Использование Hanging вес системы для печени ишемии у мышей

Общие замечания. Все операции должны проводиться в вертикальном рассечения микроскопа (Leica) и с помощью хирургического коагулятора. Мышей в экспериментальных и мнимого групп должны соответствовать возрасту и весу для обеспечения сопоставимости результатов. Температура, давление крови, анестезии и жидкости администрации должна быть стабильной и контролируется в течение всего эксперимента. 1. Анестезия и хирургия C57BL / 6 должны быть в возрасте от 10 до 16 недель, и они должны быть соответствующего пола в соответствующих группах. Обезболить мышей с фенобарбиталом натрия (70 мг / кг массы тела внутрибрюшинно) и поддержания анестезии с ок. 10 мг / кг / ч пентобарбитала натрия. Передозировка может привести к значительному снижению артериального давления и, следовательно, могут изменить результаты. Место мыши на контролируемой температурой нагретого таблицы (РТ, Эффенберг, Мюнхен, Германия) с ректальный зонд термометра подключен к тепловой обратной связиКонтроллер для поддержания температуры тела на 37 ° C. Место мышей в положении лежа на операции стол, верхних и нижних конечностей крепится к столу со съемной кассеты. В случае выживания экспериментов соответствующих асептических методов, включая отсечение волос, дезинфекция кожи с йодофоры (например, Бетадин), стерильная обработка автоклавного инструментов, с использованием масок и стерильные перчатки для хирурга не требуется. 2. Портал Триада Occlusion Обложка области разреза с минеральным маслом, чтобы предотвратить вдыхание мыши волосы обрезать кожу и тем самым предотвращая риск аллергии мыши волос. Выполните срединной лапаротомии и разрез белой линии до верхнего конца, так что вы можете легко выявить печени. Если возможно выполнить разрез с коагуляции электрод (Эрбе, ICC50, Тюбинген, Германия), чтобы предотвратить кровотечение. Поместите нагревательный стол с помощью мыши в позицию, что хвост направленииТед к хирургу. Эта позиция предоставляет наилучшие условия для локализации триады и поставить шва. Свернуть кишечник с правой стороны с помощью мокрой шваброй кончик хлопком разоблачить портал триады. Немного сместить средней и левой доли по отношению к диафрагме и правой доле на кишечнике. Это даст вам четкое представление о портале триада выше бифуркации права, медиана / левой долями. Внимательно осмотрите портал триады и удерживайте нажатой правую долю мягко вниз с мягким пинцетом. Это даст вам прекрасный вид на левый триада портала. Как только визуально определить место иглы для наложения швов (7/0 нейлоновый шов, Ethicon, Нордерштедт, Германия) через иглу держателя под левой портал триады, в том числе печеночной артерии, печеночной вены и желчного протока с левой на правую сторону мыши. Стежка должна быть тесно в рамках триады. Более глубокий шов может повредить полой Вака уступает которая находится подтриады. Поэтому оставляют за собой право долей печени вниз, щипцы для определения полой вены перед размещением стежка. Возьмите кончик иглы на правой стороне с пинцетом и потянуть его осторожно из области печени, не повредив печень. Прикрепите к каждому концу шва трубы Эппендорф (около 3 г, наполненной водой) и поместите оба шва на шов заканчивается владельцев. Поместите шва держатель дистальнее шов, чтобы шов не препятствовать осуществлению прав триады. Применяя веса триады будет немедленно окклюзии, вызывая прекращение кровоснабжения левой и средней долей печени. Успешное окклюзия может быть легко подтверждено путем визуального осмотра бледно побледнение ишемической долей. С другой стороны, изменение цвета сразу же исчезает, когда висит веса освобождаются от полюсов и печень reperfused. Эта модель частичного ишемии печеночной избежать заторов брыжеечных, сохраняя Blooг потока справа доли печени. Замените кишечника в брюшную полость. Держите печени и кишечника теплым мокрым тампоном, смоченным в воде при температуре 37,0 ° С. Кроме того, держать температуру тела стабильного покрытия мышей с помощью коммерчески доступных пищевой пленкой после окончания операции. Выполните ишемии при необходимости в протоколе исследования. После определенного времени выпуска ишемии веса и реперфузии средней и левой доли печени начнется немедленно. Эта техника позволяет производить обратимое ишемия у мышей. Если нет дальнейшего раз ишемии будет осуществляться осторожно удалите шва. Добавить 400 мкл хлорида натрия в брюшную полость 15 минут до и непосредственно после реперфузии. Продолжайте заменять жидкости каждые 30 минут в размере 100 мкл, чтобы компенсировать потери жидкости во время реперфузии времени. Для выживания экспериментов в области операционной раны закрывают непрерывным швом мышц стенки и кожу шм 4/0 шва. 3. Изменения в печени перфузии Следующие параметры результата рекомендуется определять повреждения печени вследствие ишемии печеночной: Определение ферментов печени (например, АЛТ, АСТ) и гистологии печени (H & E окрашивание) после ишемии и реперфузии печени 3,9. Рисунок 1 Модель висячей вес системы печени ишемии. Висит масса была создана система, чтобы вызвать печень ишемия левой и средней доли 3. () Таким образом, хвостатых и правой доли были аккуратно отделить от левой доли. Правой доли был тогда немного сдвинута четко просмотреть портал триады выше бифуркации правой, средней и левой долями. 8,0 нейлоновый шов был помещен под левую триаду печени. (B) в конце каждого шва малый вес (3 г Эппендорф туБес наполненный водой) был присоединен и применяются. Печеночная ишемии видно по изменению цвета на левой и средней доле от красного до светло. Этот экспериментальный дизайн позволяет точно окклюзии и реперфузии левой печеночных триад, применяя и освобождение вес груза. Рисунок 2. Влияние разное время ишемии печени на аланин (АЛТ) и аспартатаминотрансферазы (АСТ) аминотрансфераз у мышей. Частично портал триады ишемии вызывали, как указано (0 – 60 мин ишемии). Через 2 часа реперфузии, ALT (A) и АСТ (б) были измерены. Результаты представлены как среднее ± SE 6 – 7 мышей / группу. * P <0,05 по сравнению с 0 мин ишемии (фиктивный контроль).