Encyclopedia of Experiments: Cancer Research
Se requiere una suscripción a JoVE para ver este contenido. Inicie sesión o comience su prueba gratuita.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
כדי להתחיל, מניחים עכבר מורדם על מיטה כירורגית להזריק buprenorphine, משכך כאבים כדי להקל על הכאב, תת עורית לתוך הכתף. לאחר מכן, הכנס את אף העכבר למסכת אף כדי לספק אספקה רציפה של חמצן והרדמה, כגון איזופלורן לבעל החיים. באמצעות כמה קלטת מעבדה, לשתק את הגפיים לעקר את עור החזה עם כלורקסידין ויוד, שני חומרי חיטוי, ואתנול.
עכשיו להשתמש במספריים כדי לבצע חתך באמצע דופן החזה הקדמון ולהפוך את העור עם מלקחיים כדי לחשוף את כרית שומן mammary לבן. בזהירות להזריק את ההשעיה תא סרטן להביע חלבון bioluminescent לתוך כרית שומן החלב. המתן 5 שניות לפני משיכת המחט כדי למנוע זרימה חוזרת. משחררים בעדינות את כרית השומן ומשתמשים בתפרים סטריליים כדי לתפור ולסגור את החתך.
התאים הסרטניים המוזרקים בתוך כרית השומן הענקית מתחלקים במהירות ליצירת גידול. להחזיר את החיה לכלוב לאחר ההליך. עוקב מקרוב אחר החיה עד שהיא מתאוששת מהרדמה ומתחיל לנוע בחופשיות.
בפרוטוקול הבא, נשתיל תאי אדנוקרצינומה ממותה המבטאים לוציפראז לתוך כרית שומן של עכבר בוגר.
התחל על ידי אישור חוסר תגובה לצביטת בוהן בעכבר נקבה מורדמת והדבקת איברי החיה ללוח כירורגי. באמצעות ספוגיות כותנה סטריליות, לעקר את האזור הכירורגי עם כלורקסידין, יוד, ו 75% אתנול, ולעשות חתך בעור חמישה מילימטר באמצע דופן החזה החיצוני. לאחר מכן, הרימו את הצד הימני של העור הצמוד לחתך והשתמשו במספריים סטריליים זעירים כדי לנתק את העור מקיר החזה.
הפוך את העור כדי לחשוף את כרית שומן mammary מספר 2 הנכון ולהשתמש מזרק אינסולין מיליליטר אחד מצויד מחט 28.5 מד להזריק בזהירות 20 microliters של השעיית תאים סרטניים דרך הפצע לתוך כרית השומן. החזק את המחט בתוך כרית השומן במשך חמש שניות כדי לאפשר את תערובת חלבון תא סרטן ג'לטין להתמצק לפני הסרת המחט, וסגירת החתך עם תפרים סטריליים 5-0 בלתי נספג. לאחר מכן, מניחים את החיה בכלוב נקי עם ניטור עד נסיוב מלא.
