A utilização de uma suspensão do sistema de peso para isquemia hepática em ratos
Summary
Nós estabelecemos um novo modelo murino de um sistema de peso pendurado por isquemia hepática. Esta técnica pode ser útil para futuras investigações de isquemia em modelos murinos hepáticas.
Abstract
Lesão hepática aguda por isquemia pode ocorrer durante diversos procedimentos clínicos de transplante de fígado, por exemplo, a ressecção do tumor hepático ou reparação trauma e pode resultar em insuficiência hepática, que tem uma alta taxa de mortalidade 1-2. Portanto estudos murino de isquemia hepática têm se tornado um importante campo de pesquisa, proporcionando a oportunidade de utilizar estudos farmacológicos e genéticos 3-9. Especificamente, os camundongos com deleção condicionais tecido específico de um gene (CRE, Flox sistema) fornecer insights sobre o papel de proteínas em tecidos específicos 10-13. Devido à dificuldade técnica associada com manualmente aperto da tríade portal em ratos, foi realizada uma avaliação sistemática utilizando uma suspensão do sistema de peso-para o portal de oclusão tríade que foi previamente descrito 3. Ao utilizar uma suspensão do sistema de peso que se coloca um sutura em torno do ramo esquerdo da tríade portal sem causar qualquer dano para os lobos hepáticos, uma vez que também amais finos disponíveis braçadeiras pode causar danos no tecido hepático, devido à localização perto do tecido do fígado para os vasos. Além disso, o ramo direito da tríade hepática ainda é perfundido, portanto, nenhuma congestão intestinal ocorre com esta técnica como o fluxo sanguíneo para os lobos hepáticos direito é preservado. Além disso, a tríade portal é apenas uma vez manipulado durante todo o procedimento cirúrgico. Como resultado, os procedimentos de procura de pré-condicionamento, com tempos curtos de isquemia e reperfusão, pode ser facilmente executada. Uma avaliação sistemática do modelo, realizando isquemia diferente e os tempos de reperfusão revelaram uma estreita correlação do tempo de isquemia hepática com lesão hepática medida pela alanina (ALT) e aspartato (AST) aminotransferases níveis séricos 3,9. Tomados em conjunto, esses estudos confirmam lesão hepática altamente reprodutível quando se utiliza o sistema de enforcamento peso para isquemia e reperfusão hepática intermitente. Assim, esta técnica pode ser útil para o interesse outros investigadoresed em estudos de fígado isquemia em ratinhos. Por conseguinte, o clipe de vídeo fornece uma descrição passo-a-passo detalhada desta técnica.
Protocol
Discussion
O presente estudo descreve uma técnica de realização de isquemia num modelo murino, utilizando uma suspensão do sistema de peso para a oclusão da esquerda tríade hepática portal. Embora seja um método fácil para aprender as armadilhas que se seguem devem ser tidos em conta. Um erro muito comum no início é um ponto de profundidade, que inclui a tríade portal e da veia cava. A taxa de respiração e de coração irá abrandar no prazo de 15 minutos, devido ao aumento da resistência e da diminuição no retorno do sangue ao coração, resultando em morte precoce um dos ratinhos. A melhor maneira de impedir que o incluindo da veia cava é localizar a veia cava antes do ponto mantendo os lobos direito para baixo com um fórceps. Outra questão importante é que os pesos não são pesados o que pode resultar em muito estresse sobre o julgamento portal esquerda e direita que também interrompe o fluxo sanguíneo para os lobos direito. Por conseguinte, a quantidade de água na frascos Eppendorf deve ser ajustada para o peso do rato eo sdetentores RÓXIMOS deve ser colocada distalmente a partir da localização do ponto. No lado oposto, se os pesos são a baixa pressão sanguínea não é completamente interrompido. Ambos os erros são facilmente detectáveis por uma mudança de cor adicional para pálido do lobo direito ou mudança de cor insuficiente dos lobos mediano e esquerdo, respectivamente. Por conseguinte, a mudança de cor hepática após a aplicação dos pesos deve ser controlada a cada 10 minutos. Outra complicação comum cirúrgica é o ferindo do fígado com a agulha. Por conseguinte, os lobos direito deve ser mantido para baixo com um fórceps brandas de modo que a ponta da agulha pode ser facilmente vistos e tomado com um suporte de agulha. Se estas armadilhas no início são tidos em conta a suspensão do sistema de peso-para isquemia hepática fornece uma lesão altamente reprodutível devido à isquemia, minimizando a variabilidade de danos no fígado associado com aperto da tríade portal. Ao utilizar uma suspensão do sistema de peso, a tríade portal é apenas manipulado uma vez ao longo de todoprocedimento cirúrgico, causando significativamente menos danos para os lobos hepáticos. Além disso, nenhum congestão hepática ou intestinal ocorre com esta técnica. Trauma mais tecido ocorre por remoção e substituição de braçadeiras de navios, especialmente com reaplicação do grampo durante os ciclos de isquemia múltiplos como durante o pré-condicionamento isquêmico. O uso de pesos que são penduradas em um local remoto a partir do tecido do fígado, de acordo com as nossas observações, proporciona a vantagem de oclusão fiável, evitando trauma dos tecidos devido à manipulação dos lobos hepáticos por reaplicação de uma braçadeira. Tomados em conjunto, o presente estudo fornece viabilidade do sistema de enforcamento peso para oclusão da tríade portal durante a isquemia, minimizando a variabilidade e limitações associadas com aperto. Assim, esta técnica pode ser de interesse para outros pesquisadores que consideram estudando isquemia hepática.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Os estudos atuais foram apoiadas pela United States National Institutes of Health concessão R01-HL092188, R01-DK083385 e R01HL098294, e Fundação para a Educação Anestesia e Pesquisa (FAER) Dá para HKE e um DFG (Deutsche Forschungsgemeinschaft) Bolsa de Investigação (GR2121/1- 1) e American Heart Association Grant para AG.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Sodium Pentobarbital (Fatal Plus) | Vortech Pharmaceutical Ls, Ltd | V.P.L. 9372 | 4 mg/mL in saline |
| Suture, Prolene 8.0 | Ethicon, USA | M8739 | reusable |
| dissecting microscope | Leica | n/a | consider generous working distance |
| Heating Table | Rt, Effenberger, Germany | n/a | only and single provider |
| Surgical instruments | WPI, Dumont | Forceps, needle holder | |
| Coagulator | Erbe, ICC50, Tuebingen, Germany | n/a | Different providers of coagulators |
Table 1. Specific reagents and equipment.
References
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