إكس فيفو ثقافة التروية للأوعية الدموية الكبيرة في مفاعل حيوي مطبوع 3D
Summary
يقدم هذا البروتوكول إعداد وتشغيل مفاعل حيوي مطبوع 3D تم تطويره حديثا للثقافة خارج الجسم الحي للأوعية الدموية في التروية. تم تصميم النظام ليتم اعتماده بسهولة من قبل المستخدمين الآخرين ، وعملي ، وبأسعار معقولة ، وقابل للتكيف مع التطبيقات التجريبية المختلفة ، مثل علم الأحياء الأساسي والدراسات الدوائية.
Abstract
تشكل أمراض الأوعية الدموية أساس معظم أمراض القلب والأوعية الدموية (CVDs) ، والتي لا تزال السبب الرئيسي للوفيات والمراضة في جميع أنحاء العالم. هناك حاجة ماسة إلى التدخلات الجراحية والدوائية الفعالة للوقاية من أمراض الأوعية الدموية وعلاجها. جزئيا ، يحد النقص في النماذج الانتقالية من فهم العمليات الخلوية والجزيئية التي تنطوي عليها أمراض الأوعية الدموية. توفر المفاعلات الحيوية لاستزراع التروية خارج الجسم الحي منصة مثالية لدراسة الأوعية الحيوانية الكبيرة (بما في ذلك البشر) في بيئة ديناميكية خاضعة للرقابة ، تجمع بين سهولة الزراعة في المختبر وتعقيد الأنسجة الحية. ومع ذلك ، فإن معظم المفاعلات الحيوية مصنعة حسب الطلب وبالتالي يصعب اعتمادها ، مما يحد من إمكانية استنساخ النتائج. تقدم هذه الورقة نظاما مطبوعا ثلاثي الأبعاد يمكن إنتاجه وتطبيقه بسهولة في أي مختبر بيولوجي ، ويوفر بروتوكولا مفصلا لإعداده ، مما يتيح تشغيل المستخدمين. يتيح نظام زراعة التروية المبتكر والقابل للتكرار زراعة الأوعية الدموية لمدة تصل إلى 7 أيام في الظروف الفسيولوجية. نتوقع أن اعتماد مفاعل حيوي موحد للتروية سيدعم فهما أفضل للعمليات الفسيولوجية والمرضية في الأوعية الدموية الحيوانية الكبيرة ويسرع اكتشاف علاجات جديدة.
Introduction
يوجد جدار الأوعية الدموية في حالة مستقرة تفاعلية ، مما يضمن كلا من الاستجابة للمنبهات الخارجية (أي تغيير الضغط ، مضيقات الأوعية) وسطح ثابت غير منشط يمنع تخثر الدم وتسلل الخلايا الالتهابية1. استجابة للمحفزات التي تعتمد على الشيخوخة ونمط الحياة وعند التلف المباشر ، ينشط جدار الأوعية الدموية عمليات إعادة البناء مثل عودة التضيق وتصلب الشرايين ، والتي من المساهمين المعروفين في أمراض القلب والأوعية الدموية الشائعة (CVDs) ، مثل السكتة الدماغية واحتشاء عضلة القلب2. في حين أن الأساليب التدخلية مثل إعادة التوعي عن طريق الجلد والدعامات متاحة لمعالجة المظاهر المتقدمة لأمراض الأوعية الدموية ، فمن المعروف أنها تثير المزيد من تلف الأوعية الدموية ، مما يؤدي في كثير من الأحيان إلى تكرارها. بالإضافة إلى ذلك ، لا تتوفر سوى حلول وقائية ومرحلة مبكرة محدودة. إن فهم الآليات التي تحافظ على توازن جدار الأوعية الدموية ودفع اختلاله الوظيفي هو في صميم تطوير علاجات جديدة3.
على الرغم من التطور المستمر والتقدم في البيولوجيا الجزيئية وهندسة الأنسجة ، تظل الدراسات على مكونا حاسما في دراسات بيولوجيا الأوعية الدموية. قدمت الدراسات على في الجسم الحي نظرة ثاقبة هائلة حول آليات التوازن الوعائي وعلم الأمراض. ومع ذلك ، فإن هذه الإجراءات مكلفة ، ولها إنتاجية منخفضة نسبيا ، وتطرح قضايا أخلاقية كبيرة. بالإضافة إلى ذلك ، فإن الصغيرة لا تمثل بشكل جيد فسيولوجيا الأوعية الدموية البشرية ، والتجارب على الأكبر حجما أغلى بكثير وتخلق المزيد من الاعتبارات الأخلاقية 4,5. مع تزايد الطلب على الحلول الصيدلانية والطبية لشيخوخة السكان بسرعة ، تتضخم الجوانب السلبية لاستخدام ، مما يؤثر على قابلية استنساخ النتائج وموثوقيتها وإمكانية نقلها إلى رعاية المرضى6.
توفر الأنظمة في المختبر منصة مبسطة لدراسة الآليات الأساسية ولكنها تفشل في تلخيص تعقيد الأنسجة بأكملها ، والتفاعلات بين الخلايا والمصفوفة خارج الخلية ، والقوى الميكانيكية ، والتي تعد محددات حاسمة في تطور أمراض الأوعية الدموية7.
تحاكي الدراسات خارج الجسم الحي التي أجريت على الأنسجة الكاملة المحفوظة في بيئات يتم التحكم فيها بشكل مصطنع التعقيد في الجسم الحي مع تمكين التحقيقات عالية الإنتاجيةنسبيا 8. نظرا للقدرة على التحكم عن كثب في ظروف الاستزراع والبيئة ، تسمح النماذج خارج الجسم الحي بمجموعة واسعة من الدراسات المعقدة وتوفر بديلا مناسبا لتقليل استخدام الإجراءات الحيوانية في بيولوجيا الأوعية الدموية. قدمت ثقافات الحلقة الوعائية الثابتة رؤى مثيرة للاهتمام ولكنها فشلت في دمج عنصر الدورة الدموية الحاسم9. في الواقع ، تطرح دراسة نظام الأوعية الدموية خارج الجسم الحي تحديات محددة تتعلق بالعديد من القوى الديناميكية التي تنطبق على الخلايا داخل جدار الأوعية الدموية. تؤثر المحفزات مثل التدفق اللمعي والاضطراب وإجهاد القص والضغط وتشوه الجدار بشكل كبير على الفيزيولوجيا المرضية للأنسجة10،11،12.
تعتبر المفاعلات الحيوية للتروية ضرورية لدراسة التوازن الوعائي وإعادة تشكيله استجابة للإصابة أو تغيرات الدورة الدموية13. علاوة على ذلك ، يمكن استخدام مزرعة التروية لتحسين نضج ومتانة الأوعية الدموية المهندسة بالأنسجة (TEBVs) ، مما يوفر بدائل مناسبة لترقيع الأوعية الدموية14.
المفاعلات الحيوية للتروية المتاحة تجاريا محدودة من حيث المرونة والقدرة على التكيف وهي مكلفة. بدلا من ذلك ، يصعب تكرار العديد من المفاعلات الحيوية المطورة داخليا في مختبرات أخرى ، بسبب الأوصاف المحدودة وعدم توفر المكوناتالمصنوعة خصيصا 7،8،9،10،11،12. للتغلب على هذه القيود ، قمنا مؤخرا بتطوير مفاعل حيوي جديد (EasyFlow) ، وهو اقتصادي في الإنتاج ، ويستوعب مجموعة من الأنسجة ، ويتيح تعديلات بسيطة نسبيا للتكيف مع متطلبات البحث المختلفة13. الملحق مطبوع 3D ويناسب كما هو الحال في غطاء أنبوب طرد مركزي قياسي سعة 50 مل. تصميمها المعياري وتصنيع الطباعة 3D يجعلها متاحة وقابلة للتكرار عبر مختبرات مختلفة ، وكذلك قابلة للتعديل بسهولة للتكيف مع الاحتياجات العلمية المختلفة. يصف هذا البروتوكول التجميع والتشغيل الأساسي لنظام المفاعل الحيوي في بيئة التروية الشريانية.
Protocol
Representative Results
Discussion
تشكل أنظمة التروية الوعائية خارج الجسم الحي منصة فريدة لدراسة وظيفة وسلوك خلايا الأوعية الدموية داخل أنسجتها الأصلية في ظل ظروف خاضعة للرقابة ، مما يتيح تشريح العمليات المعقدة مثل إعادة تشكيل الأوعية الدموية بعد الإصابة22. ومع ذلك ، فإن معظم المفاعلات الحيوية المبلغ عنها هي أنظمة داخلية الصنع تعتمد على مكونات مصنوعة خصيصا وغالبا ما يصعب تكرارها من قبل الآخرين23. توجد حلول تجارية بديلة ، ولكنها تفتقر إلى المرونة في التصميم ويمكن أن تكون مكلفة نسبيا24.
لقد قمنا بتطوير نظام بديل يوفر منصة سهلة ورخيصة وقابلة للتكرار يمكن تصنيعها باستخدام تقنيات الطباعة ثلاثية الأبعاد مفتوحة المصدر13. توضح هذه المقالة إعداد النظام لتمكين التطبيقات القابلة للتكرار من قبل المستخدمين النهائيين. يتيح هذا الإعداد تطبيق الظروف الفسيولوجية والمرضية للضغط (40-180 مم زئبق) ، ومعدل التدفق (6-30 مل / دقيقة) ، وبالاقتران مع الوسائط التي تحاكي لزوجة الدم ، بدرجات متفاوتة من إجهاد القص.
تعد قابلية التكاثر جانبا أساسيا من العملية العلمية ، لأنها تسمح للباحثين بالتحقق من صحة نتائج الآخرين والبناء عليها للتقدم في فهمنا لأمراض الأوعية الدموية. علاوة على ذلك ، فإن الأدوات التي تمكن وتعزز التعاون بين المجموعات ضرورية للنهوض بالمعرفة العلمية. يمثل EasyFlow مثالا على هذه الحلول مفتوحة المصدر والتي يمكن الوصول إليها والتي يمكن إنتاجها واعتمادها بسهولة من قبل المختبرات التي تعمل في مجموعة واسعة من المشاريع في مجال علوم الأوعية الدموية وخارجها.
أبلغنا أن ثقافة الجهاز هذه تحافظ على صلاحية الأنسجة الشريانية لمدة 7 أيام على الأقل ، ويمكن استخدامها لنمذجة خطوات محددة لأمراض الأوعية الدموية. باستخدام هذا ، يمكن للمرء نمذجة معدلات التدفق الفسيولوجية وظروف الضغط13. الأهم من ذلك ، أن ثقافة التروية هذه فعالة من حيث التكلفة بسبب انخفاض تكاليف الإنتاج وانخفاض حجم الوسط اللازم لتشغيل النظام.
يمكن أيضا تكييف تصميم 3D مع التطبيقات الجديدة ، ويمكن اختبار مواد جديدة للطباعة. حتى في شكلها الحالي ، يمكن تكييف مساحة الإقامة النموذجية بسهولة مع عينات ذات أحجام مختلفة عن طريق تغيير طول التركيبات أو تجويف موصلات luer. من المهم ملاحظة أنه نظرا للطبيعة المعيارية للجهاز وأبعاده الصغيرة ، يمكن استخدام هذا المفاعل الحيوي في العديد من الإعدادات (الشكل 5) ويمكن تطبيقه على الثقافات المتعددة ، حيث يمكن أن تتعرض عدة عينات لظروف مختلفة في نفس الوقت في مفاعلات حيوية منفصلة.
من المتوقع أن يتم توسيع استخدام النظام في المستقبل لدعم زراعة الأوعية الدموية من أصول مختلفة (على سبيل المثال ، أنواع مختلفة) وذات طبيعة مختلفة (مثل الأوردة واللمفاوية) ، وربما يتم تطبيقها على زراعة الأنسجة المجوفة الأخرى (مثل القصبة الهوائية والأمعاء). على وجه الخصوص ، تظهر الأبحاث أن زراعة السقالات المهندسة بالأنسجة في التروية المستمرة يساعد على التوزيع المتجانس للخلايا داخل بناء ونضج الأنسجة الناتجة25,26. بالإضافة إلى ذلك ، يساهم زرع الطعوم الوعائية في التروية في تحقيق تجويف وعائي خلوي أكثر اتساقا ، مقارنة بالطرقالثابتة 27. لهذا السبب ، نتصور أن يتم تطبيق النظام على هندسة الأنسجة للمساعدة في مواجهة التحديات الحالية ، مما يسمح بالتطوير المستقبلي لبدائل الأوعية الدموية الاصطناعية القابلة للتكرار28.
يقدم البروتوكول الموصوف هنا بعض الخطوات المهمة الحاسمة لنجاح ثقافة التدفق. إن إنشاء ومراقبة ظروف التدفق المناسبة ليس بالأمر الهين ويجب إجراؤه على كل نظام عند إعداده لأول مرة ، للتأكد من أن ظروف الاستزراع فسيولوجية. تمت مراقبة التدفق والضغط باستخدام مستشعرات الضغط والتصوير بالموجات فوق الصوتية. نقطة أخرى حاسمة هي التأكد من أن الأنسجة قابلة للحياة وسليمة في بداية الثقافة. وهذا يتطلب مصدرا جديدا ومعالجة دقيقة ويمكن التحقق منه عن طريق التحليل النسيجي. بالإضافة إلى ذلك ، يجب إجراء استكشاف الأخطاء وإصلاحها في بداية كل تجربة لتحديد أي تلوث بكتيري محتمل أو مصدر تسرب الوسائط.
من المهم تسليط الضوء على أن نظام التروية الموصوف ، مع توفير الضغط الفسيولوجي وظروف التدفق ، غير قادر على تقليد أنماط موجة الضغط المعقدة المسجلة في الجسم الحي تماما. يعزى هذا القيد إلى استخدام مضخة تمعجية ويمكن حلها باستخدام معدات أكثر تخصصا لإعادة إنتاج ظروف الدورة الدموية المتقدمة. كما أن زراعة الأوعية الدموية في المفاعل الحيوي غير قادرة على معالجة الدراسات التي يكون فيها الجهاز المناعي أو التفاعل مع الأعضاء الأخرى أمرا بالغ الأهمية.
في الختام ، يتم تقديم نظام نضح مطبوع 3D بسيط يمكنه تقليد بيئة الدورة الدموية الفسيولوجية ، والتي من المتوقع أن تساهم في توحيد ثقافات الأوعية الدموية خارج الجسم الحي . إن قدرتها على التخصيص والتطبيق على الثقافة طويلة الأجل تجعلها أداة أساسية لتعزيز فهم هذه الأنظمة البيولوجية المعقدة في علم وظائف الأعضاء والحالات المرضية.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
يود المؤلفون أن يشكروا مركز علم الأمراض البيطرية في كلية الطب البيطري بجامعة ساري على خدمات علم الأنسجة. كما نشكر الدكتور ل. ديكسون ، أ. ريس ، و م. هينستوك من معهد بيربرايت (بيربرايت ، المملكة المتحدة) على دعمهم في شراء الأنسجة الحيوانية ، وقسم العلوم الكيميائية الحيوية في جامعة ساري ، وخاصة الفريق الفني ، على دعمهم المستمر. تم دعم RSM من خلال جائزة منحة كلية الدكتوراه (جامعة ساري) ، وتم دعم DM و PC من قبل المركز الوطني لاستبدال وصقل وتقليل في الأبحاث (أرقام المنح: NC / R001006 / 1 و NC / T001216 / 1).
Materials
| EasyFlow | – | – | 3D printed by MultiJet Fusion by Protolabs |
| PA12 – 3D printing | Protolabs | – | – |
| Peristaltic pump | Heidolph | PD5201 | |
| Culture media components: | |||
| Amphotericin B solution, 250 mug/mL in deionized water | Sigma-Aldrich | A2942-20ML | |
| Dextran from Leuconostoc spp. | Sigma-Aldrich | D8802-25ML | |
| Dulbecco's Modified Eagle's Medium – high glucose, w/ 4500 mg/L glucose, L-glutamine, sodium pyruvate, and sodium bicarbonate | Sigma-Aldrich | D6429-6X500ML | |
| Fetal Bovine Serum | Sigma-Aldrich | F9665 | |
| Penicillin-Streptomycin | Sigma-Aldrich | P4333-100ML | |
| Immunostaining materials: | |||
| Cryostat | LEICA | CM3050 S | |
| DAPI | Sigma-Aldrich | D9542-10MG | |
| Goat serum | Sigma-Aldrich | G9023-10ML | |
| Goat α-Rabbit Alexa Fluor 488 | Thermo Fisher Scientific | A11008 | |
| Invitrogen eBioscience Fluoromount G | Thermo Fisher Scientific | 50-187-88 | |
| MX35 Premier + Microtome Blade | Thermo Scientific | 3052835 | |
| Optimal Cooling Tempearure Compound – OCT | Agar Scientific | AGR1180 | |
| Rabbit α-CD31 antibody | Abcam | ab28364 | |
| Sudan Black B | Santa Cruz Biotechnology | SC-203760 | |
| X72 SuperFrost Plus Adhesion slide, 25x75x1mm, White, 90° Ground Edges, Frosted Area 20mm, 72/box | Fisher Scientific | J1800AMNZ | |
| α-Smooth Muscle Actin (SMA) Alexa Fluor® 647-conjugated antibody | R&D Systems | IC1420R | |
| Material for laser cutting of components: | |||
| Clear Plastic Sheet, 1250 mm x 610 mm x 1 mm (for laser cutting of washers) | RS Components | 258-6590 | |
| RS PRO Translucent Rubber Sponge Sheet, 600 mm x 600 mm x 1.5 mm (for laser cutting of silicone seals) | RS Components | 840-5541 | |
| Optional pressure monitors: | |||
| Pressure sensor | Parker Hannifin | 080-699PSX-3P-5 | |
| SciPres Pressure Monitor | Parker Hannifin | 206-200-M | |
| Pre-sterilized single use plasticware: | |||
| 0.2 um filter | Sarstedt | 70.1114.210 | |
| 20 mL Sterile syringe | IMS Euro | 40004 | |
| 50 mL Centrifuge Tube | Thermo Fisher Scientific | Sarstedt – 62.547.254 | |
| Small components: | |||
| Cable ties | – | – | |
| Masterflex Adapter Fittings, Female Luer to Hose Barb | Cole-Parmer | WZ-30800-10 | Barb Adaptor |
| Masterflex Polycarbonate Luer Fittings | Cole-Parmer | AU-45504-84 | |
| Nylon Miniature Check Valve | Cole-Parmer | 98553-00 | |
| RS PRO Translucent Rubber Sponge Sheet, 600 mm x 600 mm x 1.5 mm (for laser cutting of silicone seals) | RS Components | 840-5541 | |
| Stainless Steel M2 Hex Nuts | RS Components | 527-218 | |
| Stainless Steel M2 x 6 mm Screws | RS Components | 418-7426 | |
| Stainless Steel M5 Hex Nuts | RS Components | 189-585 | |
| Surgical vessel loop | Vascular Silicone Ties,International Medical Supplies | 10-1003 | |
| Three-way valves | IMS Euro | 91000 | |
| Surgical Equipment | |||
| Anatomical Forceps, GRAEFE, Curved, 10 cm SKU: BD-07 | International Medical Supplies | SKU: BD-07 | |
| Micro Forceps, Angled, 0.3 mm, 11 cm | International Medical Supplies | SKU: BD-361 | |
| Micro Scissors Noyes, Curved, 12 cm | International Medical Supplies | SKU: FD-12 | |
| Troge Surgical Scalpels – Size 23 – Box of 100 | International Medical Supplies | 63114 | |
| Tubing: | |||
| Eppendorf silicone tubing (I.D.1.6 mm, O.D.4.7 mm) | Eppendorf | M0740-2396 | System tubing |
| Masterflex PharMed BPT 3-Stop Tubing | ISMATEC | 95714-48 | Soft wall tubing (for clamp) |
| RS PRO Transparent Hose Pipe, 0.8 mm ID, Silicone | RS Components | 667-8432 | Resistance tubing (small inner diameter) |
| Tygon for food (I.D. 4.8 mm, W.T. 1.6 mm) | Heidolph | 525-30027-00-0 | One way valve tube |
| Verderflex Yellow Hose Pipe, 6.4 mm ID, Verderprene | RS Components | 125-4042 | Pump Tubing |
References
- Davies, P. F., Civelek, M., Fang, Y., Fleming, I. The atherosusceptible endothelium: Endothelial phenotypes in complex haemodynamic shear stress regions in vivo. Cardiovascular Research. 99 (2), 315-327 (2013).
- Gugliandolo, E., et al. Palmitoylethanolamide and Polydatin combination reduces inflammation and oxidative stress in vascular injury. Pharmacological Research. 123, 83-92 (2017).
- Anselmino, M., et al. Catheter ablation of atrial fibrillation in patients with left ventricular systolic dysfunction: A systematic review and meta-analysis. Circulation, Arrhythmia, and Electrophysiology. 7 (6), 1011-1018 (2014).
- Viola, M., et al. Subcutaneous delivery of monoclonal antibodies: How do we get there. Journal of Controlled Release. 286, 301-314 (2018).
- Kim, D. D. In vitro cellular models for nasal drug absorption studies. Drug Absorption Studies: In Situ, In Vitro and In Silico Models. , 216-234 (2008).
- Lewis, D. I. Animal experimentation: Implementation and application of the 3Rs. Emerging Topics in Life Sciences. 3 (6), 675-679 (2019).
- Rouwkema, J., et al. In vitro platforms for tissue engineering: Implications for basic research and clinical translation. Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. 5 (8), e164-167 (2011).
- Xu, Y., Shrestha, N., Préat, V., Beloqui, A. An overview of in vitro, ex vivo and in vivo models for studying the transport of drugs across intestinal barriers. Advanced Drug Delivery Reviews. 175, 113795 (2021).
- Vaghela, R., et al. Vessel grafts for tissue engineering revisited-Vessel segments show location-specific vascularization patterns in ex vivo ring assay. Microcirculation. 29 (2), e12742 (2022).
- Håkansson, J., et al. Individualized tissue-engineered veins as vascular grafts: A proof of concept study in pig. Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. 15 (10), 818-830 (2021).
- Saucy, F., et al. Ex vivo pulsatile perfusion of human saphenous veins induces intimal hyperplasia and increased levels of the plasminogen activator inhibitor 1. European Surgical Research. 45 (1), 50-59 (2010).
- Tosun, Z., McFetridge, P. S. Variation in cardiac pulse frequencies modulates vSMC phenotype switching during vascular remodeling. Cardiovascular Engineering and Technology. 6 (1), 59-70 (2015).
- Matos, R. S., Maselli, D., McVey, J. H., Heiss, C., Campagnolo, P. 3D printed bioreactor enabling the pulsatile culture of native and angioplastied large arteries. Frontiers in Cardiovascular Medicine. 9, 864580 (2022).
- Neff, L. P., et al. Vascular smooth muscle enhances functionality of tissue-engineered blood vessels in vivo. Journal of Vascular Surgery. 53 (2), 426-434 (2011).
- Boparai, K. S., Singh, R. Advances in Fused Deposition Modeling. In: Module. Refrence in Materials Science and Materials Engineering. , (2017).
- McKeen, L. W., McKeen, L. W. Chapter 6 – Polyamides (Nylons). The Effect of Creep and Other Time Related Factors on Plastics and Elastomers (Second Edition). , 197-262 (2012).
- Moradi, M., Mehrabi, O., Azdast, T., Benyounis, K. Y. Enhancement of low power CO2 laser cutting process for injection molded polycarbonate). Optics & Laser Technology. 96, 208-218 (2017).
- Ghasem, N. . Computer Methods in Chemical Engineering. , (2021).
- Lying, F., Gazi, F., Gardner, E. Preparation of tissues and cells for infrared and raman spectroscopy and imaging. Biomedical Applications of Synchrotron Infrared Microspectroscopy.RSC Analytical Spectroscopy Monographs. (11), 147-185 (2011).
- Sassi, L., et al. A perfusion bioreactor for longitudinal monitoring of bioengineered liver constructs. Nanomaterials. 11 (2), 275 (2021).
- Haykal, S., et al. Double-chamber rotating bioreactor for dynamic perfusion cell seeding of large-segment tracheal allografts: Comparison to conventional static methods. Tissue Engineering. Part C, Methods. 20 (8), 681-692 (2014).
- Kural, M. H., Dai, G., Niklason, L. E., Gui, L. An ex vivo vessel injury model to study remodeling. Cell Transplant. 27 (9), 1375-1389 (2018).
- Wong, M. M., Hong, X., Karamariti, E., Hu, Y., Xu, Q. Generation and grafting of tissue-engineered vessels in a mouse model. Journal of Visualized Experiments. (97), 52565 (2015).
- Alvino, V. V., et al. In vitro and in vivo preclinical testing of pericyte-engineered grafts for the correction of congenital heart defects. Journal of the American Heart Association. 9 (4), e014214 (2020).
- Nerurkar, N. L., Sen, S., Baker, B. M., Elliott, D. M., Mauck, R. L. Dynamic culture enhances stem cell infiltration and modulates extracellular matrix production on aligned electrospun nanofibrous scaffolds. Acta Biomaterialia. 7 (2), 485-491 (2011).
- Engebretson, B., Mussett, Z. R., Sikavitsas, V. I. The effects of varying frequency and duration of mechanical stimulation on a tissue-engineered tendon construct. Connective Tissue Research. 59 (2), 167-177 (2018).
- Saunders, S. K., et al. Evaluation of perfusion-driven cell seeding of small diameter engineered tissue vascular grafts with a custom-designed seed-and-culture bioreactor. PLoS One. 17 (6), e0269499 (2022).
- Stephenson, M., Grayson, W. Recent advances in bioreactors for cell-based therapies. F1000Research. 7, (2018).
