Drosophila Hemşire Hücrelerinin Mikroenjeksiyonu: Hücre İçi Doğum Yöntemi

Published: April 30, 2023

Abstract

Kaynak: Catrina, I. E., vd. Canlı Drosophila melanogaster Yumurta Odalarında Endojen mRNA’ları Görselleştirme ve İzleme. J. Vis. Exp. (2019).

Büyük boyutları ve nispeten basit organizasyonları nedeniyle, Drosophila hemşire hücreleri canlı hücre görüntüleme çalışmaları için idealdir. Bu videoda hücrelere eksojen bileşiklerin teslimi için bir mikroenjeksiyon yöntemi açıklanmaktadır ve öne çıkan protokol, endojen mRNA transkriptlerini görselleştirmek için kullanılan moleküler işaretçiler (MB) adı verilen floresan oligonükleotid probları ile prosedürü göstermektedir.

Protocol

Bu protokol Catrina ve ark.,Canlı Drosophila melanogaster Yumurta Odalarında Endojen mRNA’ları Görselleştirme ve İzleme, J. Vis. Exp’ten alıntılanmıştır. (2019). 1. Canlı Hücre Görüntüleme için MB Tasarımı MFOLD sunucusundan(http://unafold.rna.albany.edu/?q=mfold/RNA-Folding-Form)”RNA formunu” kullanarak mRNA hedefinin ikincil yapıs?…

Materials

Spectrofluorometer Fluoromax-4 Horiba-Jobin Yvon n/a Photon counting spectrofluorometer
Quartz cuvette Fireflysci (former Precision Cells Inc.) 701MFL
Dumont #5 tweezer World Precision Instruments 501985 Thin tweezers are very important to separate out the individual egg chambers
Halocarbon oil 700 Sigma-Aldrich H8898
Cover slip No.1 22 mm x 40 mm VWR 48393-048
Dissecting microscope Leica MZ6 Leica Microsystems Inc. n/a
CO2 fruit fly anesthesia pad Genesee Scienific 59-114
Tris-HCL pH 7.5 Sigma-Aldrich 1185-53-1
Magnesium chloride Sigma-Aldrich 7791-18-6
NaCl Sigma-Aldrich 7647-14-5
Spinning disc confocal microscope Leica DMI-4000B inverted microscope equipped with Yokogawa CSU 10 spinning disc Leica Microsystems Inc. n/a
Hamamatsu C9100-13 ImagEM EMCCD camera Hamamatsu n/a
PatchMan NP 2 Micromanipulator Eppendorf Inc. 920000037
FemtoJet Microinjector Eppendorf Inc. 920010504
Injection needle: Femtotips II Eppendorf Inc. 930000043
Loading tip: 20 μL Microloader Eppendorf Inc. 930001007
Micro Cover glasses no. 1 or 1.5, 22 mm x 40 mm VWR 48393-026; 48393-172
Dry yeast Any grocery store n/a
Computer, > 20 GB RAM Although processing can be carried out on most computers, higher capabilities will increase the speed of the processing

Play Video

Cite This Article
Microinjection of Drosophila Nurse Cells: A Method of Intracellular Delivery. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20109, doi: (2023).

View Video