استخدام نظام اعدام الوزن لالإسكيمية الكبد في الفئران
Summary
أنشأنا نموذجا رواية الفئران لنظام الوزن شنقا لبوابة ثالوث انسداد. قد يكون هذا الأسلوب مفيدا لإجراء تحقيقات في المستقبل من نقص التروية في نماذج الفئران كبدي.
Abstract
يمكن إصابة الكبد الحاد بسبب نقص التروية تحدث خلال الإجراءات السريرية عدة مثل زرع الكبد، والكبد استئصال ورم أو إصلاح الصدمة ويمكن أن يؤدي إلى فشل الكبد التي لديها ارتفاع معدل الوفيات 1-2. وأصبحت دراسات الفئران ولذلك من نقص تروية الكبد حقل مهم للبحث عن طريق توفير الفرصة للاستفادة من دراسات الدوائية والوراثية 3-9. على وجه التحديد، والفئران مشروط مع حذف أنسجة معينة من الجين (لجنة المساواة العرقية، flox النظام) تقديم نظرة ثاقبة لدور البروتينات في أنسجة معينة 10-13. بسبب صعوبة التقنية المرتبطة لقط يدويا ثالوث بوابة في الفئران، وأجرينا تقييم منهجي باستخدام نظام اعدام الوزن عن انسداد ثالوث البوابة التي وصفت من قبل 3. باستخدام نظام اعدام الوزن نضع الخيط حول الفرع الأيسر من ثالوث المدخل دون أن تسبب أي ضرر للفصوص الكبد، منذ أيضايمكن خيرة المشابك متاح يسبب تلف الأنسجة الكبدية بسبب موقع قريب من أنسجة الكبد في الأوعية. علاوة على ذلك، لا يزال perfused فرع حق ثالوث كبدي وبالتالي لا يحدث احتقان في الامعاء مع هذه التقنية كما تدفق الدم الى فصوص الكبد هو الحفاظ على حق. وعلاوة على ذلك، يتم التلاعب بها سوى مرة واحدة طوال ثالوث بوابة الإجراء الجراحي بأكمله. ونتيجة لذلك، مثل الإجراءات السابقة للتكييف، مع أوقات قصيرة من نقص التروية وضخه، لا يمكن أن يؤديها بسهولة. وكشف تقييم منهجي لهذا النموذج عن طريق أداء نقص التروية وأوقات مختلفة ضخه ارتباط وثيق من الوقت الإسكيمية كبدي مع تلف الكبد إذا ما قيست ألانين (البديل) واسبارتاتي (است) مستويات المصل الألانين 3،9. أخذت معا، وهذه الدراسات تؤكد استنساخه للغاية اصابة الكبد عند استخدام نظام اعدام الوزن لنقص تروية الكبد وضخه على فترات متقطعة. وبالتالي، قد يكون هذا الأسلوب مفيدا لمصلحة المحققين الآخرينإد في دراسات الإسكيمية الكبد في الفئران. ولذلك فإن الفيديو كليب يوفر مفصلة خطوة بخطوة وصف لهذه التقنية.
Protocol
Discussion
هذه الدراسة وصفا لأسلوب أداء الإسكيمية في نموذج الفئران باستخدام نظام اعدام الوزن عن انسداد ثالوث كبدي بوابة اليسار. وينبغي على الرغم من أنها وسيلة سهلة لتعلم أن تؤخذ في المزالق التالية في الاعتبار. وهناك خطأ شائع جدا في البداية عبارة عن غرزة العميق الذي يتضمن الثالوث بوابة والوريد الأجوف. فإن معدل التنفس والقلب وتبطئ في غضون 15 دقيقة نظرا لمقاومة زيادة والنقصان في عودة الدم الى القلب مما يؤدي إلى الموت في وقت مبكر من الفئران. أفضل وسيلة لمنع وبما فيها من الوريد الأجوف هو في توطين الوريد الأجوف قبل غرزة من خلال عقد الفصوص حق إلى أسفل مع الملقط. مسألة هامة أخرى هي أن الأوزان ليست لالثقيلة التي يمكن أن تؤدي إلى الكثير من الضغط على المحاكمة بوابة اليسار واليمين الذي توقف أيضا تدفق الدم الى فصوص حق. ولذلك ينبغي أن يتم ضبط كمية من الماء في قوارير إيبندورف لوزن الماوس وقيجب أن يوضع أصحاب uture بشكل أقصى من موقع غرزة. على العكس إذا لم يتم الأوزان هي انخفاض ضغط الدم توقفت تماما. كل الأخطاء يمكن اكتشافها بسهولة من قبل تغير لون إضافي إلى شاحب من الفص الأيمن أو عدم كفاية تغير لونها من الفص المتوسط واليسار، على التوالي. ولذلك ينبغي أن تسيطر على تغير لون الكبد بعد تطبيق الأوزان كل 10 دقائق. تعقيد آخر هو مشترك الجراحية مما اسفر عن اصابة الكبد مع الإبرة. ولذلك ينبغي عقد الفصوص حق إلى أسفل مع ملقط لطيف بحيث يمكن لرأس الإبرة ينظر اليه بسهولة، والتي اتخذت مع صاحب إبرة. إذا ما اتخذت هذه المزالق في البداية في الاعتبار نظام اعدام الوزن عن نقص التروية كبدي يوفر اصابة استنساخه للغاية نظرا لنقص التروية عن طريق التقليل من تقلب تلف الكبد المرتبطة لقط من ثالوث المدخل. باستخدام نظام اعدام الوزن، ويتم التلاعب بها فقط ثالوث بوابة مرة في جميع أنحاء كاملإجراء العمليات الجراحية، مما تسبب في أضرار أقل إلى حد كبير في فصوص الكبد. وبالإضافة إلى ذلك، لا احتقان الكبد أو الأمعاء يحدث مع هذه التقنية. أكثر صدمة الأنسجة يحدث عن طريق إزالة واستبدال المشابك السفينة، وخصوصا مع إعادة استخدام المشبك خلال دورات متعددة مثل نقص التروية الدماغية خلال شروط مسبقة. استخدام الأوزان المعلقة التي هي في مكان بعيد من أنسجة الكبد، وفقا لملاحظاتنا، ويوفر ميزة من انسداد يمكن الاعتماد عليها في حين منع الصدمة الأنسجة بسبب التلاعب في فصوص الكبد عن طريق إعادة استخدام المشبك. أخذت معا، فإن الدراسة الحالية تقدم دراسة الجدوى للنظام اعدام الوزن لبوابة ثالوث انسداد خلال نقص التروية، والتقليل من التفاوت والقيود المرتبطة تحامل. وبالتالي قد تكون هذه التقنية ذات الاهتمام بالنسبة للمحققين آخرين في دراسة نقص التروية كبدي.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
ودعمت هذه الدراسات موجودة من قبل المعاهد الوطنية بالولايات المتحدة منحة الصحة R01-HL092188، R01-DK083385 وR01HL098294، ومؤسسة للتعليم التخدير والبحوث (FAER) يمنح إلى HKE و(دويتشه Forschungsgemeinschaft) DFG بحوث زمالة (GR2121/1- 1)، وجمعية القلب الأميركية جرانت إلى AG.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Sodium Pentobarbital (Fatal Plus) | Vortech Pharmaceutical Ls, Ltd | V.P.L. 9372 | 4 mg/mL in saline |
| Suture, Prolene 8.0 | Ethicon, USA | M8739 | reusable |
| dissecting microscope | Leica | n/a | consider generous working distance |
| Heating Table | Rt, Effenberger, Germany | n/a | only and single provider |
| Surgical instruments | WPI, Dumont | Forceps, needle holder | |
| Coagulator | Erbe, ICC50, Tuebingen, Germany | n/a | Different providers of coagulators |
Table 1. Specific reagents and equipment.
References
- Rook, M., Rand, E. Predictors of long-term outcome after liver transplant. Curr. Opin. Organ. Transplant. 16, 499-504 (2011).
- Henrion, J. Ischemia/reperfusion injury of the liver: pathophysiologic hypotheses and potential relevance to human hypoxic hepatitis. Acta. Gastroenterol. Belg. 63, 336-347 (2000).
- Hart, M. L., Much, C., Kohler, D. Use of a hanging-weight system for liver ischemic preconditioning in mice. Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 294, 1431-1440 (2008).
- Schneider, M., Geyte, K., Fraisl, P. Loss or silencing of the PHD1 prolyl hydroxylase protects livers of mice against ischemia/reperfusion injury. Gastroenterology. 138, 1143-1154 (2010).
- Coriat, R., Leconte, M., Kavian, N. Mangafodipir Protects against Hepatic Ischemia-Reperfusion Injury in Mice. PLoS One. 6, e27005 (2011).
- Sakai, N., Van Sweringen, H. L., Schuster, R. Receptor activator of NF-kappaB ligand (RANKL) protects against hepatic ischemia/reperfusion injury in mice. Hepatology. , (2011).
- Zhang, J., Hu, W., Xing, W. The Protective Role of CD59 and Pathogenic Role of Complement in Hepatic Ischemia and Reperfusion Injury. Am. J. Pathol. 179, 2876-2884 (2011).
- Beldi, G., Banz, Y., Kroemer, A. Deletion of CD39 on natural killer cells attenuates hepatic ischemia/reperfusion injury in mice. Hepatology. 51, 1702-1711 (2010).
- Hart, M. L., Much, C., Gorzolla, I. C. Extracellular adenosine production by ecto-5′-nucleotidase protects during murine hepatic ischemic preconditioning. Gastroenterology. 135, 1739-1750 (2008).
- Beraza, N., Ludde, T., Assmus, U., Roskams, T., Vander Borght, S., Trautwein, C. Hepatocyte-specific IKK gamma/NEMO expression determines the degree of liver injury. Gastroenterology. 132, 2504-2517 (2007).
- Lentsch, A. B. Activation and function of hepatocyte NF-kappaB in postischemic liver injury. Hepatology. 42, 216-218 (2005).
- Luedde, T., Assmus, U., Wustefeld, T. Deletion of IKK2 in hepatocytes does not sensitize these cells to TNF-induced apoptosis but protects from ischemia/reperfusion injury. J. Clin. Invest. 115, 849-859 (2005).
- Kapitsinou, P. P., Liu, Q., Unger, T. L. Hepatic HIF-2 regulates erythropoietic responses to hypoxia in renal anemia. Blood. , (2010).
