Büyük boyutları ve nispeten basit organizasyonları nedeniyle, Drosophila hemşire hücreleri canlı hücre görüntüleme çalışmaları için idealdir. Bu videoda hücrelere eksojen bileşiklerin teslimi için bir mikroenjeksiyon yöntemi açıklanmaktadır ve öne çıkan protokol, endojen mRNA transkriptlerini görselleştirmek için kullanılan moleküler işaretçiler (MB) adı verilen floresan oligonükleotid probları ile prosedürü göstermektedir.
Protocol
Bu protokol Catrina ve ark.,Canlı Drosophila melanogaster Yumurta Odalarında Endojen mRNA’ları Görselleştirme ve İzleme, J. Vis. Exp’ten alıntılanmıştır. (2019). 1. Canlı Hücre Görüntüleme için MB Tasarımı MFOLD sunucusundan(http://unafold.rna.albany.edu/?q=mfold/RNA-Folding-Form)”RNA formunu” kullanarak mRNA hedefinin ikincil yapıs?…
Materials
Spectrofluorometer
Fluoromax-4 Horiba-Jobin Yvon
n/a
Photon counting spectrofluorometer
Quartz cuvette
Fireflysci (former Precision Cells Inc.)
701MFL
Dumont #5 tweezer
World Precision Instruments
501985
Thin tweezers are very important to separate out the individual egg chambers
Halocarbon oil 700
Sigma-Aldrich
H8898
Cover slip No.1 22 mm x 40 mm
VWR
48393-048
Dissecting microscope
Leica MZ6 Leica Microsystems Inc.
n/a
CO2 fruit fly anesthesia pad
Genesee Scienific
59-114
Tris-HCL pH 7.5
Sigma-Aldrich
1185-53-1
Magnesium chloride
Sigma-Aldrich
7791-18-6
NaCl
Sigma-Aldrich
7647-14-5
Spinning disc confocal microscope
Leica DMI-4000B inverted microscope equipped with Yokogawa CSU 10 spinning disc Leica Microsystems Inc.
n/a
Hamamatsu C9100-13 ImagEM EMCCD camera
Hamamatsu
n/a
PatchMan NP 2 Micromanipulator
Eppendorf Inc.
920000037
FemtoJet Microinjector
Eppendorf Inc.
920010504
Injection needle: Femtotips II
Eppendorf Inc.
930000043
Loading tip: 20 μL Microloader
Eppendorf Inc.
930001007
Micro Cover glasses no. 1 or 1.5, 22 mm x 40 mm
VWR
48393-026; 48393-172
Dry yeast
Any grocery store
n/a
Computer, > 20 GB RAM
Although processing can be carried out on most computers, higher capabilities will increase the speed of the processing