflurano ao animal. Usando fita de laboratório, imobilize os membros e esterilize a pele do peito com clorexidina e iodo, dois desinfetantes e etanol.
Agora use uma tesoura para fazer uma incisão no meio da parede do peito anterior e inverter a pele com fórceps para expor a almofada de gordura mamária branca. Injete cuidadosamente a suspensão celular do câncer expressando uma proteína bioluminescente na almofada de gordura mamária. Aguarde 5 segundos antes de puxar a agulha para evitar o fluxo de volta. Solte suavemente a almofada de gordura e use suturas estéreis para costurar e fechar a incisão.
As células cancerígenas injetadas dentro da almofada de gordura mamária se dividem rapidamente para formar um tumor. Devolva o animal para uma gaiola após o procedimento. Monitore o animal de perto até que ele se recupere da anestesia e comece a se mover livremente.
No protocolo a seguir, implantaremos células de adenocarcinoma mamário expressando luciferase na almofada de gordura mamária de um rato adulto.
Comece confirmando a falta de resposta ao beliscão do dedo do pé em um rato fêmea anestesiado e gravando os membros do animal em uma placa cirúrgica. Usando cotonetes de algodão estéreis, esterilize a área cirúrgica com clorexidina, iodo e 75% de etanol, e faça uma incisão de pele de cinco milímetros no meio da parede do peito anterior. Em seguida, levante o lado direito da pele adjacente à incisão e use uma tesoura de microdisseção estéril para separar a pele da parede do peito.
Inverta a pele para expor o número certo dois almofada de gordura mamária e use uma seringa de insulina de um mililitro equipada com uma agulha calibre 28,5 para injetar cuidadosamente 20 microliters de suspensão celular cancerosa através da ferida na almofada de gordura. Segure a agulha dentro da almofada de gordura por cinco segundos para permitir que a mistura de proteína de células cancerígenas gelatinosas se solidifique antes de remover a agulha, e feche a incisão com suturas estéreis 5-0 não absorvíveis. Em seguida, coloque o animal em uma gaiola limpa com monitoramento até a recumbência total.
