الميكروسوفيلا الخلايا الممرضة: طريقة للولادة داخل الخلايا
Published: April 30, 2023
Abstract
المصدر: كاترينا, I. E., وآخرون. تصور وتتبع mRNAs الذاتية في لايف Drosophila melanogaster البيض الغرف. ج. فيس إكسب. (2019).
نظرا لحجمها الكبير وتنظيمها البسيط نسبيا ، فإن خلايا ممرضة Drosophila مناسبة بشكل مثالي لدراسات تصوير الخلايا الحية. يصف هذا الفيديو طريقة حقن دقيق لتوصيل المركبات الخارجية إلى الخلايا ، ويوضح البروتوكول المميز الإجراء مع مسابير أوليغونوكليوتيد الفلورية التي تسمى المنارات الجزيئية (MBs) المستخدمة لتصور نسخ الحمض النووي الريبي الذاتية.
Protocol
هذا البروتوكول مقتطف من كاترينا وآخرون., تصور وتتبع mRNAs الذاتية في لايف Drosophila melanogaster البيض الدوائر, J. Vis. إكسب. (2019). 1. تصميم MBs لتصوير الخلايا الحية أضعاف تسلسل الجيش الملكي النيبالي الهدف للتنبؤ بنية الهدف مرنا الثانوية باستخدام “نموذج الجيش الملكي ا…
Materials
| Spectrofluorometer | Fluoromax-4 Horiba-Jobin Yvon | n/a | Photon counting spectrofluorometer |
| Quartz cuvette | Fireflysci (former Precision Cells Inc.) | 701MFL | |
| Dumont #5 tweezer | World Precision Instruments | 501985 | Thin tweezers are very important to separate out the individual egg chambers |
| Halocarbon oil 700 | Sigma-Aldrich | H8898 | |
| Cover slip No.1 22 mm x 40 mm | VWR | 48393-048 | |
| Dissecting microscope | Leica MZ6 Leica Microsystems Inc. | n/a | |
| CO2 fruit fly anesthesia pad | Genesee Scienific | 59-114 | |
| Tris-HCL pH 7.5 | Sigma-Aldrich | 1185-53-1 | |
| Magnesium chloride | Sigma-Aldrich | 7791-18-6 | |
| NaCl | Sigma-Aldrich | 7647-14-5 | |
| Spinning disc confocal microscope | Leica DMI-4000B inverted microscope equipped with Yokogawa CSU 10 spinning disc Leica Microsystems Inc. | n/a | |
| Hamamatsu C9100-13 ImagEM EMCCD camera | Hamamatsu | n/a | |
| PatchMan NP 2 Micromanipulator | Eppendorf Inc. | 920000037 | |
| FemtoJet Microinjector | Eppendorf Inc. | 920010504 | |
| Injection needle: Femtotips II | Eppendorf Inc. | 930000043 | |
| Loading tip: 20 μL Microloader | Eppendorf Inc. | 930001007 | |
| Micro Cover glasses no. 1 or 1.5, 22 mm x 40 mm | VWR | 48393-026; 48393-172 | |
| Dry yeast | Any grocery store | n/a | |
| Computer, > 20 GB RAM | Although processing can be carried out on most computers, higher capabilities will increase the speed of the processing |
Cite This Article
Microinjection of Drosophila Nurse Cells: A Method of Intracellular Delivery. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20109, doi: (2023).