Utilisation d'un système de suspension de poids de l'ischémie du foie chez la souris
Summary
Nous avons établi un modèle murin roman d'un système de poids suspendu pour le portail triade d'occlusion. Cette technique peut être utile pour des enquêtes futures de l'ischémie dans les modèles murins hépatiques.
Abstract
Atteinte hépatique aiguë due à une ischémie peut se produire au cours de plusieurs procédures cliniques de transplantation du foie par exemple, résection de la tumeur hépatique ou la réparation des traumatismes et peut entraîner une insuffisance hépatique qui a un taux élevé de mortalité 1-2. Par conséquent études murin d'ischémie hépatique sont devenus un important domaine de recherche en offrant la possibilité d'utiliser les études pharmacologiques et génétiques 3-9. Plus précisément, les souris conditionnelles avec suppression du tissu spécifique d'un gène (CRE, flox système) fournir des indications sur le rôle des protéines dans des tissus particuliers 10-13. En raison de la difficulté technique associée à la main de serrage de la triade portale chez la souris, nous avons effectué une évaluation systématique à l'aide d'un système de pendaison de poids pour le portail triade d'occlusion qui a été décrit précédemment 3. En utilisant un système de suspension de poids nous plaçons un fil de suture autour de la branche gauche de la triade portale sans causer de dommages aux lobes hépatiques, depuis aussi lemeilleurs colliers disponibles peuvent endommager les tissus hépatiques en raison de la proximité des tissus du foie aux navires. En outre, la branche droite de la triade hépatique est encore perfusé donc pas de congestion intestinale se produit avec cette technique que le flux sanguin vers les lobes hépatiques droit est préservé. En outre, la triade portale est uniquement manipulé une fois pendant toute la procédure chirurgicale. En conséquence, les procédures comme le pré-conditionnement, avec des temps courts de l'ischémie et la reperfusion, peut être facilement réalisée. L'évaluation systématique de ce modèle en effectuant une ischémie reperfusion fois différent et a révélé une corrélation étroite entre le temps d'ischémie hépatique avec des dommages au foie, telle que mesurée par l'alanine (ALT) et aspartate (AST) aminotransférases sériques 3,9. Pris ensemble, ces études confirment une lésion hépatique hautement reproductible lors de l'utilisation du système de suspension de poids de l'ischémie reperfusion hépatique et intermittente. Ainsi, cette technique pourrait être utile pour l'intérêt d'autres chercheursed dans les études d'ischémie du foie chez la souris. Par conséquent, le clip vidéo fournit une description étape par étape la description de cette technique.
Protocol
Discussion
La présente étude décrit une technique d'effectuer une ischémie dans un modèle murin en utilisant un système de suspension de poids pour l'occlusion de la triade portale hépatique gauche. Bien que c'est une méthode facile à apprendre les pièges suivants devraient être pris en compte. Une erreur très commune dans le début est un point de profond qui comprend le portail triade et la veine cave. Le rythme de la respiration et le cœur va ralentir dans les 15 minutes en raison de l'augmentation de la résistance et la diminution de retour du sang vers le cœur entraînant une mort précoce des souris. La meilleure façon de prévenir l', y compris de la veine cave est de localiser la veine cave avant le point en tenant les lobes droit vers le bas avec une pince. Une autre question importante est que les poids lourds ne sont pas à ce qui peut entraîner trop de stress sur le procès portail de gauche et de droite qui s'arrête aussi le flux sanguin vers les lobes droit. Par conséquent, la quantité d'eau dans les flacons de Eppendorf doit être ajustée au poids de la souris et le sporteurs AVENIR doit être placé de manière distale à partir de l'emplacement de point. A l'inverse, si les poids sont à une pression artérielle basse n'est pas complètement arrêté. Les deux erreurs sont facilement détectables par un changement de couleur supplémentaire à pâle du lobe droit ou changement de couleur insuffisante des lobes médians et à gauche, respectivement. Par conséquent, le changement de couleur hépatique après application des pondérations doivent être contrôlés toutes les 10 minutes. Une autre complication chirurgicale courante est le blessant du foie à l'aiguille. Par conséquent, les lobes droit devrait être tenu vers le bas avec une pince fades de sorte que la pointe de l'aiguille peut être facilement vu et pris avec un porte-aiguille. Si ces pièges dans le début sont pris en compte le système de suspension de poids pour une ischémie hépatique fournit une lésion hautement reproductible due à une ischémie par minimisation de la variabilité de lésions hépatiques associé à serrage de l'espace porte. En utilisant un système de suspension de poids, la triade portale est uniquement manipulé une fois pendant toute laintervention chirurgicale, ce qui provoque beaucoup moins de dégâts au niveau des lobes hépatiques. En outre, pas de congestion hépatique ou intestinale se produit avec cette technique. Plus un traumatisme tissulaire se produit par suppression et remplacement des navires pinces, surtout avec une nouvelle application de la pince pendant les cycles de l'ischémie pendant plusieurs comme un préconditionnement ischémique. L'utilisation de la pendaison de poids qui sont dans un endroit éloigné du tissu hépatique, d'après nos observations, offre l'avantage de l'occlusion fiable tout en évitant le traumatisme tissulaire due à la manipulation des lobes du foie par réapplication d'une pince. Pris dans leur ensemble, la présente étude fournit la faisabilité du système de suspension de poids pour le portail triade d'occlusion pendant l'ischémie, ce qui minimise la variabilité et les limites associées à de serrage. Ainsi, cette technique pourrait être d'intérêt pour les enquêteurs d'autres qui considèrent étudier l'ischémie hépatique.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Les présentes études ont été soutenus par des instituts des États-Unis National de la Santé de subvention R01-HL092188, R01-DK083385 et R01HL098294, et la Fondation pour l'éducation anesthésie et de la Recherche (FAER) Subventions à HKE et un DFG (Deutsche Forschungsgemeinschaft) de bourses de recherche (GR2121/1- 1) et l'American Heart Association à Grant AG.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Sodium Pentobarbital (Fatal Plus) | Vortech Pharmaceutical Ls, Ltd | V.P.L. 9372 | 4 mg/mL in saline |
| Suture, Prolene 8.0 | Ethicon, USA | M8739 | reusable |
| dissecting microscope | Leica | n/a | consider generous working distance |
| Heating Table | Rt, Effenberger, Germany | n/a | only and single provider |
| Surgical instruments | WPI, Dumont | Forceps, needle holder | |
| Coagulator | Erbe, ICC50, Tuebingen, Germany | n/a | Different providers of coagulators |
Table 1. Specific reagents and equipment.
References
- Rook, M., Rand, E. Predictors of long-term outcome after liver transplant. Curr. Opin. Organ. Transplant. 16, 499-504 (2011).
- Henrion, J. Ischemia/reperfusion injury of the liver: pathophysiologic hypotheses and potential relevance to human hypoxic hepatitis. Acta. Gastroenterol. Belg. 63, 336-347 (2000).
- Hart, M. L., Much, C., Kohler, D. Use of a hanging-weight system for liver ischemic preconditioning in mice. Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 294, 1431-1440 (2008).
- Schneider, M., Geyte, K., Fraisl, P. Loss or silencing of the PHD1 prolyl hydroxylase protects livers of mice against ischemia/reperfusion injury. Gastroenterology. 138, 1143-1154 (2010).
- Coriat, R., Leconte, M., Kavian, N. Mangafodipir Protects against Hepatic Ischemia-Reperfusion Injury in Mice. PLoS One. 6, e27005 (2011).
- Sakai, N., Van Sweringen, H. L., Schuster, R. Receptor activator of NF-kappaB ligand (RANKL) protects against hepatic ischemia/reperfusion injury in mice. Hepatology. , (2011).
- Zhang, J., Hu, W., Xing, W. The Protective Role of CD59 and Pathogenic Role of Complement in Hepatic Ischemia and Reperfusion Injury. Am. J. Pathol. 179, 2876-2884 (2011).
- Beldi, G., Banz, Y., Kroemer, A. Deletion of CD39 on natural killer cells attenuates hepatic ischemia/reperfusion injury in mice. Hepatology. 51, 1702-1711 (2010).
- Hart, M. L., Much, C., Gorzolla, I. C. Extracellular adenosine production by ecto-5′-nucleotidase protects during murine hepatic ischemic preconditioning. Gastroenterology. 135, 1739-1750 (2008).
- Beraza, N., Ludde, T., Assmus, U., Roskams, T., Vander Borght, S., Trautwein, C. Hepatocyte-specific IKK gamma/NEMO expression determines the degree of liver injury. Gastroenterology. 132, 2504-2517 (2007).
- Lentsch, A. B. Activation and function of hepatocyte NF-kappaB in postischemic liver injury. Hepatology. 42, 216-218 (2005).
- Luedde, T., Assmus, U., Wustefeld, T. Deletion of IKK2 in hepatocytes does not sensitize these cells to TNF-induced apoptosis but protects from ischemia/reperfusion injury. J. Clin. Invest. 115, 849-859 (2005).
- Kapitsinou, P. P., Liu, Q., Unger, T. L. Hepatic HIF-2 regulates erythropoietic responses to hypoxia in renal anemia. Blood. , (2010).
