Gebruik van een hangende gewicht System voor lever ischemie in Muizen
Summary
We hebben een nieuw muizenmodel van een opknoping gewicht systeem voor het portal triade occlusie. Deze techniek kan nuttig zijn voor toekomstige onderzoeken ischemie muizen lever modellen.
Abstract
Acute leverschade als gevolg van ischemie kan optreden tijdens een aantal klinische procedures, bijvoorbeeld levertransplantatie-, lever-resectie van de tumor of trauma reparatie en kan leiden tot leverfalen, die een hoog sterftecijfer 1-2 heeft. Daarom muizen studies van lever-ischemie zijn een belangrijk gebied van onderzoek door het verstrekken van de mogelijkheid om gebruik te maken farmacologische en genetische studies 3-9. In het bijzonder, voorwaardelijke muizen met weefsel-specifieke verwijdering van een gen (CRE, Flox systeem) geven inzicht in de rol van eiwitten in bepaalde weefsels 10-13. Vanwege de technische problemen in verband met het handmatig vastzetten van de portaalsite triade in muizen, hebben we een systematische evaluatie met behulp van een hangende gewicht voor portal triade occlusie die hierboven zijn beschreven 3. Door het gebruik van een hangende gewicht systeem plaatsen we een hechting rond de linker tak van het portaal triade zonder enige schade aan de lever lobben, omdat ook debeste klemmen beschikbaar kan leiden tot lever-weefselbeschadiging als gevolg van de nauwe locatie van leverweefsel van de schepen. Bovendien is de juiste tak van de lever triade dus nog een doorbloed geen intestinale congestie voordoet met deze techniek als de bloedstroom naar de juiste lever lobben behouden blijft. Verder is de poort drietal eenmaal gemanipuleerd de gehele chirurgische ingreep. Hierdoor procedures zoals voorbewerkingsfactor, met korte tijd van ischemie en reperfusie, gemakkelijk kan worden uitgevoerd. Systematische evaluatie van dit model door het uitvoeren van verschillende ischemie en reperfusie keer bleek een nauwe samenhang van lever ischemie tijd met beschadiging van de lever zoals gemeten door alanine (ALT) en aspartaat (AST) aminotransferase serumspiegels 3,9. Al deze onderzoeken bevestigen zeer reproduceerbare leverbeschadiging bij gebruik van de ophanging-gewicht voor lever-ischemie en reperfusie onderbroken. Zo kan deze techniek kan ook in andere onderzoekers belanged in de lever ischemie studies in muizen. Daarom videoclip een gedetailleerde stap voor stap beschrijving van deze techniek.
Protocol
Discussion
Deze studie beschrijft een techniek van het uitvoeren van ischemie in een muismodel met behulp van een ophanging-gewicht voor occlusie van de linker lever portal triade. Hoewel het een eenvoudige methode te leren de volgende problemen worden gehouden. Een veel voorkomende fout in het begin is een diepe steek, die het portaal triade en de vena cava omvat. De ademhaling en de hartslag vertraagt binnen 15 minuten, vanwege de verhoogde weerstand en de daling van terug te keren bloed naar het hart leidt tot een vroege dood van de muizen. De beste manier om de opneming van de vena cava te voorkomen, is het lokaliseren van de vena cava voordat de steek door te oordelen de juiste lobben neer met een pincet. Een ander belangrijk punt is dat de gewichten niet te zwaar wat kan leiden tot te veel stress op de linker-en rechter-portaal proces dat ook de bloedtoevoer stopt aan de rechterkant lobben. Daarom is de hoeveelheid water in de Eppendorfbuisjes moet worden aangepast aan de muis gewicht en de sOEKOMSTIGE houders moeten distaal geplaatst worden vanaf de steek locatie. Aan de andere als de gewichten zijn lage bloeddruk niet geheel gestopt. Beide fouten gemakkelijk door een extra kleurverandering bleek het recht lob of onvoldoende kleurverandering van de mediaan en linker lobben respectievelijk. Daarom is de lever kleur veranderen na de toepassing van de gewichten moeten worden gecontroleerd om de 10 minuten. Een andere veel voorkomende chirurgische complicatie is het verwonden van de lever met de naald. Het recht lobben worden vastgehouden met een neutrale tang zodat het uiteinde van de naald kan gemakkelijk worden gezien en die met een naaldhouder. Indien deze valkuilen in het begin rekening wordt gehouden met de ophanging gewicht voor lever ischemie is een zeer reproduceerbare letsel door ischemie door het minimaliseren van variabiliteit leverbeschadiging verbonden klemmen van het portaal triade. Door een ophanging gewicht systeem wordt het portaal drietal eenmaal gemanipuleerd de gehelechirurgische ingreep, waardoor minder schade aan de lever lobben. Bovendien is geen lever of darm congestie optreedt met deze techniek. Meer weefsel trauma gebeurt door het verwijderen en terugplaatsen schip klemmen, vooral met hernieuwde toepassing van de klem tijdens meerdere cycli ischemie, zoals tijdens de ischemische preconditionering. Het gebruik van opknoping gewichten die in een afgelegen locatie van het leverweefsel, volgens onze waarnemingen, biedt het voordeel van betrouwbare occlusie, terwijl het voorkomen weefsel trauma als gevolg van manipulatie van de lever lobben door hernieuwde toepassing van een klem. Al met al, de huidige studie biedt haalbaarheid van het hangende gewicht voor portal triade occlusie tijdens ischemie, het minimaliseren van de variabiliteit en de beperkingen die verbonden zijn met klemmen. Dus deze techniek interessant kunnen zijn voor andere onderzoekers die van mening bestuderen van lever-ischemie.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
De huidige studies werden ondersteund door de Amerikaanse National Institutes of Health subsidie R01-HL092188, R01-DK083385 en R01HL098294, en de Stichting voor Anesthesie Onderwijs en Onderzoek (FAER) subsidies voor de HKE en DFG (Deutsche Forschungsgemeinschaft) Research Fellowship (GR2121/1- 1) en de American Heart Association Grant aan AG.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Sodium Pentobarbital (Fatal Plus) | Vortech Pharmaceutical Ls, Ltd | V.P.L. 9372 | 4 mg/mL in saline |
| Suture, Prolene 8.0 | Ethicon, USA | M8739 | reusable |
| dissecting microscope | Leica | n/a | consider generous working distance |
| Heating Table | Rt, Effenberger, Germany | n/a | only and single provider |
| Surgical instruments | WPI, Dumont | Forceps, needle holder | |
| Coagulator | Erbe, ICC50, Tuebingen, Germany | n/a | Different providers of coagulators |
Table 1. Specific reagents and equipment.
References
- Rook, M., Rand, E. Predictors of long-term outcome after liver transplant. Curr. Opin. Organ. Transplant. 16, 499-504 (2011).
- Henrion, J. Ischemia/reperfusion injury of the liver: pathophysiologic hypotheses and potential relevance to human hypoxic hepatitis. Acta. Gastroenterol. Belg. 63, 336-347 (2000).
- Hart, M. L., Much, C., Kohler, D. Use of a hanging-weight system for liver ischemic preconditioning in mice. Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 294, 1431-1440 (2008).
- Schneider, M., Geyte, K., Fraisl, P. Loss or silencing of the PHD1 prolyl hydroxylase protects livers of mice against ischemia/reperfusion injury. Gastroenterology. 138, 1143-1154 (2010).
- Coriat, R., Leconte, M., Kavian, N. Mangafodipir Protects against Hepatic Ischemia-Reperfusion Injury in Mice. PLoS One. 6, e27005 (2011).
- Sakai, N., Van Sweringen, H. L., Schuster, R. Receptor activator of NF-kappaB ligand (RANKL) protects against hepatic ischemia/reperfusion injury in mice. Hepatology. , (2011).
- Zhang, J., Hu, W., Xing, W. The Protective Role of CD59 and Pathogenic Role of Complement in Hepatic Ischemia and Reperfusion Injury. Am. J. Pathol. 179, 2876-2884 (2011).
- Beldi, G., Banz, Y., Kroemer, A. Deletion of CD39 on natural killer cells attenuates hepatic ischemia/reperfusion injury in mice. Hepatology. 51, 1702-1711 (2010).
- Hart, M. L., Much, C., Gorzolla, I. C. Extracellular adenosine production by ecto-5′-nucleotidase protects during murine hepatic ischemic preconditioning. Gastroenterology. 135, 1739-1750 (2008).
- Beraza, N., Ludde, T., Assmus, U., Roskams, T., Vander Borght, S., Trautwein, C. Hepatocyte-specific IKK gamma/NEMO expression determines the degree of liver injury. Gastroenterology. 132, 2504-2517 (2007).
- Lentsch, A. B. Activation and function of hepatocyte NF-kappaB in postischemic liver injury. Hepatology. 42, 216-218 (2005).
- Luedde, T., Assmus, U., Wustefeld, T. Deletion of IKK2 in hepatocytes does not sensitize these cells to TNF-induced apoptosis but protects from ischemia/reperfusion injury. J. Clin. Invest. 115, 849-859 (2005).
- Kapitsinou, P. P., Liu, Q., Unger, T. L. Hepatic HIF-2 regulates erythropoietic responses to hypoxia in renal anemia. Blood. , (2010).
