チラリア性神経節ニューロンの分離と培養

毛様神経節(CG)ニューロンは副交感神経系に属する。これらのニューロンはコリン作動性であり、ムスカリン性またはニコチン性シナプス^{11、2、32,3}を確立することができる。解剖学的には、CGは視神経(ON)と脈絡膜裂け(CF)との間の眼の後部に位置し、初期胚期^11、44の約6000ニューロンからなる。培養の最初の1週間、毛様神経節ニューロンは多極形態を提示する。1週間後、彼らは単極状態に移行し始め、1つの神経突起が延長され、軸索⁵を形成する。さらに、CGニューロンの約半数は、細胞死のプログラムプロセスを通じて、ひよこ胚の発達の8^日目から14^日目の間に死ぬ。ニューロン数の減少は^,、約3000ニューロン^6、7、87の毛様体の総集団をもたらす。⁶⁸インビトロでは、筋細胞⁹およびCGニューロンで増殖した場合のCGニューロンの数の減少がなく^{、数週間1、99}のために培養することができる。¹

毛様性神経節は、毛様体ニューロンと脈絡膜ニューロンの均質な集団で構成され、それぞれがCGのニューロン集団の半分を表し、眼の筋肉を内在化する。これらの2種類のニューロンは、構造上、解剖学的、機能的に異なっている。毛様体ニューロンは虹彩とレンズ上の線条性筋線維を内側に吐き出し、瞳孔収縮を担当する。脈絡膜ニューロンは、脈絡膜^{1、10、11、1210,11}の平滑筋を内側^に入^れ、1

鶏毛様神経節ニューロンの培養は、神経筋シナプスおよびシナプス形成^{11、5、95,9}の研究に有用なツールであることが示されている。神経筋シナプスがコリン作動性¹³であることを考えると、コリン作動性である神経集団を用いて – CGニューロン – 以前の細胞モデル¹⁴に代わる潜在的な代替として浮上した。これらのモデルは異種神経集団で構成され、ほんの一部だけがコリン作動性である。あるいは、毛様性神経節ニューロンは、インビトロで比較的速く発達し、約15時間後にすでにシナプス¹を形成している。CGニューロンは、比較的容易な分離と操作のために、明確な研究のために長年にわたってモデルシステムとして使用されてきました。これらのアプリケーションには、光遺伝学的研究、シナプスの発達、アポトーシスおよび神経筋相互作用^14,15,15が含まれる。

我々は、胚性7日目(E7)のひよこ胚からの毛様神経節ニューロンの解剖、解離およびインビトロ培養のための詳細な手順を説明する。我々は、コリン作動性ニューロンの非常に純粋で安定した細胞培養を得るために、ステップバイステップのプロトコルを提供する。我々はまた、特別な注意を必要とし、神経培養の質を向上させるプロトコルの重要なステップを強調する。これらの培養物は、少なくとも15日間インビトロで維持することができる。