Die Verwendung eines Hanging-Gewicht-System für Leberischämie in Mäuse

Allgemeine Bemerkungen. Alle Arbeiten sind unter einer aufrechten Binokular (Leica) und mit Hilfe eines chirurgischen Koagulator durchgeführt werden. Die Mäuse in den experimentellen und Schein-Gruppen sollten im Alter und Gewicht angepasst werden, um die Vergleichbarkeit der Ergebnisse zu gewährleisten. Temperatur, Blutdruck, Anästhesie und Flüssigkeitszufuhr sollte stabil sein und überwacht während des gesamten Experiments. 1. Anästhesie und Chirurgie C57BL / 6 Mäusen sollte innerhalb einer Altersspanne von 10 bis 16 Wochen betragen und sie sollten geschlechtsspezifische abgestimmt in den jeweiligen Gruppen sein. Anesthetize Mäuse mit Natrium-Pentobarbital (70 mg / kg Körpergewicht ip) und Aufrechterhaltung einer Narkose mit ca. 10 mg / kg / h Natriumpentobarbital. Eine Überdosierung kann deutlich den Blutdruck senken und somit können die Ergebnisse verändern. Ort Mäusen auf eine Temperatur gesteuerte beheizte Tisch (RT, Effenberg, München, Deutschland) mit einer rektalen Sonde zu einem Thermometer thermischer Rückführung befestigtSteuerung der Körpertemperatur bei 37 ° C zu halten Platz Mäuse in Rückenlage auf dem OP-Tisch, mit den oberen und unteren Enden an dem Tisch mit entfernbaren Klebeband. Im Falle des Überlebens Experimente richtige aseptische Techniken einschließlich Clipping von Haaren, Desinfektion der Haut mit Iodophoren (zB Betadine), sterile Handhabung der Instrumente autoklaviert und mit Masken eine sterile Handschuhe für den Chirurgen erforderlich. 2. Portal Triad Occlusion Bedecken Sie den Einschnitt mit Mineralöl um das Einatmen von Maus Haare durch Schneiden der Haut und verhindert so das Risiko von Allergien Maus Haare zu verhindern. Führen Mittellinie Laparotomie und Inzision der Linea alba bis zum oberen Ende, so dass Sie leicht entlarven die Leber. Wenn möglich, führen Sie den Schnitt mit einer Koagulationselektrode (Erbe, ICC50, Tübingen, Deutschland), um eine Blutung zu verhindern. Legen Sie die Heiz-Tabelle mit der Maus in der Lage, dass der Schwanz Richtung istTed für den Chirurgen. Diese Position bietet Ihnen die beste Einstellung zu lokalisieren und den Dreiklang, um die Naht zu platzieren. Anschließend verdrängt man das Darm auf der rechten Seite mit einem feuchten Wattestäbchen Wattestäbchen, das Portal Dreiklang aussetzen. Geringfügig verschieben den Median und linken Lappen in Richtung der Membran und der rechte Lappen in Richtung Darm. Das gibt Ihnen einen klaren Blick auf das Portal Dreiklang oberhalb der Bifurkation der rechten, mittleren / linken Lappen. Überprüfen Sie sorgfältig das Portal Dreiklang und halten Sie die rechte Lappen sanft mit einer Pinzette fad. Das gibt Ihnen eine schöne Aussicht auf dem linken Portal Dreiklang. Einmal visuell festgestellten Ort die Nadel mit dem Faden (7/0 Nylonnaht; Ethicon, Norderstedt, Deutschland) über einen Nadelhalter unter dem linken Portal Dreiklang, einschließlich der Leberarterie, Lebervene, und Gallengang von der linken auf die rechte Seite der Maus. Der Stich muss eng sein, unter dem Dreiklang. Ein tiefer Stich kann zu Verletzungen der Vena Vaca unterlegen, die unter befindetder Dreiklang. Deshalb halten Sie die rechte Leberlappen nach unten mit der Zange, um die Vena Cava, bevor Sie den Stich zu identifizieren. Nehmen Sie die Spitze der Nadel auf der rechten Seite mit einer Pinzette heraus und ziehen Sie sie vorsichtig aus der Leber Bereich ohne Verletzung der Leber. An jedes Ende des Fadens ein Eppendorf-Röhrchen (etwa 3 g, mit Wasser gefüllt) und stellen sowohl Fadenenden über Nahtmaterial Halter. Platzieren Sie die Fadenhalter distal von der Masche, so dass die Naht nicht mit der rechten Triade stören. Durch die Anwendung der Gewichtungen der Triade wird sofort verschlossen, wodurch Unterbrechung der Blutversorgung des linken und mittleren Lappen der Leber. Erfolgreiche Okklusion kann leicht durch visuelle Inspektion der blasse Blanchieren der ischämischen Lappen bestätigt werden. Im Gegensatz dazu die Änderung der Farbe sofort verschwindet, wenn die Gewichte hängen von den Polen freigesetzt werden und die Leber reperfundiert. Diese partielle hepatische Ischämie-Modell vermeidet Staus mesenterialen durch die Erhaltung Blood Strömung zu den rechten Leberlappen. Ersetzen Sie den Darm in die Bauchhöhle. Halten Sie die Leber und Darm warm mit einem feuchten Wattestäbchen mit Wasser bei 37,0 ° C eingetaucht Neben der Körpertemperatur stabil zu halten decken die Mäuse, die mit handelsüblichen Frischhaltefolie nach Beendigung der Operation. Führen Ischämie nach experimentellen Protokoll erforderlich. Nach einer definierten Zeit Release Ischämie und Reperfusion die Gewichte der mittleren und linken Leberlappen wird sofort gestartet. Diese Technik erlaubt die Herstellung reversible Ischämie bei Mäusen. Wenn keine weiteren Ischämie Zeiten durchgeführt werden, entfernen Sie vorsichtig die Naht. In etwa 400 ul Natriumchlorid in die Bauchhöhle 15 Minuten vor und unmittelbar nach der Reperfusion. Weiter zur Flüssigkeit ersetzen alle 30 Minuten in einer Menge von 100 ul zu Flüssigkeitsverlust während der Reperfusion zu kompensieren. Für das Überleben Experimente die OP-Wunde wird geschlossen mit fortlaufenden Naht des Muskels Wand und die Haut with einer 4/0 Nahtmaterial. 3. Änderungen in Leberperfusion Die folgenden Outcome-Parameter werden empfohlen, um Leberschäden nach hepatischer Ischämie zu bestimmen: Bestimmen Sie Leberenzyme (zB ALT, AST) und Leberhistologie (H & E Färbung) folgende Leber Ischämie und Reperfusion 3,9. Abbildung 1 Modell eines Hanging-Gewicht-System für Leberischämie:. Eine hängende Gewicht System wurde eingerichtet, um Leber-Ischämie des linken und Mittellappen 3 zu induzieren. (A) Deshalb ist die caudatus und rechten Lappen wurden vorsichtig aus dem linken Lappen getrennt. Der rechte Lappen war dann leicht verschoben, klar zu sehen das Portal Dreiklang oberhalb der Bifurkation der rechten, mittleren und linken Lappen. Der 8,0 Nylonnaht wurde unter dem linken Leber-Dreiklang platziert. (B) am Ende jedes Fadens ein kleines Gewicht (3 g Eppendorf tuBES mit Wasser gefüllt) befestigt war und angewendet werden. Hepatischer Ischämie sichtbar durch eine Farbänderung des linken und Mittellappen von rot zu verblassen. Das experimentelle Design erlaubt eine präzise Okklusion und Reperfusion des linken Leber-Dreiklang durch Anlegen und Lösen der Gewichtsbelastung. 2. Auswirkungen unterschiedlicher Leberischämie Mal auf Alanin (ALT) und Aspartat-(AST) Aminotransferase in Mäusen. Teilweise Portal Dreiklang Ischämie wurde wie angegeben (- 60 min Ischämie 0) induziert. Nach 2 Stunden Reperfusion wurden ALT (A) und AST (B) gemessen. 7 Mäuse / Gruppe – Ergebnisse sind als Mittelwert ± SE von 6 ausgedrückt. * P <0,05 im Vergleich zu 0 min Ischämie (Schein-Kontrolle).