Encyclopedia of Experiments: Cancer Research
Se requiere una suscripción a JoVE para ver este contenido. Inicie sesión o comience su prueba gratuita.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
Til at begynde med skal du placere en bedøvet mus på en kirurgisk seng og injicere buprenorphin, et smertestillende middel til at lindre smerter, subkutant ind i skulderen. Indsæt derefter musenæsen i en næsemaske for at give en kontinuerlig forsyning af ilt og bedøvelsesmiddel, såsom isoflurane til dyret. Brug nogle lab tape, immobilisere lemmerne og sterilisere brystet huden med chlorhexidin og jod, to desinfektionsmidler, og ethanol.
Brug nu en saks til at lave et snit i midten af den forreste brystvæg og vende huden med pincet for at udsætte den hvide brystfedtpude. Injicer forsigtigt kræftcellesuspensionen, der udtrykker et bioluminescerende protein i brystfedtpuden. Vent i 5 sekunder, før du trækker nålen ud for at forhindre tilbageløb. Slip forsigtigt fedtpuden og brug sterile suturer til at sy og lukke snittet.
De injicerede kræftceller inde i bryst fedt pad kløft hurtigt at danne en tumor. Returner dyret til et bur efter proceduren. Overvåg dyret nøje, indtil det kommer sig efter anæstesi og begynder at bevæge sig frit.
I den følgende protokol implanterer vi mammary adenocarcinomaceller, der udtrykker luciferase i en voksenmus mammary fedtpude.
Begynd med at bekræfte en manglende reaktion på tåklem i en bedøvet kvindelig mus og tape dyrets lemmer til et kirurgisk bord. Brug sterile vatpinde, steriliser det kirurgiske område med chlorhexidin, jod og 75% ethanol, og lav et fem millimeter hudindsnit midt i den forreste brystvæg. Løft derefter højre side af huden ved siden af snittet og brug steril mikrodissection saks til at løsne huden fra brystvæggen.
Vend huden for at eksponere den rigtige nummer to bryst fedt pad og bruge en en-milliliter insulin sprøjte udstyret med en 28,5 gauge nål til omhyggeligt at injicere 20 mikroliter af kræft celle suspension gennem såret ind i fedt pad. Hold nålen i fedtpuden i fem sekunder for at lade den gelatineagtige kræftcelleproteinblanding størkne, før du fjerner nålen, og lukke snittet med sterile 5-0 ikke-absorberbare suturer. Placer derefter dyret i et rent bur med overvågning indtil fuld recumbency.
