L'uso di una Volante peso Sistema di Ischemia fegato nei topi
Summary
Abbiamo stabilito un nuovo modello murino di un sistema di peso appeso per il portale triade occlusione. Questa tecnica può essere utile per future di ischemia in modelli murini epatiche.
Abstract
Danno epatico acuto dovuto a ischemia può verificarsi durante una serie di procedure cliniche di trapianto ad esempio il fegato, tumore resezione epatica o la riparazione del trauma e può portare a insufficienza epatica che ha un alto tasso di mortalità 1-2. Pertanto gli studi murini di ischemia epatica sono diventati un importante campo di ricerca, fornendo l'opportunità di utilizzare studi farmacologici e genetici 3-9. In particolare, i topi condizionali con delezione tessuto-specifica di un gene (CRE, flox sistema) fornire indicazioni sul ruolo delle proteine nei tessuti particolari 10-13. A causa delle difficoltà tecniche associate manualmente serraggio della triade portale in topi, abbiamo eseguito una valutazione sistematica utilizzando un pensile peso sistema di occlusione triade portale che è stato precedentemente descritto 3. Utilizzando un pensile peso del sistema mettiamo una sutura intorno al ramo sinistro della triade portale senza causare danni ai lobi epatici, dal momento che anche ilmigliori disponibili morsetti può causare danni ai tessuti epatica a causa della vicinanza del tessuto epatico ai vasi. Inoltre, il ramo di destra della triade epatica è ancora perfuso congestione intestinale quindi non si verifica con questa tecnica, come il flusso di sangue ai lobi epatici destro è conservato. Inoltre, la terna portale viene manipolato sola volta durante tutta la procedura chirurgica. Come risultato, come procedure di pre-condizionamento, con brevi tempi di ischemia e riperfusione, può essere eseguita facilmente. Valutazione sistematica di questo modello eseguendo diversi e tempi di ischemia riperfusione ha rivelato una stretta correlazione di tempo ischemia epatica con danni al fegato come misurato da alanina (ALT) e aspartato (AST), i livelli sierici di transaminasi 3,9. Presi insieme, questi studi confermano danno epatico altamente riproducibili quando si utilizza il pensile peso sistema di ischemia e di riperfusione epatica intermittente. Così, questa tecnica può essere utile per altre interesse investigatorinegli studi ed ischemia del fegato nei topi. Pertanto il video clip fornisce una descrizione dettagliata della descrizione dettagliata di questa tecnica.
Protocol
Discussion
Il presente studio descrive una tecnica di esecuzione ischemia in un modello murino utilizzando un pensile peso sistema di occlusione della triade sinistra epatica portale. Anche se è un modo semplice per imparare le insidie seguenti dovrebbero essere presi in considerazione. Un errore molto comune all'inizio è un punto profondo che comprende il portale triade e la vena cava. La frequenza respiratoria e cardiaca rallenterà entro 15 minuti a causa della maggiore resistenza e la diminuzione ritorno del sangue al cuore con conseguente morte prematura dei topi. Il modo migliore per prevenire l'compreso della vena cava è quello di localizzare la vena cava prima che il punto per tenere i lobi destro verso il basso con una pinza. Un altro aspetto importante è che i pesi non sono pesanti che possono provocare troppo stress sul processo portale sinistro e destro che si ferma anche il flusso di sangue ai lobi giuste. Pertanto la quantità di acqua nel flaconcini Eppendorf deve essere regolata al peso del mouse e la stitolari FUTURO deve essere posizionato distalmente dalla posizione del punto. Al contrario se i pesi sono a bassa pressione sanguigna non è completamente fermo. Entrambi gli errori sono facilmente riconoscibili da un cambiamento di colore aggiuntivo pallido del lobo destro o cambiamento di colore insufficiente dei lobi mediani e di sinistra, rispettivamente. Pertanto, il cambiamento di colore epatica dopo l'applicazione dei pesi dovrebbe essere controllato ogni 10 minuti. Un'altra complicazione comune chirurgica è il ferimento del fegato con l'ago. Pertanto i lobi diritto deve essere premuto con una pinza blande in modo che la punta dell'ago può essere facilmente visto e preso con un porta-aghi. Se queste trappole in principio sono prese in considerazione il pensile peso sistema di ischemia epatica fornisce una lesione altamente riproducibile a causa di ischemia riducendo al minimo la variabilità del danno epatico associato serraggio della triade portale. Utilizzando un sistema pensile peso, la terna portale viene manipolato sola volta durante l'interoprocedura chirurgica, causando danni molto meno ai lobi epatici. Inoltre, nessuna congestione epatica o intestinale si verifica con questa tecnica. Trauma dei tessuti più avviene rimuovendo e sostituendo i morsetti delle navi, in particolare con riapplicazione della pinza durante i cicli di ischemia più come durante precondizionamento ischemico. L'uso di appendere pesi che sono in una posizione remota dal tessuto epatico, secondo le nostre osservazioni, fornisce il vantaggio di occlusione affidabile evitando trauma tessuto dovuto alla manipolazione dei lobi epatica di reapplication di un morsetto. Considerati nel loro insieme, il presente studio fornisce fattibilità del pensile peso del sistema per il portale triade occlusione durante l'ischemia, riducendo al minimo la variabilità ei limiti associati a bloccaggio. Quindi questa tecnica potrebbe essere di interesse per altri ricercatori che considerano lo studio ischemia epatica.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Gli studi attuali sono stati sostenuti da United States National Institutes of Health-HL092188 concessione R01, R01-DK083385 e R01HL098294, e la Fondazione per l'educazione e la ricerca Anestesia (Faer) concede HKE e una (Deutsche Forschungsgemeinschaft) DFG Research Fellowship (GR2121/1- 1) e dell'American Heart Association Grant per AG.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Sodium Pentobarbital (Fatal Plus) | Vortech Pharmaceutical Ls, Ltd | V.P.L. 9372 | 4 mg/mL in saline |
| Suture, Prolene 8.0 | Ethicon, USA | M8739 | reusable |
| dissecting microscope | Leica | n/a | consider generous working distance |
| Heating Table | Rt, Effenberger, Germany | n/a | only and single provider |
| Surgical instruments | WPI, Dumont | Forceps, needle holder | |
| Coagulator | Erbe, ICC50, Tuebingen, Germany | n/a | Different providers of coagulators |
Table 1. Specific reagents and equipment.
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