The Xpert MTB/RIF test integrates sample decontamination, hands-free operation, on-board sample processing, and ultra-sensitive hemi-nested PCR for the simultaneous detection of Mycobacterium tuberculosis and rifampicin resistance, either in expectorated sputum or concentrated sputum sediments, in approximately two hours. Testing is standardized and requires only moderate laboratory infrastructure and training.
La tuberculose (TB) due à Mycobacterium tuberculosis (MTB) demeure un problème majeur de santé publique: l'infection touche jusqu'à un tiers de la population mondiale 1, et près de deux millions de personnes sont tuées par la tuberculose chaque année 2 L'accès universel à haute qualité. , centrée sur le patient un traitement pour tous les patients tuberculeux est souligné par la Stratégie OMS Halte à la tuberculose. 3 La détection rapide des VTT dans les échantillons respiratoires et les traitements médicamenteux en fonction des résultats des tests de résistance des médicaments fiables sont une condition préalable à la mise en œuvre réussie de cette stratégie. Cependant, dans de nombreux domaines du monde, diagnostic de la tuberculose repose toujours sur insensibles, mal standardisés des méthodes de microscopie des expectorations. Dépistage de la tuberculose inefficace et l'émergence et la transmission de souches de M. tuberculosis résistantes aux médicaments de plus en plus en péril les activités mondiales de lutte antituberculeuse. 2
Un diagnostic efficace de la tuberculose pulmonaire nécessite la disponibilité – à l'échelle mondiale – du standardized, faciles à utiliser, robuste et des outils de diagnostic qui permettent la détection directe à la fois du complexe M. tuberculosis et la résistance aux antibiotiques clés, tels que la rifampicine (RIF). Ce dernier résultat peut servir de marqueur pour multirésistante VTT (MDR TB) et a été signalée dans> 95% des isolats de TB-MR. 4, 5 La disponibilité rapide des résultats de test fiables est susceptible de se traduisent directement par la gestion des patients de son des décisions qui, en fin de compte, permet de guérir le patient et briser la chaîne de transmission de la tuberculose dans la communauté. 2
Cepheid (Sunnyvale, CA, USA) Xpert MTB / RIF dosage 6, 7 répond aux exigences décrites ci-dessus d'une manière remarquable. Il s'agit d'un test d'amplification nucléique acides pour 1) la détection de l'ADN complexe M. tuberculosis dans les crachats ou dans les sédiments de crachats concentrés, et 2) la détection du Rif associées à la résistance des mutations du gène rpoB 8 Il est conçu pour une utilisation avec Cepheid GeneXpert Dx. e systèmeau intègre et automatise le traitement des échantillons, l'amplification d'acide nucléique, et la détection des séquences cibles en utilisant PCR en temps réel et de la transcriptase inverse PCR. Le système se compose d'un instrument, un ordinateur personnel, lecteur de codes barres, et le logiciel préchargé pour l'exécution des tests et l'affichage des résultats. 9 Il emploie à usage unique jetables Xpert MTB / RIF cartouches qui contiennent des réactifs de PCR et d'accueillir le procédé PCR. Parce que les cartouches sont autonomes, la contamination croisée entre les échantillons est éliminée. 6 actuelles nucléiques méthodes d'amplification des acides utilisés pour détecter VTT sont complexes, de main-d'œuvre, et techniquement exigeant. Le Xpert MTB / RIF test a le potentiel d'apporter standardisé, sensible et très spécifique des tests de diagnostic pour la tuberculose et la résistance aux médicaments à l'universel l'accès au point de milieux de soins 3, à condition qu'ils soient en mesure de se le permettre. Afin de faciliter l'accès, la Fondation pour l'innovation en matière de Nouveaux Diagnostics (FIND) a négocié signifiréductions de prix dévers. Les prix actuels TROUVEZ-négociés, ainsi que la liste des pays éligibles pour les rabais, sont disponibles sur le Web 10.
The Xpert MTB/RIF assay integrates sample decontamination, hands-free operation, on-board sample processing, and ultra-sensitive hemi-nested PCR for the simultaneous detection of MTB and RIF resistance, either in expectorated sputum or concentrated sediments, in a single, easy to use system. The assay’s analytical limit of detection was found to be 131 CFU/ml of sputum.6 The log-linear relationship between Ct values and the number of MTB cells present holds true from 102 to 107 CFU/ml of sputum. As clinically relevant MTB concentrations all fall within the linear range of the assay, the assay provides semi-quantitative estimates of the bacterial load.7 The assay requires only moderate laboratory infrastructure and training. The limit of detection lies at least two orders of magnitude lower than that of conventional microscopy.6 Specificity is excellent. Furthermore, the simultaneous detection of RIF-resistant MTB is a significant benefit in the setting of point-of-care testing in the era of drug-resistant TB.3
To date only limited published data on the assay’s performance for diagnosing pulmonary TB in clinical settings are available.12; 13 The Xpert MTB/RIF assay’s overall clinical sensitivity of detecting MTB in sputum of patients with suspected pulmonary TB was 97.6% when compared to culture as the reference. These were the findings of a prospective multi-center study that involved five study sites (Lima, Peru; Baku, Azerbaijan; Cape Town & Durban, South Africa; Mumbai, India) and a total of 1462 patients. The overall pre-test probability of culture-confirmed TB in the study population was 50.7%. The sensitivity was 99.8% for smear- and culture-positive cases and 90.2% for smear-negative, culture-positive cases. Among HIV-positive patients with pulmonary TB, the sensitivity of the MTB/ RIF test was 93.9%, as compared with 98.4% in HIV-negative patients.12 In a setting of low TB prevalence, the overall agreement for detecting MTB was 89% when compared to culture; the sensitivity was 98% for smear-positive and 72% for smear-negative specimens, respectively, and the specificity was excellent.13 There was no significant difference in sensitivity between tests on untreated sputum and those on concentrated sediments.12 In the same study, the MTB/RIF test correctly detected RIF resistance in 209 of 211 patients (99.1% sensitivity) and in all 506 patients with RIF susceptibility (100% specificity), when sequencing results were taken into account.12 The authors found that performance for both case detection, and discrimination of RIF resistance, was similar across diverse sites, suggesting that the findings are likely to be widely applicable.12 Furthermore, concentrated sediments of respiratory specimens other than sputum, such as broncho-alveolar lavage and bronchial secretions, were tested with comparable sensitivity and specificity.13 Data on the assay’s performance when testing extra-pulmonary TB is emerging.15
Global TB control urgently needs effective tools that permit rapid diagnosis of new TB cases and detection of RIF-resistant MTB in universal-access point-of-care settings.3 Current nucleic acid amplification methods used to detect MTB are complex, labor-intensive, and technically demanding. The Xpert MTB/RIF assay has the potential to bring standardized, sensitive and very specific diagnostic testing for both TB and drug resistance to these settings, provided that they will be able to afford it. In order to facilitate access, the Foundation for Innovative New Diagnostics (FIND) has negotiated significant price reductions for the Xpert MTB/RIF test. Current FIND-negotiated prices, along with the list of countries eligible for the discounts, are available on the web.10
The authors have nothing to disclose.
The authors acknowledge W. J. Looney for carefully reviewing the manuscript.
Reagent/Equipment | Company | Catalogue number |
Xpert MTB/RIF test | Cepheid | GXMTB/RIF-10 |
Transfer pipettes | Sarstedt | 86.1172.001 |
Conical tubes, 15 ml, 120 x 17 mm, PS | Sarstedt | 62.553.542 |