אבחון שחפת ריאתית עם מבחן אקספרט MTB / RIF
Summary
בדיקת MTB / RIF אקספרט משלב טיהור המדגם, דיבורית המבצע, ב-Board עיבוד המדגם, ו-Ultra-רגיש חמי מקונן PCR לזיהוי בו זמני של<em> שחפת Mycobacterium</em> והתנגדות ריפאמפיצין, בין expectorated כיח או ליחה משקעים מרוכזים, ב כשעתיים. בדיקה הוא סטנדרטי דורש תשתית המעבדה מתונה בלבד והדרכה.
Abstract
שחפת (TB), בשל מחלת השחפת Mycobacterium (MTB) נותר נושא מרכזי בריאות הציבור: זיהום משפיע על עד כשליש מאוכלוסיית העולם 1, כמעט שני מיליון בני אדם נהרגים מדי שנה על ידי TB 2 גישה אוניברסלית באיכות גבוהה. , המטופל במרכז הטיפול בכל החולים שחפת מודגש על ידי מי זה אסטרטגיה TB עצור. 3 איתור מהיר של MTB בדגימות נשימה טיפול תרופתי על בסיס אמין ההתנגדות תוצאות בדיקות סמים הם תנאי הכרחי ליישום מוצלח של אסטרטגיה זו. עם זאת, באזורים רבים של העולם, אבחון שחפת עדיין מסתמך על חסר רגישות, שיטות מיקרוסקופיה סטנדרטיים גרוע כיח. TB איתור יעיל הופעתה והעברת סמים זנים עמידים יותר ויותר MTB לסכן גלובליים לשלוט בפעילות שחפת. 2
אבחון יעיל של שחפת ריאתית דורש זמינות – בקנה מידה עולמי – של מעמדardized, כלי אבחון קל לשימוש, חזקים שיאפשרו זיהוי ישיר של המתחם הן MTB ועמידות לאנטיביוטיקה מפתח, כגון ריפאמפיצין (RIF). תוצאה זו האחרונה יכולה לשמש סמן MTB multidrug עמיד (MDR TB) ו דווחה> 95% של MDR-TB מבודד. 4, 5 זמינות מהירה של תוצאות הבדיקה אמינה צפוי ישירות לתרגם וניהול החולה קול החלטות שבסופו של דבר, ירפא את החולה היחיד לשבור את השרשרת של העברת שחפת בקהילה. 2
של קפאידים (Sunnyvale, קליפורניה, ארה"ב) אקספרט MTB / RIF assay 6, 7 עונה על הדרישות שפורטו לעיל באופן יוצא דופן. זהו מבחן גרעין חומצות הגברה עבור 1) גילוי ה-DNA מורכב MTB ב כיח או משקעים כיח מרוכזים, ו 2) זיהוי של הרי"ף התנגדות הקשורים מוטציות של הגן rpoB 8 היא מיועדת לשימוש עם Dx GeneXpert קפאידים של. מערכת הב משלבת לאוטומטי עיבוד המדגם, הגברה חומצות גרעין, וזיהוי של רצפי היעד באמצעות בזמן אמת ו-PCR הפוך transcriptase PCR. המערכת כוללת מכשיר, מחשב אישי, סורק ברקוד, ותוכנה מראש להפעלת בדיקות תצוגת התוצאות. 9 היא מעסיקה אחת לשימוש חד פעמי אקספרט MTB / RIF מחסניות אשר מחזיקים חומרים כימיים ה-PCR ולארח את תהליך ה-PCR. בגלל מחסניות הם בלתי תלוי, בין זיהום בין דגימות מתבטלת. 6 שוטפות גרעין הגברה חומצה שיטות לגילוי MTB הם מורכבים, עתירי עבודה, וטכנית תובעני. Assay MTB / RIF אקספרט יש את הפוטנציאל להביא בדיקות אבחון סטנדרטי, רגיש וספציפי מאוד TB וגם עמידות לתרופות גישה אוניברסלית נקודות של טיפול הגדרות 3, בתנאי שהם יוכלו להרשות זאת לעצמם. על מנת להקל את הגישה, קרן עבור אבחון חדשני חדשים (מצא) ניהלה מו"מ מובהקירידות המחירים צביעות. מחירי למצוא, משא ומתן הנוכחי, יחד עם רשימה של ארצות הזכאיות להנחות את, זמינים באינטרנט. 10
Protocol
Discussion
Assay MTB / RIF אקספרט משלב טיהור המדגם, דיבורית המבצע, ב-Board עיבוד המדגם, ו-Ultra-רגיש חמי מקונן PCR לזיהוי בו זמני של MTB והתנגדות RIF, בין כיח expectorated או משקעים מרוכזים, ב יחיד , קל לשימוש המערכת. גבול אנליטית של assay של זיהוי נמצא כי 131 CFU / מ"ל של ליחה. 6 יחסים יומן ליניארי בין ערכים CT ו את מספר התאים MTB להציג נכון גם מן פבואר 10 – יולי 10 CFU / מ"ל של כיח. כמו ריכוזים MTB רלוונטיות קלינית כולם נופלים בטווח הליניארי של assay, assay מספק וכמותיות הערכות של עומס חיידקי. 7 assay דורש תשתית המעבדה מתונה בלבד והדרכה. גבול גילוי שקרים לפחות בשני סדרי גודל נמוך מזה של מיקרוסקופ רגיל. 6 ספציפיות מצוין. יתר על כן, זיהוי בו זמני של RIF-resistanלא MTB הוא יתרון משמעותי בסביבה של בדיקות הצבע של טיפול בעידן של שחפת עמידה לתרופות. 3
עד כה רק נתונים שפורסמו מוגבלת על ביצועי assay לאבחון שחפת ריאתית במסגרות קליניות זמינים 12, 13. הרגישות הקלינית הכוללת assay MTB / RIF של אקספרט לזהות MTB ב ליחה של חולים עם שחפת ריאתית חשד היה 97.6% בהשוואה לתרבות כנקודת התייחסות. היו אלה ממצאיו של מחקר רב מרכזי פרוספקטיבי שכלל חמישה אתרי לימוד (לימה, פרו; בבאקו, אזרבייג'ן, קייפטאון & דרבן, דרום אפריקה, מומבאי, הודו) ובסך הכל של 1462 חולים. ההסתברות הכוללת לפני מבחן TB-התרבות אישר אוכלוסיית המחקר היה 50.7%. הרגישות הייתה 99.8% עבור מקרים למרוח-ותרבות חיובי ו 90.2% עבור כתם שלילי, תרבות חיובי המקרים. בקרב חולים עם HIV עם שחפת ריאתית, את הרגישות של הבדיקה MTB / RIF היה 93.9%, לעומת 98.4% בשנתHIV-שלילי. 12 חולים בסביבה של שכיחות נמוכה TB, ההסכם הכולל לאיתור MTB היה 89% בהשוואה לתרבות, רגישות היה 98% עבור% משטח חיובי ו 72 על משטח שלילי דגימות, בהתאמה, הספציפיות היה מצוין. 13 לא היה הבדל משמעותי בין רגישות בדיקות כיח מטופל לבין אלה מרוכזים על משקעים. 12 באותו מחקר, בדיקת MTB / RIF זוהה כהלכה התנגדות RIF ב 209 מתוך 211 חולים (99.1% רגישות) והן כל 506 חולים עם רגישות RIF (100 הספציפיות%), כאשר תוצאות רצף נלקחו בחשבון. 12 החוקרים מצאו כי ביצועי לגילוי הן במקרה, ואפליה של התנגדות RIF, היה דומה פני אתרים שונים, טוען כי הממצאים עשויים להיות ישימה באופן נרחב. 12 יתר על כן, המשקעים מרוכזים של דגימות נשימה שאינם ליחה, כגון broncho-מכתשיים שטיפה ו הסימפונותהפרשות L, נבדקו עם רגישות וספציפיות דומה ו. 13 נתונים על הביצועים של assay כאשר בודקים במיוחד שחפת ריאתית היא המתעוררים. 15
השליטה TB העולמית זקוקה בדחיפות כלים יעילים המאפשרים אבחון מהיר של מקרי שחפת חדשים זיהוי של MTB RIF עמיד ב גישה אוניברסלית נקודה של טיפול הגדרות. 3 שוטפות גרעין הגברה חומצה שיטות לגילוי MTB הם מורכבים, עתירי עבודה, מבחינה טכנית תובעני. Assay MTB / RIF אקספרט יש את הפוטנציאל להביא בדיקות אבחון סטנדרטי, רגיש וספציפי מאוד TB וגם עמידות לתרופות בהגדרות אלה, בתנאי שהם יוכלו להרשות זאת לעצמם. על מנת להקל את הגישה, קרן עבור אבחון חדשני חדשים (מצא) ניהלה מו"מ ירידות מחירים משמעותיות עבור הבדיקה Xpert MTB / RIF. מחירי למצוא, משא ומתן הנוכחי, יחד עם רשימה של ארצות הזכאיות להנחות את, זמינים באינטרנט. 10 </sup>
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
המחברים מודים WJ לוני עבור בזהירות בדיקת כתב היד.
Materials
| Reagent/Equipment | Company | Catalogue number |
| Xpert MTB/RIF test | Cepheid | GXMTB/RIF-10 |
| Transfer pipettes | Sarstedt | 86.1172.001 |
| Conical tubes, 15 ml, 120 x 17 mm, PS | Sarstedt | 62.553.542 |
References
- Sudre, P., Dam, t. e. n., Chan, G., C, A., Kochi, Tuberculosis in the present time: a global overview of the tuberculosis situation. World Health Organisation Document WHO/TUB/91. 158, 1-47 (1991).
- World Health Organisation. Global tuberculosis control: epidemiology, strategy, financing. WHO report 2010. , (2010).
- . . The global plan to stop TB, 2006-2015. , (2006).
- Morris, S., et al. Molecular mechanisms of multiple drug resistance in clinical isolates of Mycobacterium tuberculosis. J. Infect. Dis. 171, 954-960 (1995).
- Traore, H., Fissette, K., Bastian, I., Devleeschouwer, M., Portaels, F. Detection of rifampicin resistance in Mycobacterium tuberculosis isolates from diverse countries by a commercial line probe assay as aninitial indicator of multidrug resistance. Int. J. Tuberc. Lung Dis. 4, 481-484 (2000).
- Helb, D., et al. Rapid Detection of Mycobacterium tuberculosis and Rifampin Resistance by Use of On-Demand Near-Patient Technology. J. Clin. Microbiol. 48, 229-237 (2010).
- Blakemore, R., et al. Evaluation of the Analytical Performance of the Xpert MTB/RIF. Assay. J. Clin. Microbiol. 48, 2495-2501 (2010).
- Telenti, A., et al. Detection of rifampicin-resistance in Mycobacterium tuberculosis. Lancet. 341, 647-650 (1993).
- . . GeneXpert Dx System Operator Manual. , (2011).
- . . International Standards for Tuberculosis Care (ISTC). , (2009).
- Boehme, C. C., et al. Rapid Molecular Detection of Tuberculosis and Rifampin Resistance. N. Engl. J. Med. 363, 1005-1015 (2010).
- Marlowe, E. M., et al. Evaluation of the Cepheid Xpert MTB/RIF assay for the Direct Detection of Mycobacterium tuberculosis Complex from Respiratory Specimens. J. Clin. Microbiol. 49, 1621-1623 (2011).
- El-Hajj, H. H., Marras, S. A. M., Tyagi, S., Kramer, F. R., Alland, D. Detection of rifampin resistance in Mycobacterium tuberculosis in a single tube with molecular beacons. J. Clin. Microbiol. 39, 4131-4137 (2001).
- Hillemann, D., Ruesch-Gerdes, S., Boehme, C., Richter, E. Rapid molecular detection of extrapulmonary tuberculosis by automated GeneXpert MTB/RIF system. J. Clin. Microbiol. 49, 1202-1205 (2011).
