Burada vasküler inflamasyon ve canlı farelerde trombüs oluşumu sırasında aktive endotel üzerindeki heterotipik trombosit-nötrofil etkileşimleri görselleştirmek için floresan intravital mikroskobu deneysel bir tekniktir rapor. Bu mikroskobik teknoloji vasküler hastalığın moleküler mekanizmasını incelemek ve patofizyolojik durumlardaki farmakolojik ajanları test için değerli olacaktır.
Arterioler yaralanma yerinde trombüs oluşumu sırasında aktive endotel aracılık tromboz ve vasküler inflamasyon üzerine aktive trombositler ve lökositler (özellikle nötrofiller) etkileşimi. 1,2, aktive endotel ve subendotelyal matriks proteinlerine yapışkan trombositlere nötrofil yuvarlanma ve yapışma destekliyoruz. 3 Tersine, venüler inflamatuar koşullarda, aktif endotele yapıştığında nötrofil trombositlerin dolaşımdaki adezyon ve birikimi destekleyebilir. Heterotipik trombosit-agregasyonu nötrofil hücreleri arasındaki spesifik reseptör-reseptör etkileşimleri yoluyla sayaç ardışık işlemler gerektirir. 4 O aktive edilmiş endotel hücreleri, böylece yüksek kesme koşulları altında trombosit yapışması ve birikim başlatılması, bu tür von Willebrand faktörü gibi yapışma molekülleri serbest olduğu bilinmektedir. 5 Ayrıca, aktive endotel hücreleri ifade selektinler nötrofil yuvarlanma ve adezyon bir destekd Hücrelerarası adezyon molekülü-1 (ICAM-1), sırasıyla, düşük kesme koşulları altında. 4 Trombosit P-selektin yoluyla nötrofiller ile etkileşime girer p-selektin glikoprotein ligandı-1 (PSGL-1), nötrofil ve böylece β2 integrinler ve sağlam aktivasyonunu uyararak İki hücre türleri arasındaki yapışma. Heterotipik trombosit-nötrofil etkileşimleri tam kan ya da izole edilmiş hücreler 6,7 olarak belirlendiği in vitro deneylerde gelişmelere rağmen, bu çalışmalar vasküler hastalık sırasında oksidatif stres koşulları manipüle edemez. Bu raporda, trombosit ve nötrofil işaretleyici bir fare karşı floresan-etiketli, spesifik antikorlar kullanılarak, TNF-α ile indüklenen inflamasyonu veya lazer kaynaklı takip sırasında aktive endotel üzerinde trombosit ve nötrofil heterotipik etkileşimlerini izlemek için ayrıntılı bir intravital mikroskopik protokol açıklar canlı farelerin cremaster kas mikrodamar yaralanma.
Burada vasküler inflamasyon ve tromboz sırasında aktive endotel üzerindeki heterotipik trombosit-nötrofil etkileşimleri görselleştirmek için gerçek zamanlı floresan intravital mikroskopi için ayrıntılı bir protokol açıklar. Daha önce, benzer floresans mikroskopik yaklaşımlar trombüs oluşumu ve vasküler inflamasyonun moleküler mekanizması çalışmaya bildirildi. 8,12 heterotipik hücre-hücre etkileşimi yaralanma yerinde vazo-oklüzyon için önemli olabilir bu yana, bu teknoloji iç…
The authors have nothing to disclose.
Bu çalışma Ulusal Sağlık Enstitüleri ile hibe (JC P30 HL101302 ve RO1 HL109439) ve Amerikan Kalp Derneği (JC SDG 5270005) tarafından kısmen desteklenmiştir. A. Barazia bir T32HL007829 NIH eğitim hibesi ile desteklenmiştir.
Name of Reagent/Material | Company | Catalog Number | Comments |
NaCl | Fisher Scientific | 7647-14-5 | |
KCl | Sigma-Aldrich | 7447-40-7 | |
CaCl2 2H2O | Sigma-Aldrich | 10035-04-8 | |
MgCl2 6H2O | Fisher Scientific | 7791-18-6 | |
NaHCO3 | Fisher Scientific | 144-55-8 | |
0.9% NaCl Saline | Hospira | 0409-4888-10 | |
Ketamine | Hospira | 0409-2051-05 | |
Xylazine | Lloyd | ||
Intramedic Tubing (PE 90) | BD Diagnostics | 427421 | |
Intramedic Tubing (PE 10) | BD Diagnostics | 427401 | |
Murine TNF-α | R&D Systems | 410-MT | |
Dylight 488- labeled rat anti-mouse CD42b antibody | Emfret Analytics | X488 | |
Alexa Fluor 647-conjugated anti-mouse Ly-6G/Ly-6C (Gr-1) Antibody | BioLegend | 108418 | |
NESLAB EX water bath/circulator | Thermo-Scientific | ||
Olympus BX61W microscope | Olympus | ||
TH4-100 Power | Olympus | ||
Lambda DG-4 | Sutter | ||
MPC-200 multi-manipulator | Sutter | ||
ROE-200 stage controller | Sutter | ||
C9300 high-speed camera | Hamamatsu | ||
Intensifier | Video Scope International | ||
Ablation Laser | Photonic Instruments, Inc. | ||
SlideBook 5.0 | Intelligent Imaging Innovations |