تصنيع الجسيمات الدقيقة البوليمرية النابضة التي تغلف مستضد داء الكلب
Summary
تصف هذه الطريقة تغليف مستضد داء الكلب إلى جسيمات دقيقة بوليمرية قابلة للتحلل الحيوي ذات خصائص هيكلية ومادية تمكن من إطلاق النبض بعد تأخير محدد مسبقا. يؤكد تقييم مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) للمستضد المسترد من قلب الجسيمات وجود بروتين سكري سليم لفيروس داء الكلب الثلاثي من خلال تصنيع الجسيمات.
Abstract
تتطلب المبادئ التوجيهية الحالية للوقاية من داء الكلب بعد التعرض إعطاء حقن متعددة على مدى عدة أسابيع. ويمكن أن يشكل ذلك عبئا غير متناسب على أولئك الذين يعيشون في البلدان المنخفضة والمتوسطة الدخل، حيث تحدث غالبية حالات التعرض المميتة لداء الكلب. تم استكشاف استراتيجيات مختلفة لتوصيل الأدوية لتكثيف أنظمة اللقاح في حقنة واحدة عن طريق تغليف المستضدات في جزيئات بوليمرية. ومع ذلك ، يمكن أن تتسبب الضغوطات القاسية أثناء عملية التغليف في تمسخ المستضد المغلف. توضح هذه المقالة طريقة لتغليف مستضد فيروس داء الكلب (RABV) في جسيمات دقيقة بوليمرية تظهر إطلاقا نابضا قابلا للضبط. هذه الطريقة ، التي تسمى الجسيمات المسالة بشكل موحد ومختومة لتغليف الأدوية (PULSED) ، تولد الجسيمات الدقيقة باستخدام الطباعة الحجرية الناعمة لإنشاء قوالب بوليديميثيل سيلوكسان معكوسة (PDMS) من قالب رئيسي متعدد الفوتون ، مطبوع 3D. ثم يتم تشكيل أفلام Poly (حمض اللاكتيك المشترك في الجليكوليك) (PLGA) بالضغط في قوالب PDMS لإنشاء أسطوانات مفتوحة الوجه مملوءة ب RABV المركز باستخدام روبوت توزيع كهرضغطية. ثم يتم إغلاق هذه الهياكل المجهرية عن طريق تسخين الجزء العلوي من الجسيمات ، مما يسمح للمادة بالتدفق وتشكيل حاجز بوليمري مستمر غير مسام. بعد التصنيع ، يتم استخدام مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) الخاصة بالكشف عن البروتين السكري لفيروس داء الكلب الثلاثي السليم لتأكيد الانتعاش العالي للمستضد المناعي من الجسيمات الدقيقة.
Introduction
التطعيم هو أداة رعاية صحية فعالة للغاية ، حيث منع أكثر من 37 مليون حالة وفاة بين عامي 2000 و 20191. وعلى الرغم من هذه الفعالية، لا تزال الأمراض التي يمكن الوقاية منها باللقاحات تشكل خطرا كبيرا على الصحة العالمية، لا سيما في البلدان المنخفضة والمتوسطة الدخل حيث تساهم المعدلات المرتفعة لعدم التطعيم أو نقصه في 1.5 مليون حالة وفاة يمكن الوقاية منها باللقاحاتسنويا2. داء الكلب ليس استثناء من هذه التفاوتات. على الرغم من وضعه باعتباره أكثر الأمراض فتكا التي عرفتها البشرية ، كونه مميتا على مستوى العالم تقريبا ، فإن داء الكلب قابل للعلاج بالكامل ويصنف على أنه تم القضاء عليه في العديد من البلدان المرتفعة الدخل. بدلا من ذلك ، يتحمل عبء داء الكلب بشكل غير متناسب الأشخاص الذين يعيشون في أجزاء من آسيا وأفريقيا ، حيث يكون للمرض نتائج مدمرة على البشر والماشية 3,4.
التطعيم أمر بالغ الأهمية لإدارة التأثير العالمي لداءالكلب 5. تحظر تكلفة التطعيم التنفيذ الواسع النطاق للوقاية قبل التعرض (PrEP) ، مع الأخذ في الاعتبار انخفاض معدل الإصابة بالمرض بشكل عام. علاوة على ذلك ، في البلدان المنخفضة والمتوسطة الدخل ، تكون فائدة العلاج الوقائي بعد التعرض (PEP) محدودة بسبب الضغوط الاجتماعية والاقتصادية على المرضى الذين يسعون للحصول على الرعاية الصحية. تؤدي العوامل اللوجستية ، مثل مسافة السفر إلى نقاط الوصول إلى الرعاية الصحية ، والأجور المفقودة أثناء الحصول على العلاج ، وتكلفة العلاج ، والمواعيد التي تتداخل مع الأنشطة اليومية ، والنسيان ، إلى انخفاض معدلات الالتزام ب PEP إلى 60٪ 6,7. ويمثل معدل استنزاف المرضى المرتفع هذا فرصة لتحسين النهج لمعالجة الثغرات في التطعيم ضد داء الكلب من أجل مكافحة المرض.
تم استكشاف أنظمة التطعيم بحقنة واحدة (SI) التي تتحكم في إطلاق المستضدات كطرق للحصول على التحصين الكامل في حقنة واحدة. إن التخلص من الحاجة إلى زيارات متعددة لمقدم الرعاية الصحية يخفف من الأعباء التي تمنع الأفراد من طلب الرعاية الكافية. لتحقيق التطعيم ضد SI ، عادة ما يتم تغليف المستضد داخل مصفوفة بوليمرية قابلة للتحلل الحيوي والتي غالبا ما تأخذ شكل جسيمات دقيقة قابلة للحقن. بمجرد الحقن ، يتحلل البوليمر ويطلق المستضد المعزول. حتى الآن ، تم اتباع استراتيجيتين أوليتين للإطلاق لتحقيق التطعيم ضد SI. في إحدى الطرق، ينطلق مولد الضد باستمرار على مدى فترة زمنية طويلة. على الرغم من أن الهدف منه هو تعزيز الاستمناع لحقنة واحدة ، إلا أنه من غير الواضح ما إذا كان هذا النهج كافيا لاستنباط استجابة مناعية وقائية ضد فيروس داء الكلب (RABV) في البشر8. في الحالة الأخرى ، يتم إطلاق المستضد بعد تأخير محدد مسبقا لتقليد نظام اللقاح التقليدي والمثبت أولي التعزيز. وتظهر طرق التجفيف بالرذاذ وتصنيع الجسيمات الدقيقة القائمة على المستحلب/تبخر المذيبات الاستراتيجية السابقة، وقد استخدمت لتغليف كل من اللقاحات النموذجية9 والمستضدات عالية الاستقرار بنجاح، مثل ذيفانالكزاز 10. ومع ذلك ، فإن طرق التغليف هذه تتضمن ضغوطا ، بما في ذلك الحرارة وتفاعل المذيبات والقوى الفيزيائية ، التي يمكن أن تفسد المستضدات11.
الجسيمات المسالة بشكل موحد ومختومة لتغليف الأدوية (PULSED) هي طريقة تصنيع تم تطويرها مؤخرا ويمكن استخدامها لتغليف البيولوجيا في الجسيمات الدقيقة القابلة للتحلل. يستخدم Micromolding لتوليد جزيئات مملوءة بحمولة سائلة ويتم تسخينها للسماح للبوليمر بإعادة التدفق وتغليف المستودع المركزي للبضائع بالكامل داخل طبقة متجاورة من البوليمر القابل للتحلل. ينتج عن هذه البنية المجهرية إطلاق نابض للحمولة ، بعد مدة تعتمد على معدل تحلل الغلاف البوليمري12. توضح هذه المخطوطة تغليف RABV المعطل داخل الجسيمات الدقيقة المكونة من بولي (حمض اللاكتيك المشترك الجليكوليك) (PLGA) ، وهو بوليمر قابل للتحلل يستخدم في العديد من التركيبات المعتمدة من إدارة الغذاء والدواء13 ، باستخدام طريقة تصنيع PULSED لتغليف مستضد RABV المستقر كما تم تقييمه بواسطة مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA). من خلال الجمع بين جسيمات PLGA ذات الوزن الجزيئي و / أو المجموعات النهائية المختلفة ، فإن هذا النهج لديه القدرة على تقليد الدورة الزمنية الحالية للتطعيم ضد داء الكلب بعد حقنة واحدة.
Protocol
Representative Results
Discussion
من الممكن تغيير هندسة الجسيمات لتلبية احتياجات محددة ؛ ومع ذلك ، بالنسبة للهياكل الأسطوانية ، يوصي المؤلفون بالحفاظ على نسبة 5: 4: 1 من الارتفاع: القطر: سمك الجدار الموصوف في البروتوكول. تضمن نسبة العرض إلى الارتفاع هذه وجود مادة PLGA كافية لإغلاق الجسيمات وتظل قوية ميكانيكيا بما يكفي للمناولة. يمكن بسهولة تغيير أبعاد وأشكال الجسيمات أثناء عملية CAD ، مما يتيح إنشاء عدد لا يحصى من الأشكال الهندسية. يتيح الجمع بين مرونة CAD والطباعة ثلاثية الأبعاد 3D التكرار السريع لتصميمات الجسيمات الدقيقة. على الرغم من أن هذا البروتوكول يستخدم طابعة ثلاثية الأبعاد متعددة الفوتونات ، إلا أنه يمكن استخدام أي طابعة ثلاثية الأبعاد بمواصفات قادرة على طباعة أبعاد البنية المجهرية في مادة مناسبة لإنشاء القالب الرئيسي الأولي. علاوة على ذلك ، تم استخدام الطباعة الحجرية الضوئية سابقا لجعل هياكل مماثلة في صفائف أكبر بكثير من تلك المنتجة في هذا البروتوكول. ومع ذلك ، فإن العمالة ، والتأخير في طلب الأقنعة الضوئية المصنوعة حسب الطلب ، وإمكانية الوصول إلى المعدات من شأنه أن يبطئ عملية التصميم التكراري16. أخيرا ، يمكن الاستعانة بمصادر خارجية لتوليد القوالب الرئيسية لشركات الرسوم مقابل الخدمة إذا لم يكن تصنيع القوالب الرئيسية الداخلية ممكنا. بغض النظر عن طابعة 3D أو الطريقة المستخدمة لإنشاء القوالب الرئيسية ، فإن التصاق الطباعة بالركيزة أمر بالغ الأهمية لخطوات المصب. على وجه التحديد ، إذا كان الالتصاق غير كاف أثناء إنشاء قالب PDMS ، فستظل الجسيمات المطبوعة موجودة في قالب PDMS ، مما يتطلب إزالة يدوية للجسيمات المطبوعة وتدمير القالب الرئيسي.
ملء الجسيمات هو جانب مهم آخر يجب مراعاته. تتمتع الجسيمات الدقيقة بقدرات تعبئة محدودة ، لذلك يتم استخدام الترشيح ليس فقط لتركيز مستضد RABV ولكن أيضا لإزالة سواغ المخزون التي من شأنها أن تشغل جزءا كبيرا من حجم الجسيمات الدقيقة. ومع ذلك ، نظرا للحجم الكبير لمستضد RABV (حوالي 60 نانومتر × 180 نانومتر) 17 ، فمن الممكن إخراج المستضد جزئيا أثناء خطوات الطرد المركزي. لهذا السبب ، من المهم إعادة تعليق المستضد عن طريق السحب أو الدوامة بعد الطرد المركزي لتحقيق استرداد عالي لمستضد RABV. يعتبر المحلول عالي التركيز مثاليا للتوزيع ، لأنه يقلل من دورات التوزيع وبالتالي يحد من تدهور المستضد أثناء التعبئة. ومع ذلك ، فإن اللزوجة هي أحد القيود الرئيسية على روبوتات التوزيع الكهرضغطية التي تشكل قطرة مستقرة ، لذلك قد لا يكون الاستغناء عن محلول عالي التركيز ممكنا أو مستحسنا. يعد تخفيف محلول التعبئة أسهل طريقة لتحقيق تكوين قطرة مستقر ، ولكن يجب مراعاة استقرار المستضد خلال دورات التعبئة الإضافية اللازمة لتحقيق التحميل المطلوب ومقدار الوقت الأطول المطلوب لملء الجزيئات.
القيود
تتطلب هذه الطريقة معدات عالية التخصص لإنتاج القوالب الأولية وأداة تعبئة متخصصة لإنتاج الجسيمات الدقيقة. على الرغم من أن الحاجة إلى طابعة 3D بدقة طباعة قادرة على توليد القوالب الرئيسية الأولية يمكن تخريبها من خلال نهج الرسوم مقابل الخدمة ، إلا أن إمكانية الوصول إلى روبوت توزيع كهرضغطية محدودة. يتطلب شراء روبوت توزيع كهرضغطية استثمارا أوليا كبيرا مقدما ، غالبا في حدود 80,000 ألف دولار إلى 200,000 ألف دولار ، اعتمادا على العلامة التجارية والإنتاجية والقدرات. على الرغم من أن العديد من طرق التعبئة الأخرى هي بدائل محتملة ، إلا أن هذه الطرق لم يتم التحقق من صحتها باستخدام مستضد RABV12.
التطبيقات المستقبلية
ظلت نسبة كبيرة من مستضد RABV المغلف مستقرة خلال عملية الختم. من الناحية النظرية ، من خلال دمج هذا المستضد في جزيئات تتكون من أنواع مختلفة من PLGA تحاكي الجدول الزمني لإدارة العلاج الوقائي بعد التعرض ، يمكن إعطاء جميع الجرعات في حقنة واحدة. سيؤدي التخلص من الحاجة إلى تكرار زيارات المستشفى لإدارة جرعات إضافية إلى تعزيز امتثال المريض ، مما يؤدي إلى نتائج علاجية أفضل. علاوة على ذلك ، بعد إثبات القدرة على الاحتفاظ بتفاعل ELISA لفيروس داء الكلب المعطل المعقد للغاية ، من المحتمل أن تكون المستضدات الأخرى ، بما في ذلك لقاحات الوحدات الفرعية ، متوافقة مع طريقة التغليف هذه. يمكن أن يؤدي استخدام مستضدات وقائية أخرى مع الجسيمات الدقيقة النبضية إلى إنقاذ ملايين الأرواح في البلدان المنخفضة والمتوسطة الدخل عن طريق زيادة معدلات التطعيم للسكان الذين لم يتم تطعيمهم بشكل كاف. ومع ذلك ، لتحقيق ذلك ، يجب أن تظل اللقاحات مستقرة ليس فقط من خلال التغليف ولكن أيضا من خلال الإطلاق ، الأمر الذي قد يكون صعبا لأن الحمولة ستخضع لدرجات حرارة مرتفعة وبيئة دقيقة حمضية محتملة بسبب حرارة الجسم ومنتجات تحلل PLGA18. سيتبع العمل المستقبلي استراتيجيات استقرار المستضد من خلال الإطلاق ، مما سيفتح إمكانية وجود منصة تطعيم بحقنة واحدة قابلة للتطبيق على نطاق واسع للوقاية من العديد من الأمراض المعدية.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
نشكر Chiron Behring و Bharat Biotech International على تزويد الجسيمات للبشرية بمستضد RABV. نود أيضا أن نعرب عن تقديرنا لتشارلز روبريخت ، VMD ، MS ، PhD. ، لتوجيهاته ومساهماته الفنية التي لا تقدر بثمن. يود المؤلفون أن يشكروا كرم الدكتورة ريبيكا ريتشاردز كورتوم للسماح باستخدام جهاز توزيع بيكولتر SciFLEXARRAYER S3 وتعليمات الدكتورة تشيلسي سميث حول استخدام الجهاز. كما نعترف بكلية الطب بجامعة ماساتشوستس تشان لتوليد صور مجهرية لمستضد داء الكلب. وأخيرا، نشكر دون تشيكرينغ وإيرين يوليانو على مراجعة الوثيقة قبل تقديمها. تم دعم هذا العمل بمنحة (INV-004360) من مؤسسة بيل وميليندا غيتس.
Materials
| 0.22 µm PES filter | Cole-Parmer+B4B2:B63 | 04396-26 | |
| 0.25 mm Shims | McMaster Carr | 98090A935 | |
| 0.75 inch Binder Clips | Staples | 480114 | |
| 10 mL Syringe | Becton, Dickinson and Company | 309604 | |
| 10 mL Sterile Polystyrene Disposable Serological Pipets with Magnifier Stripe | Fisherbrand | 13-678-11E | |
| 101.6 mm C-Clamp | Amazon | PT-SD-CP01A | Black handle will eventually fall off. Use pliers to adjust once this happens. |
| 19 G needle | EXCELINT | 26438 | |
| 25 mL Sterile Polystyrene Disposable Serological Pipets with Magnifier Stripe | Fisherbrand | 13-678-11 | |
| 3-(Trimethoxysilyl) Propyl Methacrylate | Millipore Sigma | M6514-25ML | |
| 5 mL Sterile Polystyrene Disposable Serological Pipets with Magnifier Stripe | Eppendorf | 22431081 | |
| 50 mL Centrifuge Tubes | Corning | 352098 | |
| 50 mL Sterile Polystyrene Disposable Serological Pipets with Magnifier Stripe | Fisherbrand | 13-678-11F | |
| Acetone | Fisher | AC268310010 | |
| Aluminum Block | McMaster Carr | 9057K175 | |
| Aluminum Foil | VWR | 89079-069 | |
| Amicon Ultra 0.5 mL Centrifugal Filters, 100 kDa | Millipore Sigma | C82301 | |
| Anti-Rabies Virus Antibody, Serum Free Antibody, clone 1112-1, 100 | Fisherbrand | 13-678-11D | |
| Anti-Rabies Virus Mouse Monoclonal Antibody, Clone D1-25, biotinylated | Fisherbrand | 14-388-100 | |
| Carboxymethyl Cellulose | Tokyo Chemical Industries | C0045 | |
| ClipTip 300, Filter, Racked | Fisherbrand | 13-678-11 | |
| Costar 0.65 mL Low Binding Snap Cap Microcentrifuge Tube | Corning | 3206 | |
| Costar 1.7 mL Low Binding Snap Cap Microcentrifuge Tube | Corning | 3207 | |
| Describe | Nanoscribe | Software used to define the printing parameters for Nanoscribe 3D printer is step 1.2. Software provided with the printer. |
|
| Desiccator | Fisher Scientific | 10529901 | Or equivalent |
| Double-Sided Tape | Staples | 649280 | |
| DPBS (10x), No Calcium, No Magnesium | Gibco | 14200075 | |
| Ethanol | VWR | 89370-084 | |
| F1-ClipTip Multichannel Pipettes, 30 to 300 µL | Fisherbrand | 13-678-11E | |
| Fisherbrand SureOne Aerosol Barrier Pipette Tips, 0.1 – 10 µL | Fisherbrand | 13-678-11F | |
| Fisherbrand SureOne Aerosol Barrier Pipette Tips, 100 – 1000 µL | Fisherbrand | 03-448-17 | |
| Fisherbrand SureOne Aerosol Barrier Pipette Tips, 2 – 20 µL | Fisherbrand | FB14955202 | |
| Fisherbrand SureOne Aerosol Barrier Pipette Tips, 20 – 200 µL | Fisherbrand | 13-374-10 | |
| Fisherbrand Elite Pipette Kit | Fisherbrand | 05-408-137 | |
| Fisherbrand Pipet Controller | Fisherbrand | FB14955202 | |
| Glass Petri Dish, 90 mm | VWR | 470313-346 | |
| Glass Slides | Globe Scientific | 1380-10 | |
| Helicon Focus 8 | HeliconSoft | Software used to focus stack images | |
| IP-Q Resin | Nanoscribe | Printer resin is compatable with the 10x lens and is used for printing large microstructures on the Nanoscribe Photonic Professional GT2 | |
| Lascar EL-USB-TC-LCD Thermocouple | Amazon | 5053485896236 | Or equivalent |
| Microscope Slide Box | Millipore Sigma | Z374385-1EA | Or equivalent |
| Nanoscribe Photonic Professional GT2 with 10X Objective | Nanoscribe | ||
| NanoWrite | Nanoscribe | Software used to interface with nanoscrive 3D printer. Software provided with printer. |
|
| Nunc MaxiSorp Flat-Bottom 96-well Plate | Invitrogen | 44-2404-21 | |
| OPD Substrate Tablets (o-Phenylenediamine Dihydrochloride) | Fisherbrand | 02-707-432 | |
| Parafilm M Wrapping Film, 4 in. | Fisherbrand | 13-374-10 | |
| PDC 60 with Type 3 Coating | Scienion | P-2020 | |
| PDMS Particle Molds | Rice University | n/a | N/A- Particles are 400 μm in diameter with a wall thickness of 100 μm, and a height of 500 μm, resulting in an inner diameter of 200 μm. The arrays are 14 x 22 particles spaced 600 μm apart from each other. 4- and 5-point stars are used as fiducials, positioned 600 μm to the right and left of the top right and top left particles on the array. |
| Petri Dish | Fisher Scientific | 08-757-100D | |
| Pierce Stable Peroxide Substrate Buffer (10x) | Fisherbrand | 02-707-430 | |
| Plastic Cups | Fisher Scientific | S04170 | |
| PLGA Film, 502H | Sigma | 502H: 719897-1G | |
| Propylene Glycol Monomethyl Ether Acetate | Millipore Sigma | 484431 | |
| Rabies Antigen | Chiron Behring and Bharat Biotech International | Material was acquired by entering into a materials transfer agreement with the company. | |
| Razor Blades | VWR | 55411-050 | |
| Scalpel | VWR | 21899-530 and 76457-512 | |
| SciFLEXARRAYER S3 with PCD 60 | Scienion | Or equivalent | |
| Sealing Tape for 96-Well Plates | Thermo Scientific | 15036 | |
| Silicon Wafer | University Wafer | 1025 | |
| Spring Clamps | IRWIN | VGP58100 | |
| Stainless Steel Block | McMaster Carr | 9083K12 | |
| Streptavidin−Peroxidase Polymer, Ultrasensitive | Fisherbrand | 02-707-404 | |
| Sylgard 184 | DOW | 2646340 | |
| Teflon Sheet | McMaster Carr | 9266K12 | Used to make PLGA films. Must be cut into appropriately sized pieces. |
| Teflon Sheet, 0.8 mm-thick | McMaster Carr | 9266K81 | |
| Trichloro(1H, 1H, 2H, 2H-Perfluorooctyl) Silane | Sigma | 448931-10G | |
| Tweezers | Pixnor | ESD-16 | |
| UltraPure Distilled Water | Fisher Scientific | 10977015 | |
| UV Oven, CL-1000S UV Crosslinker | UVP | 95-0174-01 | Or equivalent |
| Vacuum Desiccator | Bel-Art | F420100000 | Note you will need two of these. One will be used exclusively to pre-treat samples with trichloro(1H, 1H, 2H, 2H-perfluorooctyl) silane to prevent contamination. |
| Vacuum Oven Capable of Reaching 120 °C | VWR | 97027-664 | Or equivalent |
| Vacuum, CRVpro4 | Welch | 3041-01 | Or equivalent |
| Wooden Tongue Depressors | Electron Microscopy Sciences | 72320 |
References
- Li, X. Estimating the health impact of vaccination against ten pathogens in 98 low-income and middle-income countries from 2000 to 2030: a modelling study. The Lancet. 397, 398-408 (2021).
- Euliano, E. M., Sklavounos, A. A., Wheeler, A. R., McHugh, K. J. Translating diagnostics and drug delivery technologies to low-resource settings. Science Translational Medicine. 14 (666), eabm1732 (2022).
- Haider, S. Rabies: old disease, new challenges. Canadian Medical Association Journal. 178 (5), 562-563 (2008).
- Fisher, C. R., Streicker, D. G., Schnell, M. J. The spread and evolution of rabies virus: conquering new frontiers. Nature Reviews Microbiology. 16 (4), 241-255 (2018).
- Nagarajan, T., Rupprecht, C. E. . Rabies and Rabies Vaccines. , (2020).
- Shi, T., Dunham, E. F., Nyland, J. E. Rabies vaccination compliance and reasons for incompletion. The Western Journal of Emergency Medicine. 21 (4), 918-923 (2020).
- Shankaraiah, R. H., Rajashekar, R. A., Veena, V., Hanumanthaiah, A. N. D. Compliance to anti-rabies vaccination in post-exposure prophylaxis. Indian Journal of Public Health. 59 (1), 58-60 (2015).
- Cleland, J. L. Single-administration vaccines: controlled-release technology to mimic repeated immunizations. Trends in Biotechnology. 17 (1), 25-29 (1999).
- Yeh, M. K., Coombes, A. G. A., Jenkins, P. G., Davis, S. S. A novel emulsification-solvent extraction technique for production of protein loaded biodegradable microparticles for vaccine and drug delivery. Journal of Controlled Release. 33 (3), 437-445 (1995).
- Peyre, M., Sesardic, D., Merkle, H. P., Gander, B., Johansen, P. An experimental divalent vaccine based on biodegradable microspheres induces protective immunity against tetanus and diphtheria. Journal of Pharmaceutical Sciences. 92 (5), 957-966 (2003).
- Mvan de Weert, M., Hennink, W. E., Jiskoot, W. Protein instability in poly(lactic-co-glycolic acid) microparticles. Pharmaceutical Research. 17 (10), 1159-1167 (2000).
- Graf, T. P., et al. A scalable platform for fabricating biodegradable microparticles with pulsatile drug release. Advanced Materials. , e2300228 (2023).
- Wang, Y., Qin, B., Xia, G., Choi, S. H. FDA’s poly (lactic-co-glycolic acid) research program and regulatory outcomes. The American Association of Pharmaceutical Scientists Journal. 23 (4), 92 (2021).
- Wan, Y. Development of stabilizing formulations of a trivalent inactivated poliovirus vaccine in a dried state for delivery in the NanopatchTM microprojection array. Journal of Pharmaceutical Sciences. 107 (6), 1540-1551 (2018).
- Smith, T. G., Siirin, M., Wu, X., Hanlon, C. A., Bronshtein, V. Rabies vaccine preserved by vaporization is thermostable and immunogenic. Vaccine. 33 (19), 2203-2206 (2015).
- McHugh, K. J. Fabrication of fillable microparticles and other complex 3D microstructures. Science. 357 (6356), 1138-1142 (2017).
- Sanchez, M. E. N. Rabies vaccine characterization by nanoparticle tracking analysis. Scientific Reports. 10 (1), 8149 (2020).
- Fu, K., Pack, D. W., Klibanov, A. M., Langer, R. Visual evidence of acidic environment within degrading poly(lactic-co-glycolic acid) (PLGA) microspheres. Pharmaceutical Research. 17 (1), 100-106 (2000).
