Microinjección de células enfermeras de Drosophila: Un método de parto intracelular

Published: April 30, 2023

Abstract

Fuente: Catrina, I. E., et al. Visualización y seguimiento de mRNAs endógenos en cámaras de huevos Drosophila melanogaster en vivo. J. Vis. (2019).

Debido a su gran tamaño y organización relativamente simple, las células enfermeras de Drosophila son ideales para estudios de imágenes de células vivas. Este video describe un método de microinjección para la entrega de compuestos exógenos en las células, y el protocolo destacado demuestra el procedimiento con sondas de oligonucleótidos fluorescentes llamadas balizas moleculares (MBs) utilizadas para visualizar transcripciones endógenas de ARNm.

Protocol

Este protocolo se extrae de Catrina et al., Visualizando y rastreando mRNAs endógenas en cámaras de huevos Drosophila melanogaster en vivo, J. Vis. Exp. (2019). 1. Diseño de MBs para imágenes de células en vivo Doble la secuencia de ARN de destino para predecir la estructura secundaria del objetivo de ARNm utilizando el “formulario de ARN” del servidor mfold (<a href="http://unafold.rna.albany.edu/?q=mfold/RNA-Folding-Form" target="_…

Materials

Spectrofluorometer Fluoromax-4 Horiba-Jobin Yvon n/a Photon counting spectrofluorometer
Quartz cuvette Fireflysci (former Precision Cells Inc.) 701MFL
Dumont #5 tweezer World Precision Instruments 501985 Thin tweezers are very important to separate out the individual egg chambers
Halocarbon oil 700 Sigma-Aldrich H8898
Cover slip No.1 22 mm x 40 mm VWR 48393-048
Dissecting microscope Leica MZ6 Leica Microsystems Inc. n/a
CO2 fruit fly anesthesia pad Genesee Scienific 59-114
Tris-HCL pH 7.5 Sigma-Aldrich 1185-53-1
Magnesium chloride Sigma-Aldrich 7791-18-6
NaCl Sigma-Aldrich 7647-14-5
Spinning disc confocal microscope Leica DMI-4000B inverted microscope equipped with Yokogawa CSU 10 spinning disc Leica Microsystems Inc. n/a
Hamamatsu C9100-13 ImagEM EMCCD camera Hamamatsu n/a
PatchMan NP 2 Micromanipulator Eppendorf Inc. 920000037
FemtoJet Microinjector Eppendorf Inc. 920010504
Injection needle: Femtotips II Eppendorf Inc. 930000043
Loading tip: 20 μL Microloader Eppendorf Inc. 930001007
Micro Cover glasses no. 1 or 1.5, 22 mm x 40 mm VWR 48393-026; 48393-172
Dry yeast Any grocery store n/a
Computer, > 20 GB RAM Although processing can be carried out on most computers, higher capabilities will increase the speed of the processing

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Cite This Article
Microinjection of Drosophila Nurse Cells: A Method of Intracellular Delivery. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20109, doi: (2023).

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