乳癌の HER2 遺伝子増幅の不均一性を評価する高スループット スクリーニング プラットフォームを構築

HER2が過剰に発現して、すべての侵襲乳房癌^1,2の 15-30% の増幅において。HER2 過剰発現の有無による推論は > 染色 (3 +)、遺伝子増幅遺伝子コピー数は ≥6、または HER2/セントロメア比は ≥2 が評価されることができます中にカウントで強い膜免疫組織化学 (IHC) と 10% セル少なくとも 20 細胞の in situハイブリダイゼーション (っぽい)³。

内腫瘍の遺伝学的不均一性は、バイオ マーカーの評価と治療応答⁴潜在的有害寄稿している乳癌に広く記載されています。よると、大学のアメリカの病理学者 (CAP)、HER2 の不均一性が存在でHER2増幅される場合 > 5% と <⁵細胞の浸潤腫瘍の 50%。残念ながら、HER2 乳癌の空間的不均一性の実際の発生率は病理学者の間で論争の何人かの著者は、それを維持する極めてまれなイベントだし、40% の症例が他の人まで示唆HER2 異種^{1,5,6,7,8,9,10}。にもかかわらず、この状態を支える生物学的メカニズムはまだ完全には明らかにできなかった内腫瘍 HER2 の不均一性の予後の臨床影響乳房癌患者¹¹にとって重要であります。

最近、発色っぽい (CISH) とシルバーっぽい (SISH) など、明るいフィールド分子技術は、蛍光の ISH (魚)¹²と比較していくつかの利点を持つ FFPE 組織で HER2 の不均一性を検出するための信頼できる方法として浮上しています。残念ながら、単一症例のバルク分析の大規模コホート研究で非現実的なままです。いくつかのグループは、組織化学、IHC や ISH TMA 技術との組み合わせががん生物学^13,14,15,16の研究で貴重な戦略を表すことができますを示唆しています。この広く採用されている方法で、異なる患者から組織サンプル分析できます同時に、組織・採用し、育成の場合¹⁴の大シリーズの一様解析試薬を最小限に抑えます。ただし、同時別処理試薬、固定時刻、および保全方法雇用などの面で、アーカイブを受けた複数の組織サンプルのハイスループット分子特性解析できるプロトコルがありません。ブロック。

乳癌の HER2 の空間的不均一性の予後および臨床的影響を与え、異質加工例の大シリーズに評価する分子統合プラットフォームを開発しました。ここでは、我々 は生成および SISH による高収率 TMAs 乳癌のHER2増幅の内腫瘍の不均一性を分析する研究所戦略を描きます。次のプロトコルを開発した腫瘍径 > 5 mm (> TNM 2017 に従って pT1b)¹⁷。小さい病変は、フルフェイスの連続切片の解析を実行することをお勧めします。私たちの手順は、ケースごとに 6 の領域 (範囲 4-8) の意味を包含まで 30 の乳癌の同時 IHC と SISH の分析のためことができます。全体で、500 μ m のコアとグリッドとエッジの間に 2 mm の間で、直径 1 mm の 180 のティッシュのコアは、TMA ブロックごとに生成されます。