HIV-1感染T細胞における小胞体ストレスとアンフォールドタンパク質応答の測定とHIV-1複製におけるその役割の解析
Summary
ここでは、特にHIV-1感染に重点を置いて、小胞体(ER)ストレスとアンフォールデッドタンパク質応答(UPR)の活性化を決定するためのいくつかの確立された方法について説明します。この記事では、ER ストレス/UPR が HIV-1 の複製とビリオン感染性に及ぼす影響を調査するための一連のプロトコルについても説明します。
Abstract
ウイルス感染は、異常なタンパク質蓄積により小胞体(ER)ストレスを引き起こし、アンフォールデッドタンパク質応答(UPR)を引き起こす可能性があります。ウイルスは宿主のUPRを操作する戦略を開発してきましたが、HIV-1感染中のUPR調節とその機能的意義についての詳細な理解は文献に欠けています。これに関連して、現在の記事では、T細胞のHIV-1感染中の小胞体ストレスレベルとUPRを測定するために私たちの研究室で使用されているプロトコルと、ウイルスの複製と感染性に対するUPRの影響について説明します。
チオフラビンT(ThT)染色は、タンパク質凝集体を検出することにより細胞内の小胞体ストレスを検出するために使用される比較的新しい方法です。ここでは、小胞体ストレスを検出および定量化するためのHIV-1感染細胞におけるThT染色のプロトコルを示しました。さらに、小胞体ストレスは、従来の免疫ブロッティングおよび定量的逆転写ポリメラーゼ連鎖反応(RT-PCR)を使用して、HIV-1感染細胞におけるBiP、リン酸化IRE1、PERK、eIF2αなどのUPRマーカーのレベル、XBP1のスプライシング、ATF6、ATF4、CHOP、およびGADD34の切断を測定することにより、間接的にも検出されました。ThT蛍光はUPR活性化の指標と相関していることを発見しました。この記事では、ノックダウン実験による小胞体ストレスとUPR調節がHIV-1複製に与える影響を分析するためのプロトコル、および薬理学的分子の使用についても説明します。HIV-1遺伝子の発現/複製およびウイルス産生に対するUPRの影響は、それぞれLuciferase reporter assaysおよびp24抗原捕捉ELISAによって解析されましたが、ビリオン感染性への影響は、感染したレポーター細胞の染色によって解析されました。これらの方法群を総合すると、HIV-1感染時のアンフォールデッドタンパク質応答経路を包括的に理解し、その複雑なダイナミクスを明らかにすることができます。
Introduction
後天性免疫不全症候群(AIDS)は、CD4+ Tリンパ球の数が徐々に減少することを特徴とし、免疫応答の進行性の失敗につながります。ヒト免疫不全ウイルス-1(HIV-1)は、エイズの原因物質です。これは、ウイルス粒子ごとに2つのRNAのコピーを持つ包み込まれたポジティブな感覚の一本鎖RNAウイルスであり、レトロウイルス科に属します。宿主細胞内での高濃度のウイルスタンパク質の産生は、細胞のタンパク質折り畳み機構に過度のストレスを与えます1。ERは、真核細胞の分泌経路の最初のコンパートメントです。タンパク質の産生、変更、および分泌経路と細胞外空間標的部位への送達を担当しています。タンパク質は、アスパラギン結合グリコシル化や分子内および分子間ジスルフィド結合の産生など、多数の翻訳後変化を経て、小胞体内で自然なコンフォメーションに折り畳まれます2。したがって、高濃度のタンパク質がER内腔に存在し、これらは凝集やミスフォールディングが非常に起こりやすいです。熱ショック、微生物感染、ウイルス感染など、タンパク質合成の促進やタンパク質の突然変異を必要とするさまざまな生理学的条件は、ERでのタンパク質蓄積の増加によるERストレスを引き起こし、ER内腔の恒常性を乱します。小胞体ストレスは、高度に保存された適応シグナル伝達経路であるアンフォールデッドタンパク質応答(UPR)3のネットワークを活性化します。UPRは、折り畳まれていないタンパク質の負荷と折り畳み能力を調整することにより、正常なER生理学的状態を取り戻すために使用されます。これは、小胞体のサイズと小胞体に常在する分子シャペロンとフォールダーゼを大きくすることでもたらされ、小胞体の折り畳み能力が向上します。また、UPRは、翻訳レベルでの全球的なタンパク質合成の減衰を通じてERのタンパク質負荷を減少させ、ER関連分解(ERAD)をアップレギュレーションすることにより、ERからのアンフォールドタンパク質のクリアランスを増加させます4,5。
小胞体ストレスは、プロテインキナーゼR(PKR)様小胞体キナーゼ(PERK)、活性化転写因子6(ATF6)、およびイノシトール要求酵素1型(IRE1)の3つの小胞体常在膜貫通タンパク質によって感知されます。これらのエフェクターはすべて、結合タンパク質(BiP)/78-kDaグルコース調節タンパク質(GRP78)としても知られるシャペロンヒートショックタンパク質ファミリーA(Hsp70)メンバー5(HSPA5)に結合することにより不活性に保たれます。小胞体ストレスとアンフォールド/ミスフォールドタンパク質の蓄積により、HSPA5は解離してこれらのエフェクターを活性化し、その後、小胞体ストレスの解消に役立つ一連の下流標的を活性化し、極限状態では細胞死を促進します6。HSPA5から解離すると、PERKは自己リン酸化し、そのキナーゼ活性が活性化されます7。そのキナーゼ活性はeIF2αをリン酸化し、翻訳減衰を引き起こし、小胞体8のタンパク質負荷を低下させます。しかし、リン酸化真核生物の開始因子2α(eIF2α)の存在下では、特定のmRNA上の非翻訳オープンリーディングフレームが優先的に翻訳され、ATF4のようにストレス誘発遺伝子を調節します。ATF4およびC/EBP相同タンパク質(CHOP)は、ストレス誘発性遺伝子を調節し、アポトーシスおよび細胞死経路を調節する転写因子である9,10。ATF4およびCHOPの標的の1つは、増殖停止およびDNA損傷誘導性タンパク質(GADD34)であり、これはタンパク質ホスファターゼ1とともにpeIF2αを脱リン酸化し、並進減衰のフィードバック調節因子として作用する11。小胞体ストレス下では、ATF6はHSPA5から解離し、そのゴルジ体局在化信号が露出し、ゴルジ体への転座につながります。ゴルジ装置では、ATF6はサイト1プロテアーゼ(S1P)およびサイト2プロテアーゼ(S2P)によって切断され、切断された形態のATF6(ATF6 P50)が放出されます。その後、ATF6 p50は核に移され、そこでタンパク質のフォールディング、成熟、分泌、およびタンパク質分解に関与する遺伝子の発現を誘導します12,13。小胞体ストレス中、IRE1はHSPA5から解離し、多量体化し、自己リン酸化する14。IRE1のリン酸化は、そのRNaseドメインを活性化し、X-box結合タンパク質1(XBP1)のmRNAの中央部分からの26ヌクレオチドのスプライシングを特異的に媒介します15,16。これにより、トランス活性化機能を付与する新規のC末端が生成され、機能的なXBP1sタンパク質、いくつかの小胞体ストレス誘発遺伝子を制御する強力な転写因子が生成されます17,18。これらの転写因子の複合的な活性は、ERの恒常性を回復することを目的とした遺伝的プログラムのスイッチを入れます。
小胞体ストレスとUPRを検出するには、さまざまな方法があります。これらには、UPRマーカーを分析する従来の方法が含まれる19,20。従来とは異なるさまざまな方法には、UPRの酸化還元状態と小胞体内腔内のカルシウム分布の測定、小胞体構造の評価などがあります。電子顕微鏡法を使用して、細胞や組織の小胞体ストレスに応答して小胞体内腔がどれだけ拡大するかを確認できます。ただし、この方法は時間がかかり、電子顕微鏡の利用可能性に依存しており、すべての研究グループが利用できるとは限りません。また、小胞体のカルシウムフラックスと酸化還元状態の測定は、試薬が入手可能であるため困難です。さらに、これらの実験から読み取られたものは非常に感度が高く、細胞代謝の他の要因の影響を受ける可能性があります。
UPR出力をモニタリングするための強力でシンプルな手法は、UPRのさまざまなシグナル伝達経路の活性化を測定することであり、さまざまなストレスシナリオで何十年にもわたって使用されてきました。これらの従来の方法でUPRの活性化を測定する方法は、経済的で実現可能であり、他の既知の方法と比較して短時間で情報を得ることができます。これには、IRE1、PERK、eIF2αのリン酸化、P50型のATF6を測定することによるATF6の切断、HSPA5、スプライシングXBP1、ATF4、CHOP、GADD34などの他のマーカーのタンパク質発現など、UPRマーカーのタンパク質レベルでの発現を測定するためのイムノブロッティング、mRNAレベルを測定するためのRT-PCRやXBP1 mRNAのスプライシングなどが含まれます。
この記事では、HIV-1感染細胞における小胞体ストレスとUPRの活性化をモニタリングし、HIV-1の複製と感染性におけるUPRの機能的関連性を判断するための、検証済みで信頼性の高い一連のプロトコルについて説明します。このプロトコルは、入手が容易で経済的な試薬を利用し、UPR出力に関する説得力のある情報を提供します。小胞体ストレスは、折り畳まれていない/誤って折り畳まれたタンパク質の蓄積の結果であり、タンパク質凝集体21を形成する傾向がある。ここでは、HIV-1感染細胞におけるこれらのタンパク質凝集体を検出する方法について説明する。チオフラビンT染色は、これらのタンパク質凝集体を検出および定量するために使用されている比較的新しい方法である22。BeriaultとWerstuckは、タンパク質凝集体、つまり生細胞の小胞体ストレスレベルを検出および定量するためのこの手法について説明しました。低分子の蛍光分子チオフラビンT(ThT)は、タンパク質凝集体、特にアミロイド線維に選択的に結合することが実証されています。
この記事では、ThTを使用してHIV-1感染細胞のERストレスを検出および定量化し、UPRのさまざまなシグナル伝達経路の活性化を測定することにより、UPRを従来のモニタリング方法と関連付ける方法について説明します。
HIV-1感染時のUPRの役割に関する包括的な情報も不足しているため、HIV-1の複製とビリオン感染性におけるUPRの役割を理解するための一連のプロトコルを提供します。これらのプロトコルには、レンチウイルスを介したUPRマーカーのノックダウン、および薬理学的ERストレス誘導剤による治療が含まれます。この記事では、長末端反復(LTR)ベースのルシフェラーゼアッセイ、p24酵素結合免疫吸着アッセイ(ELISA)、β-galレポーター染色アッセイなど、HIV-1遺伝子発現、ウイルス産生、および産生されたビリオンの感染性を測定するために使用できるリードアウトの種類も示しています。
これらのプロトコルの大部分を使用して、我々は最近、HIV-1感染がT細胞23のUPRに対する機能的意味合いを報告しており、その論文の結果は、ここで述べた方法の信頼性を示唆している。したがって、この記事では、HIV-1と小胞体ストレスおよびUPR活性化との相互作用に関する包括的な情報を提供する一連の方法を提供します。
Protocol
Representative Results
Discussion
本プロトコルの範囲には、(i)HIV-1ウイルスストックの取り扱いとウイルス濃度とビリオン感染力の測定、(ii)T細胞のHIV-1感染と小胞体ストレスおよびUPRのさまざまなマーカーに対するその影響の評価、(iii)UPRマーカーのノックダウンの影響とHIV-1 LTR駆動遺伝子活性への影響、 ウイルス産生とビリオン感染性、および(iv)薬理学的分子を使用したUPRの過剰刺激とHIV-1複製に…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
インド政府バイオテクノロジー局国立細胞科学センター(National Centre for Cell Science, Department of Biotechnology, Government of Institutional)の学内支援に感謝いたします。ATとADは、インド政府のバイオテクノロジー部門の国立細胞科学センターから博士号の研究支援を受けたことに感謝しています。DMは、インド政府のSERBからのJCボーズナショナルフェローシップに感謝しています。
Materials
| Acrylamamide | Biorad, USA | 1610107 | |
| Agarose | G-Biosciences, USA | RC1013 | |
| Ammonium persulphate | Sigma-Aldrich, USA | A3678 | |
| anti-ATF4 antibody | Cell Signaling Technology, USA | 11815 | Western blot detection Dilution-1:1000 |
| anti-ATF6 antibody | Abcam, UK | ab122897 | Western blot detection Dilution-1:1000 |
| anti-CHOP antibody | Cell Signaling Technology, USA | 2897 | Western blot detection Dilution-1:1000 |
| anti-eIF2α antibody | Santa Cruz Biotechnology, USA | sc-11386 | Western blot detection Dilution-1:2000 |
| anti-GADD34 antibody | Abcam, UK | ab236516 | Western blot detection Dilution-1:1000 |
| anti-GAPDH antibody | Santa Cruz Biotechnology, USA | sc-32233 | Western blot detection Dilution-1:3000 |
| anti-HSPA5 antibody | Cell Signaling Technology, USA | 3177 | Western blot detection Dilution-1:1000 |
| anti-IRE1 antibody | Cell Signaling Technology, USA | 3294 | Western blot detection Dilution-1:2000 |
| Anti-mouse HRP conjugate antibody | Biorad, USA | 1706516 | Western blot detection Dilution- 1:4000 |
| anti-peIF2α antibody | Invitrogen, USA | 44-728G | Western blot detection Dilution-1:1000 |
| anti-PERK antibody | Cell Signaling Technology, USA | 5683 | Western blot detection Dilution-1:2000 |
| anti-pIRE1 antibody | Abcam, UK | ab243665 | Western blot detection Dilution-1:1000 |
| anti-pPERK antibody | Invitrogen, USA | PA5-40294 | Western blot detection Dilution-1:2000 |
| Anti-rabbit HRP conjugate antibody | Biorad, USA | 1706515 | Western blot detection Dilution- 1:4000 |
| anti-XBP1 antibody | Abcam, UK | ab37152 | Western blot detection Dilution-1:1000 |
| Bench top high speed centrifuge | Eppendorf, USA | 5804R | Rotor- F-45-30-11 |
| Bench top low speed centrifuge | Eppendorf, USA | 5702R | Rotor- A-4-38 |
| Bis-Acrylamide | Biorad, USA | 1610201 | |
| Bovine Serum Albumin (BSA) | MP biomedicals, USA | 160069 | |
| Bradford reagent | Biorad, USA | 5000006 | |
| CalPhos mammalian Transfection kit | Clontech, Takara Bio, USA | 631312 | Virus stock preparation |
| CEM-GFP | NIH, AIDS Repository, USA | 3655 | |
| Clarity ECL substrate | Biorad, USA | 1705061 | chemiluminescence detecting substrate |
| Clarity max ECL substrate | Biorad, USA | 1705062 | chemiluminescence detecting substrate |
| Confocal laser scanning microscope | Olympus, Japan | Model:FV3000 | |
| Cytospin centrifuge | Thermo Fisher Scientific, USA | ASHA78300003 | |
| DMEM | Invitrogen, USA | 11995073 | |
| DMSO | Sigma-Aldrich, USA | D2650 | |
| dNTPs | Promega, USA | U1515 | |
| DTT | Invitrogen, USA | R0861 | |
| EDTA | Invitrogen, USA | 12635 | |
| EtBr | Invitrogen, USA | `15585011 | |
| Fetal Bovine Serum | Invitrogen, USA | 16000044 | |
| G418 | Invitrogen, USA | 11811023 | |
| Glutaraldehyde 25% | Sigma-Aldrich, USA | G6257 | Infectivity assay |
| Glycine | Thermo Fisher Scientific, USA | Q24755 | |
| HEK-293T | NCCS, India | ||
| HIV-1 infectious Molecular Clone pNL4-3 | NIH, AIDS Repository, USA | 114 | |
| Inverted microscope | Nikon, Japan | Model: Eclipse Ti2 | |
| iTaq Universal SYBR Green Supermix | Biorad, USA | 1715124 | |
| Jurkat J6 | NCCS, India | ||
| Magnesium chloride | Sigma-Aldrich, USA | M8266 | Infectivity assay |
| MMLV-RT | Invitrogen, USA | 28025013 | |
| MTT reagent | Sigma-Aldrich, USA | M5655 | Cell viability assay |
| N,N-dimethyl formamide | Fluka Chemika | 40255 | Infectivity assay |
| NaCl | Thermo Fisher Scientific, USA | Q27605 | |
| NaF | Sigma-Aldrich, USA | 201154 | |
| NP40 | Invitrogen, USA | 85124 | |
| P24 antigen capture ELISA kit | ABL, USA | 5421 | |
| PageRuler prestained protein ladder | Sci-fi Biologicals, India | PGPMT078 | |
| Paraformaldehyde | Sigma-Aldrich, USA | P6148 | |
| pEGFP-N1 | Clontech, USA | 632515 | |
| Penicillin/Streptomycin | Invitrogen, USA | 151140122 | |
| Phosphatase Inhibitor | Sigma-Aldrich, USA | 4906837001 | |
| Phusion High-fidelity PCR mastermix with GC buffer | NEB,USA | M05532 | |
| pLKO.1-TRC | Addgene, USA | 10878 | Lentiviral cloning vector |
| pMD2.G | Addgene, USA | 12259 | VSV-G envelope vector |
| PMSF | Sigma-Aldrich, USA | P7626 | |
| Polyethylenimine (PEI) | Polysciences, Inc., USA | 23966 | |
| Potassium ferricyanide | Sigma-Aldrich, USA | 244023 | Infectivity assay |
| Potassium ferrocyanide | Sigma-Aldrich, USA | P3289 | Infectivity assay |
| Protease Inhibitor | Sigma-Aldrich, USA | 5056489001 | |
| psPAX2 | Addgene, USA | 12260 | Lentiviral packaging plasmid |
| Puromycin | Sigma-Aldrich, USA | P8833 | Selection of stable cells |
| PVDF membrane | Biorad, USA | 1620177 | |
| Random primers | Invitrogen, USA | 48190011 | |
| RPMI 1640 | Invitrogen, USA | 22400105 | |
| SDS | Sigma-Aldrich, USA | L3771 | |
| Steady-Glo substrate | Promega, USA | E2510 | Luciferase assay |
| T4 DNA ligase | Invitrogen, USA | 15224017 | |
| TEMED | Invitrogen, USA | 17919 | |
| Thapsigargin | Sigma-Aldrich, USA | T9033 | |
| Thioflavin T | Sigma-Aldrich, USA | 596200 | |
| Tris | Thermo Fisher Scientific, USA | Q15965 | |
| Triton-X-100 | Sigma-Aldrich, USA | T8787 | |
| Trizol | Invitrogen, USA | 15596018 | |
| Tween 20 | Sigma-Aldrich, USA | P1379 | |
| TZM-bl | NIH, AIDS Repository, USA | 8129 | |
| Ultracentrifuge | Beckman Optima L90K, USA | 330049 | Rotor-SW28Ti |
| UltraPure X-gal | Invitrogen, USA | 15520-018 | Infectivity assay |
References
- Levy, J. A. . HIV and the Pathogenesis of AIDS. , (2007).
- Hebert, D. N., Molinari, M. In and out of the ER: Protein folding, quality control, degradation, and related human diseases. Physiol Rev. 87 (4), 1377-1408 (2007).
- Mori, K. The unfolded protein response: The dawn of a new field. Proc Jpn Acad Ser B Phys Biol Sci. 91 (9), 469-480 (2015).
- Balch, W. E., Morimoto, R. I., Dillin, A., Kelly, J. W. Adapting proteostasis for disease intervention. Science. 319 (5865), 916-919 (2008).
- Kaufman, R. J. Orchestrating the unfolded protein response in health and disease. J Clin Invest. 110 (10), 1389-1398 (2002).
- Ron, D., Walter, P. Signal integration in the endoplasmic reticulum unfolded protein response. Nat Rev Mol Cell Biol. 8 (7), 519-529 (2007).
- Marciniak, S. J., Garcia-Bonilla, L., Hu, J., Harding, H. P., Ron, D. Activation-dependent substrate recruitment by the eukaryotic translation initiation factor 2 kinase PERK. J Cell Biol. 172 (2), 201-209 (2006).
- Harding, H. P., Zhang, Y., Ron, D. Protein translation and folding are coupled by an endoplasmic-reticulum-resident kinase. Nature. 397 (6716), 271-274 (1999).
- Vattem, K. M., Wek, R. C. Reinitiation involving upstream ORFs regulates ATF4 mRNA translation in mammalian cells. Proc Natl Acad Sci U S A. 101 (31), 11269-11274 (2004).
- Harding, H. P., et al. An integrated stress response regulates amino acid metabolism and resistance to oxidative stress. Mol Cell. 11 (3), 619-633 (2003).
- Novoa, I., Zeng, H., Harding, H. P., Ron, D. Feedback inhibition of the unfolded protein response by GADD34-mediated dephosphorylation of eIF2α. J Cell Biol. 153 (5), 1011-1021 (2001).
- Haze, K., Yoshida, H., Yanagi, H., Yura, T., Mori, K. Mammalian transcription factor ATF6 is synthesized as a transmembrane protein and activated by proteolysis in response to endoplasmic reticulum stress. Mol Biol Cell. 10 (11), 3787-3799 (1999).
- Ye, J., et al. ER stress induces cleavage of membrane-bound ATF6 by the same proteases that process SREBPs. Mol Cell. 6 (6), 1355-1364 (2000).
- Tirasophon, W., Welihinda, A. A., Kaufman, R. J. A stress response pathway from the endoplasmic reticulum to the nucleus requires a novel bifunctional protein kinase/endoribonuclease (Ire1p) in mammalian cells. Genes Dev. 12 (12), 1812-1824 (1998).
- Yoshida, H., Matsui, T., Yamamoto, A., Okada, T., Mori, K. XBP1 mRNA is induced by ATF6 and spliced by IRE1 in response to ER stress to produce a highly active transcription factor. Cell. 107 (7), 881-891 (2001).
- Calfon, M., et al. IRE1 couples endoplasmic reticulum load to secretory capacity by processing the XBP-1 mRNA. Nature. 415 (6867), 92-96 (2002).
- Wu, J., et al. ATF6α optimizes long-term endoplasmic reticulum function to protect cells from chronic stress. Dev Cell. 13 (3), 351-364 (2007).
- Shoulders, M. D., et al. Stress-independent activation of XBP1s and/or ATF6 reveals three functionally diverse ER proteostasis environments. Cell Rep. 3 (4), 1279-1292 (2013).
- Oslowski, C. M., Urano, F. Measuring ER stress and the unfolded protein response using mammalian tissue culture system. Methods Enzymol. 490, 71-92 (2011).
- Gupta, S., Samali, A., Fitzgerald, U., Deegan, S. Methods for monitoring endoplasmic reticulum stress and the unfolded protein response. Int J Cell Biol. 2010, 830307 (2010).
- Wang, M., Kaufman, R. J. Protein misfolding in the endoplasmic reticulum as a conduit to human disease. Nature. 529 (7586), 326-335 (2016).
- Beriault, D. R., Werstuck, G. H. Detection and quantification of endoplasmic reticulum stress in living cells using the fluorescent compound, Thioflavin T. Biochim Biophys Acta. 1833 (10), 2293-2301 (2013).
- Tripathi, A., Iyer, K., Mitra, D. HIV-1 replication requires optimal activation of the unfolded protein response. FEBS Lett. 597 (23), 2908-2930 (2023).
- Platt, E. J., Wehrly, K., Kuhmann, S. E., Chesebro, B., Kabat, D. Effects of CCR5 and CD4 cell surface concentrations on infections by macrophagetropic isolates of human immunodeficiency virus type 1. J Virol. 72 (4), 2855 (1998).
- Gervaix, A., West, D., Leoni, L. M., Richman, D. D., Wong-Staal, F., Corbeil, J. A new reporter cell line to monitor HIV infection and drug susceptibility in vitro. Proc Natl Acad Sci U S A. 94 (9), 4653-4658 (1997).
- Augustine, T., et al. Cyclin F/FBXO1 interacts with HIV-1 viral infectivity factor (Vif) and restricts progeny virion infectivity by ubiquitination and proteasomal degradation of vif protein through SCFcyclin F E3 ligase machinery. J Biol Chem. 292 (13), 5349-5363 (2017).
- Shihan, M. H., Novo, S. G., Le Marchand, S. J., Wang, Y., Duncan, M. K. A simple method for quantitating confocal fluorescent images. Biochem Biophys Rep. 25, 100916 (2021).
- Treiman, M., Caspersen, C., Christensen, S. B. A tool coming of age: Thapsigargin as an inhibitor of sarco-endoplasmic reticulum Ca2+-ATPases. Trends Pharmacol Sci. 19 (4), 131-135 (1998).
- Moffat, J., et al. A lentiviral RNAi library for human and mouse genes applied to an arrayed viral high-content screen. Cell. 124 (6), 1283-1298 (2006).
- Sodroski, J., Rosen, C., Goh, W. C., Haseltine, W. A Transcriptional activator protein encoded by the x-lor region of the human T-cell leukemia virus. Science. 228 (4706), 1430-1434 (1985).
- Rosen, C. A., Sodroski, J. G., Kettman, R., Haseltine, W. A. Activation of enhancer sequences in type II human T-cell leukemia virus and bovine leukemia virus long terminal repeats by virus-associated trans-acting regulatory factors. J Virol. 57 (3), 738-744 (1986).
- Dandekar, D. H., Kumar, M., Ladha, J. S., Ganesh, K. N., Mitra, D. A quantitative method for normalization of transfection efficiency using enhanced green fluorescent protein. Anal Biochem. 342 (2), 341-344 (2005).
- Mahmood, T., Yang, P. C. Western blot: Technique, theory, and trouble shooting. N Am J Med Sci. 4 (9), 429-434 (2012).
- Ghosh, R., Gilda, J. E., Gomes, A. V. The necessity of and strategies for improving confidence in the accuracy of western blots. Expert Rev Proteomics. 11 (5), 549-560 (2014).
- Peña, J., Harris, E. Dengue virus modulates the unfolded protein response in a time-dependent manner. J Biol Chem. 286 (16), 14226-14236 (2011).
- Soboleski, M. R., Oaks, J., Halford, W. P. Green fluorescent protein is a quantitative reporter of gene expression in individual eukaryotic cells. FASEB J. 19 (3), 440-442 (2005).
- Martinez, Z. S., Castro, E., Seong, C. S., Cerón, M. R., Echegoyen, L., Llano, M. Fullerene derivatives strongly inhibit HIV-1 replication by affecting virus maturation without impairing protease activity. Antimicrob Agents Chemother. 60 (10), 5731-5741 (2016).
- Askari, S., Javadpour, P., Rashidi, F. S., Dargahi, L., Kashfi, K., Ghasemi, R. Behavioral and molecular effects of Thapsigargin-induced brain ER- stress: Encompassing inflammation, MAPK, and insulin signaling pathway. Life. 12 (9), 1374 (2022).
- Jaskulska, A., Janecka, A. E., Gach-Janczak, K. Thapsigargin-from traditional medicine to anticancer drug. Int J Mol Sci. 22 (1), 4 (2021).
- Shaban, M. S., et al. Multi-level inhibition of coronavirus replication by chemical ER stress. Nat Commun. 12 (1), 5536 (2021).
- Marciniak, S. J., Chambers, J. E., Ron, D. Pharmacological targeting of endoplasmic reticulum stress in disease. Nat Rev Drug Discov. 21 (2), 115-140 (2022).
- Sriburi, R., Jackowski, S., Mori, K., Brewer, J. W. XBP1: A link between the unfolded protein response, lipid biosynthesis, and biogenesis of the endoplasmic reticulum. J Cell Biol. 167 (1), 35-41 (2004).
- Siwecka, N., Rozpędek-Kamińska, W., Wawrzynkiewicz, A., Pytel, D., Diehl, J. A., Majsterek, I. The structure, activation and signaling of IRE1 and its role in determining cell fate. Biomedicines. 9 (2), 156 (2021).
