Injection orthotopique : Implantation de cellules cancéreuses spécifiques aux tissus dans une souris adulte

Pour commencer, placez une souris anesthésiée sur un lit chirurgical et injectez de la buprénorphine, un analgésique pour soulager la douleur, sous-cutanée dans l’épaule. Ensuite, insérez le nez de la souris dans un masque nasal pour fournir un approvisionnement continu en oxygène et anesthésique, comme l’isoflurane à l’animal. À l’aide d’un peu de ruban adhésif de laboratoire, immobiliser les membres et stériliser la peau de la poitrine avec de la chlorhexidine et de l’iode, deux désinfectants et de l’éthanol.

Maintenant, utilisez des ciseaux pour faire une incision au milieu de la paroi thoracique antérieure et inverser la peau avec des forceps pour exposer la graisse mammaire blanche pad. Injectez soigneusement la suspension des cellules cancéreuses exprimant une protéine bioluminescente dans la graisse mammaire. Attendez 5 secondes avant de retirer l’aiguille pour éviter le flux arrière. Relâchez doucement la garniture grasse et utilisez des sutures stériles pour coudre et fermer l’incision.

Les cellules cancéreuses injectées à l’intérieur de la graisse mammaire se divisent rapidement pour former une tumeur. Remettre l’animal dans une cage après l’intervention. Surveillez attentivement l’animal jusqu’à ce qu’il se rétablisse de l’anesthésie et commence à se déplacer librement.

Dans le protocole suivant, nous implanterons des cellules mammaires d’adénocarcinome exprimant la luciferase dans la garniture mammaire de graisse d’une souris adulte.

Commencez par confirmer un manque de réponse au pincement des pieds chez une souris femelle anesthésiée et en tapant les membres de l’animal sur un tableau chirurgical. À l’aide d’écouvillons de coton stériles, stériliser la zone chirurgicale avec de la chlorhexidine, de l’iode et 75 % d’éthanol, et faire une incision cutanée de cinq millimètres au milieu de la paroi thoracique antérieure. Ensuite, soulevez le côté droit de la peau adjacente à l’incision et utilisez des ciseaux de microdissection stériles pour détacher la peau de la paroi thoracique.

Inverser la peau pour exposer le bon numéro deux coussin de graisse mammaire et utiliser une seringue d’insuline d’un millilitre équipée d’une aiguille de calibre 28,5 pour injecter soigneusement 20 microlitres de suspension cellulaire cancéreuse à travers la plaie dans le tampon de graisse. Maintenez l’aiguille dans la garniture de graisse pendant cinq secondes pour permettre au mélange gélatineux de protéine de cellules cancéreuses de solidifier avant d’enlever l’aiguille, et fermant l’incision avec les sutures stériles 5-0 non absorbables. Ensuite, placez l’animal dans une cage propre avec surveillance jusqu’à la pleine récumbence.