زرع تحت الشبكية لأنسجة الشبكية المشتقة من الخلايا الجذعية الجنينية البشرية في نموذج حيواني كبير للقطط
Summary
تظهر هنا تقنية جراحية لزرع أنسجة شبكية مشتقة من الخلايا الجذعية البشرية متعددة القدرات (hPSC) في الفضاء تحت الشبكية لنموذج حيواني كبير.
Abstract
تتسبب الحالات التنكسية للشبكية (RD) المرتبطة بفقدان مستقبلات الضوء مثل التنكس البقعي المرتبط بالعمر (AMD) والتهاب الشبكية الصباغي (RP) وداء ليبر الخلقي (LCA) في فقدان البصر التدريجي والمنهك. هناك حاجة غير ملباة للعلاجات التي يمكن أن تعيد الرؤية بمجرد فقدان المستقبلات الضوئية. إن زرع أنسجة الشبكية المشتقة من الخلايا الجذعية البشرية متعددة القدرات (hPSC) (المواد العضوية) في الفضاء تحت الشبكية للعين باستخدام RD المتقدم يجلب صفائح أنسجة الشبكية مع الآلاف من المستقبلات الضوئية الصحية الخالية من الطفرات ولديه القدرة على علاج معظم / جميع الأمراض المسببة للعمى المرتبطة بتنكس المستقبلات الضوئية ببروتوكول واحد معتمد. تم تطوير زرع أنسجة شبكية الجنين في الفضاء تحت الشبكية للنماذج الحيوانية والأشخاص الذين يعانون من RD المتقدم بنجاح ولكن لا يمكن استخدامه كعلاج روتيني بسبب المخاوف الأخلاقية ومحدودية إمدادات الأنسجة. تعتبر النماذج الحيوانية لتنكس الشبكية الموروث للعين الكبيرة (IRD) ذات قيمة لتطوير علاجات استعادة الرؤية باستخدام الأساليب الجراحية المتقدمة لزرع خلايا / أنسجة الشبكية في الفضاء تحت الشبكية. إن أوجه التشابه في حجم الكرة الأرضية ، وتوزيع المستقبلات الضوئية (على سبيل المثال ، وجود منطقة مركزية تشبه البقعة) وتوافر نماذج IRD التي تلخص عن كثب IRD البشري من شأنه أن يسهل الترجمة السريعة للعلاج الواعد إلى العيادة. تظهر هنا تقنية جراحية لزرع أنسجة شبكية مشتقة من hPSC في الفضاء تحت الشبكية لنموذج حيواني كبير يسمح بتقييم هذا النهج الواعد في النماذج الحيوانية.
Introduction
يتأثر ملايين الأشخاص حول العالم بتنكس الشبكية (RD) مع ضعف البصر الناتج أو العمى المرتبط بفقدان المستقبلات الضوئية المستشعرة للضوء (PRs). التنكس البقعي المرتبط بالعمر (AMD) هو سبب رئيسي للعمى الناتج عن مجموعة من عوامل الخطر الوراثية والعوامل البيئية / نمط الحياة. بالإضافة إلى ذلك ، تم العثور على أكثر من 200 جين وموضع تسبب RD الموروث (IRD) 1. التهاب الشبكية الصباغي (RP) ، وهو IRD الأكثر شيوعا ، غير متجانس وراثيا مع أكثر من 3000 طفرة جينية في حوالي 70 جينا تم الإبلاغ عنها2،3،4. Leber Congenital Amaurosis (LCA) ، الذي يسبب العمى في مرحلة الطفولة هو أيضا غير متجانس وراثيا 5,6. تم تطوير علاج زيادة الجينات وهو في التجارب السريرية لعلاج عدد صغير من IRDs 3,7. ومع ذلك ، يجب تطوير علاج منفصل لعلاج كل شكل وراثي مميز من IRD وبالتالي علاج مجموعة فرعية صغيرة فقط من المرضى. علاوة على ذلك ، تعتمد زيادة الجينات على وجود مجموعة من المستقبلات الضوئية القابلة للإنقاذ ، وبالتالي فهي لا تنطبق على التنكس المتقدم.
لذلك ، هناك حاجة سريرية ملحة وغير ملباة بعد لتطوير علاجات تعالج وتعالج RDs المتقدمة والعمى العميق إلى النهائي. على مدى العقدين الماضيين ، تم تطوير الغرسات الاصطناعية العصبية واختبارها في نماذج حيوانية كبيرة ، مثل القط ، قبل الاستخدام البشري8،9،10،11،12،13،14. وبالمثل ، في السنوات ال 20 الماضية ، تم تطوير علاجات استبدال الشبكية باستخدام صفائح من شبكية العين الجنينية أو حتى الناضجة للثدييات المطعمة تحت الشبكية 15،16،17،18،19،20،21،22 وحتى تم اختبارها بنجاح في مرضى RD 23،24،25. يستخدم كلا النهجين فكرة إدخال مستشعرات جديدة (الثنائيات الضوئية السيليكونية الكهروضوئية في حالة الأجهزة العصبية التعويضية26،27 ، والمستقبلات الضوئية الصحية الخالية من الطفرات المنظمة في صفائح ، في حالة زرع صفائح الشبكية) في شبكية العين مع العلاقات العامة المتدهورة. بحثت الدراسات الحديثة في استخدام الأساليب القائمة على الخلايا الجذعية مثل زرع أسلاف الشبكية المشتقة من الخلايا الجذعية البشرية متعددة القدرات (hPSC)28،29 ، ومستقبلات hPSCالضوئية 30 ، وعضويات hPSC الشبكية31،32،33. تمكن عضويات الشبكية من تكوين أنسجة الشبكية في طبق واشتقاق صفائح مستقبلات الضوء مع الآلاف من العلاقات العامة الخالية من الطفرات ، والتي تشبه طبقة مستقبلات الضوء في شبكية العين الجنينية البشرية النامية34،35،36،37،38،39،40. يعد زرع أنسجة الشبكية المشتقة من hPSC (المواد العضوية) في الفضاء تحت الشبكية للمرضى الذين يعانون من حالات RD أحد أساليب العلاج بالخلايا البحثية الجديدة والواعدة ، والتي يتبعها عدد من الفرق 31،32،41،42. بالمقارنة مع زرع معلق الخلية (للمستقبلات الضوئية الشابة أو أسلاف الشبكية) ، ثبت أن الأوراق المزروعة من المستقبلات الضوئية الجنينية تؤدي إلى تحسينات في الرؤية في التجارب السريرية23،24.
يصف البروتوكول المقدم هنا ، بالتفصيل ، إجراء زرع لتوصيل الشبكية تحت الشبكية لعضويات الشبكية بأكملها (بدلا من الحافات العضوية33,41) كطريقة أفضل محتملة لإدخال صفائح شبكية سليمة مع العلاقات العامة ، لزيادة بقاء الكسب غير المشروع وتحسين الحفاظ على الورقة. على الرغم من أنه تم تطوير إجراءات إدخال قطعة مسطحة من شبكية العين البشرية وكذلك بقع RPE43،44،45 ، لم يتم التحقيق في زرع الطعوم ثلاثية الأبعاد الأكبر. توفر عضويات الشبكية المشتقة من الخلايا الجذعية مصدرا لا ينضب من صفائح المستقبلات الضوئية لتطوير تقنيات استعادة الرؤية ، وهي خالية من القيود الأخلاقية ، وتعتبر مصدرا ممتازا لأنسجة الشبكية البشرية للعلاجات التي تركز على علاج RD المتقدم والعمى النهائي46. يعد تطوير الأساليب الجراحية للزرع الدقيق تحت الشبكية لعضويات الشبكية مع الحد الأدنى من إصابة مكانة الشبكية المضيفة (الشبكية العصبية ، ظهارة الشبكية الصبغية والشبكية والأوعية الدموية المشيمية) إحدى الخطوات الحاسمة لتطوير هذا العلاج نحو التطبيقات السريرية31،32. أثبتت النماذج الحيوانية الكبيرة مثل القطط والكلاب والخنازير والقرود أنها نماذج جيدة للتحقيق في طرق التسليم الجراحي وكذلك لإثبات سلامة صفائح الأنسجة المزروعة (خلايا ظهارة الشبكية الصبغية (RPE)) والتحقيق في استخدام المواد العضوية41،44،45،47،48،49،50. عين الحيوان الكبيرة لها حجم كرة أرضية مشابه للإنسان بالإضافة إلى تشريح مشابه بما في ذلك وجود منطقة ذات كثافة عالية لمستقبلات الضوء ، بما في ذلك المخاريط (المنطقة المركزية) ، تشبه البقعة البشرية6،51،52.
في هذه المخطوطة ، تم وصف تقنية لزرع أنسجة الشبكية المشتقة من hPSC (المواد العضوية) في الفضاء تحت الشبكية لنماذج الحيوانات الكبيرة القطط (كل من القطط البرية و CrxRdy / + ) ، والتي ، جنبا إلى جنب مع نتائج الفعالية الواعدة32،53 يبني أساسا لمزيد من التطوير لمثل هذا العلاج البحثي نحو التطبيقات السريرية لعلاج حالات RD.
Protocol
Representative Results
Discussion
يعد زرع أنسجة الشبكية المشتقة من hPSC (عضويات الشبكية) في الفضاء تحت الشبكية نهجا تجريبيا واعدا لاستعادة الرؤية للأمراض التنكسية الشبكية في المرحلة المتأخرة الناجمة عن موت خلايا العلاقات العامة (العمى العميق أو النهائي). يعتمد النهج المقدم على علاج تجريبي تم تطويره واختباره بنجاح في وقت سا?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
تم تمويل هذا العمل من قبل منحة NEI Fast-track SBIR R44-EY027654-01A1 ومنحة SBIR 3 R44 EY 027654 – 02 S1 (I.O.N. ، علاجات خلايا النسب ؛ الدكتور بيترسن جونز هو باحث رئيسي مشارك). يود المؤلفون أن يشكروا السيدة جانيس كيروبين (MSU RATTS) على مساعدتها في التخدير والرعاية العامة للحيوانات المدرجة في هذه الدراسة بالإضافة إلى المساعدة في الإعداد الجراحي وإعداد / تعقيم الأدوات. يود المؤلفون أن يشكروا الدكتورة بايج وينكلر على المساعدة في تلقي المواد العضوية ووضعها في وسائل الإعلام في اليوم السابق للزرع وللمساعدة في يوم الزرع. كما يعرب المؤلفون عن امتنانهم للسيد راندي غارشار (LCTX) لشحنه الدؤوب لعضويات شبكية العين ، وتجميع الشاحن ، وتنزيل سجلات درجة الحرارة والإجهاد G بعد كل شحنة. تم تنفيذ هذا العمل بينما كان المؤلف إيغور ناسونكين يعمل لدى Biotime (الآن Lineage).
Materials
| 0.22 µm pore syringe filter with PES membrane | Cameo | NA | can be found by various suppliers |
| 23G subretinal injector with extendable 41 G cannula | DORC | 1270.EXT | |
| 250 µL hamilton gas tight luer lock syringe | Hamilton | NA | can be found by various suppliers |
| 6-0 Silk suture | Ethicon | 707G | |
| 6-0/7-0 polyglactin suture | Ethicon | J570G | |
| Acepromazine maleate 500mg/5mL (Aceproject) | Henry Schein Animal Health | NA | can be found by various suppliers |
| Buprenorphine 0.3 mg/mL | Par Pharmaceutical | NA | can be found by various suppliers |
| cSLO + SD-OCT | Heidelberg Engineering | Spectralis HRA+ OCT | |
| Cyclosporine | Novartis | NA | can be found by various suppliers |
| Dexamethasone 2mg/mL (Azium) | Vetone | NA | can be found by various suppliers |
| Doxycyline 25mg/5mL | Cipla | NA | can be found by various suppliers |
| Fatal Plus solution (pentobarnital solution) | Vortech | NA | can be found by various suppliers |
| Gentamicin 20mg/2mL | Hospira | NA | can be found by various suppliers |
| Glass capillary (Thin-Wall Single-Barrel Standard Borosilicate (Schott Duran) Glass Tubing | World Precision Instruments | TW150-4 | |
| Methylprednisolone actetate 40 mg/mL | Pfizer | NA | can be found by various suppliers |
| Microscope | Zeiss | NA | |
| OCT medium (Tissue-Tek O.C.T. Compound) | Sakura | 4583 | |
| Olympic Vac-Pac Size 23 | Natus | NA | can be found by various suppliers |
| Paraformaldehyde 16% solution | EMS | 15719 | |
| Phenylephrine Hydrochloride 10% Ophthalmic Solution | Akorn | NA | can be found by various suppliers |
| Prednisolone 15mg/5mL | Akorn | NA | can be found by various suppliers |
| Propofol 5000mg/50mL (10 mg/mL) (PropoFlo28) | Zoetis | NA | can be found by various suppliers |
| RetCam II video fundus camera | Clarity Medical Systems | NA | can be found by various suppliers |
| Triamcinolone 400mg/10 mL (Kenalog-40) | Bristol -Myers Squibb Company | NA | can be found by various suppliers |
| Tropicamide 1% ophthalmic solution | Akorn | NA | can be found by various suppliers |
| Vitrectomy 23G port | Alcon | Accurus systems | |
| Vitrectomy machine | Alcon | Accurus systems | |
| Vitreo-retinal vertical 80° scissors with squeeze handle | Frimen | FT170206T |
References
- Veleri, S., et al. Biology and therapy of inherited retinal degenerative disease: insights from mouse models. Disease Models and Mechanisms. 8 (2), 109-129 (2015).
- Dias, M. F., et al. Molecular genetics and emerging therapies for retinitis pigmentosa: Basic research and clinical perspectives. Progress in Retinal and Eye Research. 63, 107-131 (2018).
- Petersen-Jones, S. M., et al. Patients and animal models of CNGbeta1-deficient retinitis pigmentosa support gene augmentation approach. The Journal of Clinical Investigation. 128 (1), 190-206 (2018).
- Winkler, P. A., et al. A large animal model for CNGB1 autosomal recessive retinitis pigmentosa. PLoS One. 8 (8), 72229 (2013).
- Occelli, L. M., Tran, N. M., Narfstrom, K., Chen, S., Petersen-Jones, S. M. CrxRdy Cat: A large animal model for CRX-associated leber congenital amaurosis. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 57 (8), 3780-3792 (2016).
- Mowat, F. M., et al. Early-onset progressive degeneration of the area centralis in RPE65-deficient dogs. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 58 (7), 3268-3277 (2017).
- Occelli, L. M., et al. Gene supplementation rescues rod function and preserves photoreceptor and retinal morphology in dogs, leading the way towards treating human PDE6A-retinitis pigmentosa. Human Gene Therapy. 28 (12), 1189-1201 (2017).
- Eckhorn, R., et al. Visual resolution with retinal implants estimated from recordings in cat visual cortex. Vision Research. 46 (17), 2675-2690 (2006).
- Pardue, M. T., et al. Status of the feline retina 5 years after subretinal implantation. Journal of Rehabilitation Research and Development. 43 (6), 723-732 (2006).
- Chow, A. Y., et al. Subretinal implantation of semiconductor-based photodiodes: durability of novel implant designs. Journal of Rehabilitation Research and Development. 39 (3), 313-321 (2002).
- Volker, M., et al. In vivo assessment of subretinally implanted microphotodiode arrays in cats by optical coherence tomography and fluorescein angiography. Graefes Archive for Clinical and Experimental Ophthalmology. 242 (9), 792-799 (2004).
- Chow, A. Y., et al. Implantation of silicon chip microphotodiode arrays into the cat subretinal space. Institute of Electrical and Electronics Engineering Transactions on Neural Systems and Rehabilitation Engineering. 9 (1), 86-95 (2001).
- Sachs, H. G., et al. Subretinal implantation and testing of polyimide film electrodes in cats. Graefe’s Archive for Clinical and Experimental Ophthalmology. 243 (5), 464-468 (2005).
- Villalobos, J., et al. A wide-field suprachoroidal retinal prosthesis is stable and well tolerated following chronic implantation. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 54 (5), 3751-3762 (2013).
- Bragadottir, R., Narfstrom, K. Lens sparing pars plana vitrectomy and retinal transplantation in cats. Veterinary Ophthalmology. 6 (2), 135-139 (2003).
- Narfstrom, K., Holland Deckman, K., Menotti-Raymond, M. The domestic cat as a large animal model for characterization of disease and therapeutic intervention in hereditary retinal blindness. Journal of Ophthalmology. , 906943 (2011).
- Seiler, M. J., et al. Functional and structural assessment of retinal sheet allograft transplantation in feline hereditary retinal degeneration. Veterinary Ophthalmology. 12 (3), 158-169 (2009).
- Aramant, R. B., Seiler, M. J. Transplanted sheets of human retina and retinal pigment epithelium develop normally in nude rats. Experimental Eye Research. 75 (2), 115-125 (2002).
- Lin, B., McLelland, B. T., Mathur, A., Aramant, R. B., Seiler, M. J. Sheets of human retinal progenitor transplants improve vision in rats with severe retinal degeneration. Experimental Eye Research. 174, 13-28 (2018).
- Seiler, M. J., Aramant, R. B. Cell replacement and visual restoration by retinal sheet transplants. Progress in Retinal and Eye Research. 31 (6), 661-687 (2012).
- Seiler, M. J., et al. Vision recovery and connectivity by fetal retinal sheet transplantation in an immunodeficient retinal degenerate rat model. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 58 (1), 614-630 (2017).
- Lorach, H., et al. Transplantation of mature photoreceptors in rodents with retinal degeneration. Translational Vision Science and Technology. 8 (3), 30 (2019).
- Radtke, N. D., et al. Vision improvement in retinal degeneration patients by implantation of retina together with retinal pigment epithelium. American Journal of Ophthalmology. 146 (2), 172-182 (2008).
- Radtke, N. D., Aramant, R. B., Seiler, M. J., Petry, H. M., Pidwell, D. Vision change after sheet transplant of fetal retina with retinal pigment epithelium to a patient with retinitis pigmentosa. Archives of Ophthalmology. 122 (8), 1159-1165 (2004).
- Radtke, N. D., Seiler, M. J., Aramant, R. B., Petry, H. M., Pidwell, D. J. Transplantation of intact sheets of fetal neural retina with its retinal pigment epithelium in retinitis pigmentosa patients. American Journal of Ophthalmology. 133 (4), 544-550 (2002).
- Lorach, H., Palanker, E. Retinal prostheses: High-resolution photovoltaic implants. Medical Science (Paris). 31 (10), 830-831 (2015).
- Mathieson, K., et al. Photovoltaic retinal prosthesis with high pixel density. Nature Photonics. 6 (6), 391-397 (2012).
- Banin, E., et al. Retinal incorporation and differentiation of neural precursors derived from human embryonic stem cells. Stem Cells. 24 (2), 246-257 (2006).
- Hambright, D., et al. Long-term survival and differentiation of retinal neurons derived from human embryonic stem cell lines in un-immunosuppressed mouse retina. Molecular Vision. 18, 920-936 (2012).
- Lamba, D. A., Gust, J., Reh, T. A. Transplantation of human embryonic stem cell-derived photoreceptors restores some visual function in Crx-deficient mice. Cell Stem Cell. 4 (1), 73-79 (2009).
- Singh, R. K., Occelli, L. M., Binette, F., Petersen-Jones, S. M., Nasonkin, I. O. Transplantation of human embryonic stem cell-derived retinal tissue in the subretinal space of the cat eye. Stem Cells and Development. 28 (17), 1151-1166 (2019).
- McLelland, B. T., et al. Transplanted hESC-derived retina organoid sheets differentiate, integrate, and improve visual function in retinal degenerate rats. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 59 (6), 2586-2603 (2018).
- Assawachananont, J., et al. Transplantation of embryonic and induced pluripotent stem cell-derived 3D retinal sheets into retinal degenerative mice. Stem Cell Reports. 2 (5), 662-674 (2014).
- Eiraku, M., et al. Self-organizing optic-cup morphogenesis in three-dimensional culture. Nature. 472 (7341), 51-56 (2011).
- Nakano, T., et al. Self-formation of optic cups and storable stratified neural retina from human ESCs. Cell Stem Cell. 10 (6), 771-785 (2012).
- Singh, R. K., et al. Characterization of three-dimensional retinal tissue derived from human embryonic stem cells in adherent monolayer cultures. Stem Cells and Development. 24 (23), 2778-2795 (2015).
- Wahlin, K. J., et al. Photoreceptor outer segment-like structures in long-term 3D retinas from human pluripotent stem cells. Scientific Reports. 7 (1), 766 (2017).
- Zhong, X., et al. Generation of three-dimensional retinal tissue with functional photoreceptors from human iPSCs. Nature Communications. 5, 4047 (2014).
- Capowski, E. E., et al. Reproducibility and staging of 3D human retinal organoids across multiple pluripotent stem cell lines. Development. 146 (1), 171686 (2019).
- Meyer, J. S., et al. Modeling early retinal development with human embryonic and induced pluripotent stem cells. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (39), 16698-16703 (2009).
- Shirai, H., et al. Transplantation of human embryonic stem cell-derived retinal tissue in two primate models of retinal degeneration. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (1), 81-90 (2016).
- Mandai, M., et al. iPSC-derived retina transplants improve vision in rd1 end-stage retinal-degeneration mice. Stem Cell Reports. 8 (4), 1112-1113 (2017).
- Scruggs, B. A., et al. Optimizing donor cellular dissociation and subretinal injection parameters for stem cell-based treatments. Stem Cells Translational Medicine. 8 (8), 797-809 (2019).
- Singh, R., et al. Pluripotent stem cells for retinal tissue engineering: Current status and future prospects. Stem Cell Reviews and Reports. 14 (4), 463-483 (2018).
- Sharma, R., et al. Clinical-grade stem cell-derived retinal pigment epithelium patch rescues retinal degeneration in rodents and pigs. Science Translational Medicine. 11, 475 (2019).
- Ghosh, F., Engelsberg, K., English, R. V., Petters, R. M. Long-term neuroretinal full-thickness transplants in a large animal model of severe retinitis pigmentosa. Graefes Archive for Clinical and Experimental Ophthalmology. 245 (6), 835-846 (2007).
- Koss, M. J., et al. Subretinal implantation of a monolayer of human embryonic stem cell-derived retinal pigment epithelium: a feasibility and safety study in Yucatan minipigs. Graefes Archive for Clinical and Experimental Ophthalmology. 254 (8), 1553-1565 (2016).
- da Cruz, L., et al. Phase 1 clinical study of an embryonic stem cell-derived retinal pigment epithelium patch in age-related macular degeneration. Nature Biotechnology. 36 (4), 328-337 (2018).
- Kashani, A. H., et al. Subretinal implantation of a human embryonic stem cell-derived retinal pigment epithelium monolayer in a porcine model. Advances in Experimental Medicine and Biology. 1185, 569-574 (2019).
- Kashani, A. H., et al. Surgical method for implantation of a biosynthetic retinal pigment epithelium monolayer for geographic atrophy: Experience from a Phase 1/2a study. Ophthalmology. Retina. 4 (3), 264-273 (2020).
- Petersen-Jones, S. M., Komaromy, A. M. Dog models for blinding inherited retinal dystrophies. Human Gene Therapy. Clinical Development. 26 (1), 15-26 (2015).
- Beltran, W. A., et al. Canine retina has a primate fovea-like bouquet of cone photoreceptors which is affected by inherited macular degenerations. PLoS One. 9 (3), 90390 (2014).
- Nasonkin, I. O., et al. Transplantation of human embryonic stem cell derived retinal tissue in the subretinal space of immunodeficient rats with retinal degeneration (RD). Investigative Ophthalmology and Visual Science. 60 (9), 3109 (2019).
- Singh, R. K., et al. Development of a protocol for maintaining viability while shipping organoid-derived retinal tissue. Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. 14 (2), 388-394 (2020).
- Petersen-Jones, S. M. Drug and gene therapy of hereditary retinal disease in dog and cat models. Drug Discovery Today. Disease Models. 10 (4), 215-223 (2013).
- Machemer, R., Buettner, H., Norton, E., Parel, J. M. Vitrectomy: a pars plana approach. Transactions – American Academy of Ophthalmology and Otolaryngology. 75 (4), 813-820 (1972).
- Machemer, R., Norton, E. W. Vitrectomy, a pars plana approach. II. Clinical experience. Modern Problems in Ophthalmology. 10, 178-185 (1972).
- Machemer, R., Parel, J., Norton, E. Vitrectomy: a pars plana approach. Technical improvements and further results. Transactions – American Academy of Ophthalmology and Otolaryngology. 76 (2), 462-466 (1972).
- O’Malley, C., Heintz, R. M. Vitrectomy with an alternative instrument system. Annals of Ophthalmology. 7 (4), 585-588 (1975).
- Machemer, R., Hickingbotham, D. The three-port microcannular system for closed vitrectomy. American Journal of Ophthalmology. 100 (4), 590-592 (1985).
- Petersen-Jones, S. M., et al. AAV retinal transduction in a large animal model species: comparison of a self-complementary AAV2/5 with a single-stranded AAV2/5 vector. Molecular Vision. 15, 1835-1842 (2009).
- Annear, M. J., et al. Successful gene therapy in older Rpe65-deficient dogs following subretinal injection of an adeno-associated vector expressing RPE65. Human Gene Therapy. 24 (10), 883-893 (2013).
- Beltran, W. A., et al. Optimization of retinal gene therapy for X-linked retinitis pigmentosa due to RPGR mutations. Molecular Therapy: The Journal of the American Society of Gene Therapy. 25 (8), 1866-1880 (2017).
- Bainbridge, J. W. B., et al. Long-term effect of gene therapy on Leber’s Congenital Amaurosis. The New England Journal of Medicine. 372 (20), 1887-1897 (2015).
