تشخيص السل الرئوي مع اختبار MTB / RIF كسبيرت

معيار 2 من المعايير الدولية لرعاية السل الدول أن جميع المرضى الذين يشتبه في وجود مرض السل الرئوي وينبغي أن يقدم عينات من البلغم اثنين على الأقل من أجل الفحص البكتريولوجي. عندما يكون ذلك ممكنا، ينبغي الحصول على واحدة على الأقل في الصباح الباكر عينة، والبلغم التي جمعت في هذا الوقت لديها أعلى عائد. يمكن تطبيقها (11) MTB / RIF كسبيرت فحص لعينات البلغم أو الرواسب البلغم المركز أعد من sputa محرض أو expectorated التي هي . إما عصيات مقاومة للحمض (AFB) مسحة إيجابية أو سلبية 6، 12، 13 والهدف من فحص للاستخدام مع العينات المأخوذة من المرضى الذين هناك اشتباه سريري من السل الرئوي الذين لديهم: 1) لم يتلق العلاج المضاد للسل، 2 ) قد <7 أيام من العلاج، أو 3) لم يتلقوا العلاج في الأيام ال 60 الماضية. هل لاحظ أنه لا ينبغي أن تستخدم لرصد آثار العلاج بالعقاقير 7 لأن الحمض النووي للبكتيريا قد تستمر بعد العلاج المضادة للميكروبات. <p الطبقة = "jove_content"> علاج العينات السريرية، بما في ذلك الخراطيش المستخدمة، كما لو قادرة على نقل العوامل المعدية. استخدام الاحتياطات المناسبة، مثل ارتداء القفازات الواقية للتصرف، والمعاطف مختبر، وحماية العين، واتباع اجراءات السلامة مؤسستكم والمبادئ التوجيهية. 1. عينات البلغم Expectorated ملاحظة: عملية فقط كما العديد من العينات في وقت واحد، كما أن هناك GeneXpert DX نظام الوحدات المتاحة لتشغيل اختبار! تسمية كل MTB / RIF كسبيرت خرطوشة مع معرف عينة المقابلة. expectorated نقل 1.0 مل البلغم إلى أنبوب مخروطي المسمار المغطاة، وذلك باستخدام ماصة نقل معقمة. بدلا من ذلك، قد يتم معالجة عينة كامل في الاصل مانعة للتسرب البلغم حاويات خاصة لجمع. إضافة 2.0 مل كسبيرت الكاشف عينة MTB / RIF (2:1؛ V / V) لالبلغم expectorated باستخدام ماصة نقل معقمة. استبدال غطاء، ويهز الأنبوب بقوة 10-20 مرات. بدلا من ذلك، قد يكون vortexed الخليط (30 ثانية). السماح للأنبوب إلى الوقوف بشكل مستقيم لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. هز أنبوب بقوة 10-20 مرة. بدلا من ذلك، استخدم دوامة (30 ثانية). السماح للأنبوب إلى الوقوف بشكل مستقيم لمدة 10 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. فحص العينات: يجب المسال العينات مع عدم وجود كتل واضحة من البلغم. 2. مركز الرواسب ملاحظة: عملية فقط كما العديد من العينات في وقت واحد كما ان هناك GeneXpert DX نظام الوحدات المتاحة لتشغيل الاختبارات! تسمية كل MTB / RIF كسبيرت خرطوشة مع معرف عينة المقابلة. نقل 1.5 مل كسبيرت الكاشف عينة MTB / RIF إلى أنبوب مخروطي المسمار المغطاة، وذلك باستخدام ماصة نقل معقمة. إضافة ما لا يقل عن 0.5 مل الرواسب مركزة على عينة تحتوي على أنبوب الكاشف باستخدام ماصة نقل معقمة. استبدال غطاء، ويهز الخامس أنبوبigorously 10-20 مرة. بدلا من ذلك، استخدم دوامة (30 ثانية). السماح للأنبوب إلى الوقوف بشكل مستقيم لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. هز أنبوب بقوة 10-20 مرة. بدلا من ذلك، استخدم دوامة (30 ثانية). السماح للأنبوب إلى الوقوف بشكل مستقيم لمدة 10 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. فحص العينات: يجب المسال العينات مع عدم وجود كتل واضحة من البلغم. 3. تحميل MTB / RIF كسبيرت خرطوشة ملاحظة: بدء الاختبار في غضون 30 دقيقة من إضافة العينة إلى خرطوشة! التحقق من العلامات على كسبيرت MTB / RIF خرطوشة ورقم العينة. فتح غطاء خرطوشة. باستخدام ماصة نقل معقمة المقدمة، ونضح العينة المسال في ماصة نقل حتى الغضروف المفصلي هو فوق علامة الحد الأدنى ونقل العينة إلى فتح منفذ للخرطوشة MTB / RIF كسبيرت. ملاحظة:الاستغناء ببطء لتقليل خطر من تشكيل الهباء! إغلاق غطاء خرطوشة. 4. بدء اختبار ملاحظة: قبل البدء في الاختبار، وضمان أن يتم تجهيز نظام DX GeneXpert مع برنامج GX2.1، ويتم استيراد MTB / RIF كسبيرت الفحص في البرنامج 9! تشغيل الكمبيوتر، ثم تشغيل الأداة DX GeneXpert. على سطح المكتب Windows، انقر نقرا مزدوجا فوق الاختصار DX GeneXpert رمز. تسجيل الدخول إلى نظام GeneXpert البرمجيات DX باستخدام اسم المستخدم وكلمة السر. في نظام GeneXpert نافذة DX، انقر فوق إنشاء اختبار. والباركود خرطوشة مسح يظهر مربع حوار. في عينة المربع معرف، تفحص أو اكتب معرف عينة. مسح الباركود على خرطوشة MTB / RIF كسبيرت. إنشاء إطار الاختبار يظهر. انقر فوق ابدأ الاختبار </قوي>، وأدخل كلمة المرور في مربع الحوار الذي يظهر. فتح الباب وحدة أداة مع الضوء الاخضر وامض، وتحميل خرطوشة. أغلق الباب. الاختبار يبدأ وميض ضوء توقف ويبقى أخضر باستمرار. عند الانتهاء من الاختبار، وعلى ضوء إيقاف. الانتظار حتى يصدر نظام قفل الباب في نهاية الفترة السابقة، ثم فتح الباب وحدة وإزالة خرطوشة. تخلص من الخراطيش المستعملة في حاويات النفايات مناسبة وفقا للممارسات مؤسستك القياسية. 5. ممثل النتائج كل MTB / RIF كسبيرت خرطوشة يشمل الكواشف للكشف عن مجمع MTB والمقاومة RIF، فضلا عن مراقبة تجهيز العينات (SPC) للسيطرة على لمعالجة كافية من البكتيريا المستهدفة ورصد وجود المانع (ق) في رد فعل PCR . التحكم تحقق من التحقيق (PCC) يتحقق الإماهة كاشف، PCR أنبوب ملءخرطوشة، وسلامة التحقيق، وصبغ الاستقرار. (9) الاشعال في فحص MTB / RIF كسبيرت تضخيم جزء من الجين الذي يحتوي على زوج rpoB قاعدة 81 "الأساسية" المنطقة. خمسة ألوان مختلفة fluorogenic تهجين الحمض النووي تحقيقات، ودعا منارات الجزيئية، واستجواب كامل 81-BP الأساسية. وقد تم تصميم كل 14 منارة الجزيئية أن تكون محددة بحيث لا ربط هدفها إذا كان تسلسل هدف يختلف عن rpoB من النوع البري تسلسل فشيئا مثل استبدال 1 النوكليوتيدات واحد. منذ مضان منارات الجزيئية فقط عندما تكون ملزمة لأهدافها، أي تسلسل rpoB من النوع البري، لعدم وجود أي واحد من خمسة ألوان في فحص التفريق بين تسلسل من النوع البري حفظها والطفرات في المنطقة الأساسية التي ترتبط مع RIF مقاومة. 6 وينبغي أن محكمة الشعب العليا أن تكون إيجابية في عينة السلبية، ويمكن أن يكون سلبيا أو إيجابيا في عينة ايجابية. الاختباروسوف تكون النتيجة "غير صالح" اذا لم يتم الكشف عن هيئة تخطيط الدولة في اختبار سلبي. قبل بداية رد فعل PCR، ونظام DX GeneXpert يقيس إشارة مضان من المجسات لرصد الجفاف حبة، ملء أنبوب رد فعل، وسلامة التحقيق والاستقرار صبغ. المجلس المركزي الفلسطيني يمر في حالة إشارة مضان من تحقيقات تستوفي معايير قبول تعيينه. يتم تفسير النتائج وفقا لنظام DX GeneXpert من إشارات مضان قياس والخوارزميات حساب جزءا لا يتجزأ من ويتم عرضها في نافذة عرض النتائج 9، على النحو المبين أدناه: MTB الكشف: يتم الكشف عن الحمض النووي MTB الهدف، وكلاهما الضوابط، وهيئة تخطيط الدولة والحزب الشيوعي الكولومبي، وتلبية معايير قبول تعيينه. انخفاض قيم ط م تمثل أعلى تركيز بدءا من قالب الحمض النووي؛ أعلى القيم ط م تمثل أقل تركيز من قالب الحمض النووي. في النتائج MTB الكشف عن "الكشف عن RIF المقاومة" (الشكل 1A)، "لم يتم الكشف عن RIF المقاومة" ( <strأونج سوف> الشكل 1B)، أو "RIF المقاومة غير محدد" عرض على سطر منفصل. MTB لم يتم الكشف عن: لم يتم الكشف عن الحمض النووي MTB الهدف، وكلاهما الضوابط، وهيئة تخطيط الدولة والحزب الشيوعي الكولومبي، وتلبية معايير قبول تعيين (الشكل 2). صالح: لا وجود أو عدم وجود MTB يتحدد: هيئة تخطيط الدولة لا تستوفي معايير القبول، أي لم يكن عينة معالجتها بشكل صحيح، أو كانت تحول دون PCR (الشكل 3). ملاحظة: اختبار مع تكرار عينة اضافية! خطأ: واحد أو أكثر من نتائج فشل PCC (تفشل). كلا MTB وSPC عرض أي نتيجة. ملاحظة: اختبار مع تكرار عينة اضافية! إذا مرت PCC (باس)، وتسبب في الخطأ من خلال نظام فشل عنصر. تم الكشف عن الحمض النووي MTB الهدف، وكلاهما الضوابط، وهيئة تخطيط الدولة والحزب الشيوعي الكولومبي، وتلبية معايير قبول تعيينه: الشكل 1. انخفاض قيم ط م تمثل أعلى انطلاقتركيز من قالب الحمض النووي؛ أعلى القيم ط م تمثل أقل تركيز من قالب الحمض النووي. في الكشف عن نتائج MTB "RIF المقاومة لم يتم الكشف عن" (الشكل 1A)، "الكشف عن RIF المقاومة" (الشكل 1B)، أو "RIF المقاومة غير محدد" سيعرض على سطر منفصل. الشكل 1A MTB المكتشفة؛ RIF المقاومة لم يتم الكشف عن أي فقط في البرية من نوع تسلسل الحمض النووي من منطقة الريف 81-BP مقاومة تحديد المنطقة (RRDR) من الجين rpoB كان حاضرا 6. انقر هنا لعرض أكبر شخصية . . 1B الكشف عن شخصية MTB؛ RIF المقاومة الكشف عنها. استكمال الانسحاب من التحقيق ب (السهم)، الذي يغطي مواقف 513-517 من R RDR من الجين rpoB. 6 في سبيل المثال، كشف التسلسل جزئي 8 التي تم الكشف عن طفرة جينية rpoB D516V. انقر هنا لعرض أكبر شخصية . الشكل 2 لم يتم الكشف عن الحمض النووي MTB المستهدفة؛.. كل الضوابط، وهيئة تخطيط الدولة والحزب الشيوعي الكولومبي، وتلبية معايير القبول المخصصة انقر هنا لعرض أكبر شخصية . . لا يمكن ان الرقم 3 نتيجة اختبار غير صالح، وجود أو عدم وجود أي MTB يتحدد: هيئة تخطيط الدولة لا تستوفي معايير القبول، لأنه لم يكن العينة المجهزة بشكل صحيح، أو لأنه يحول دون PCR.3547fig3large.jpg "الهدف =" _blank "> اضغط هنا لعرض أكبر شخصية.