מיקרו-ג'ינגציה של תאי אחות דרוזופילה: שיטה ללידה תאית

Published: April 30, 2023

Abstract

מקור: קטרינה, I. E., ואח ‘. הדמיה ומעקב אחר mRNAs אנדוגני ב חי Drosophila מלנוגסטר ביצה צ’יימברס. ג’יי ויס אקספ. (2019).

בשל גודלם הגדול וארגון פשוט יחסית, תאי האחות Drosophila מתאימים באופן אידיאלי למחקרי הדמיית תאים חיים. וידאו זה מתאר שיטת microinjection עבור משלוח תרכובות אקסוגני לתוך התאים, ואת הפרוטוקול בהשתתפות מדגים את ההליך עם בדיקות אוליגונוקלאוטיד פלואורסצנטי שנקרא משואות מולקולריות (MBs) המשמשים לדמיין תעתיקים mRNA אנדוגני.

Protocol

פרוטוקול זה הוא קטע מתוך קטרינה ואח ‘.,הדמיה ומעקב אחר mRNAs אנדוגני ב חי Drosophila מלנוגאסטר ביצה צ’יימברס, J. Vis. Exp. (2019). 1. עיצוב MBs להדמיית תאים חיים מקפלים את רצף RNA היעד כדי לחזות את המבנה המשני של יעד mRNA באמצעות “טופס RNA” משרת mfold (<a href="http://unafold.rna.albany.edu/?q=…

Materials

Spectrofluorometer Fluoromax-4 Horiba-Jobin Yvon n/a Photon counting spectrofluorometer
Quartz cuvette Fireflysci (former Precision Cells Inc.) 701MFL
Dumont #5 tweezer World Precision Instruments 501985 Thin tweezers are very important to separate out the individual egg chambers
Halocarbon oil 700 Sigma-Aldrich H8898
Cover slip No.1 22 mm x 40 mm VWR 48393-048
Dissecting microscope Leica MZ6 Leica Microsystems Inc. n/a
CO2 fruit fly anesthesia pad Genesee Scienific 59-114
Tris-HCL pH 7.5 Sigma-Aldrich 1185-53-1
Magnesium chloride Sigma-Aldrich 7791-18-6
NaCl Sigma-Aldrich 7647-14-5
Spinning disc confocal microscope Leica DMI-4000B inverted microscope equipped with Yokogawa CSU 10 spinning disc Leica Microsystems Inc. n/a
Hamamatsu C9100-13 ImagEM EMCCD camera Hamamatsu n/a
PatchMan NP 2 Micromanipulator Eppendorf Inc. 920000037
FemtoJet Microinjector Eppendorf Inc. 920010504
Injection needle: Femtotips II Eppendorf Inc. 930000043
Loading tip: 20 μL Microloader Eppendorf Inc. 930001007
Micro Cover glasses no. 1 or 1.5, 22 mm x 40 mm VWR 48393-026; 48393-172
Dry yeast Any grocery store n/a
Computer, > 20 GB RAM Although processing can be carried out on most computers, higher capabilities will increase the speed of the processing

Play Video

Cite This Article
Microinjection of Drosophila Nurse Cells: A Method of Intracellular Delivery. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20109, doi: (2023).

View Video