Microinjection des cellules infirmières de Drosophila : une méthode d’accouchement intracellulaire
Published: April 30, 2023
Abstract
Source : Catrina, I. E., et coll. Visualisant et suivant les ARNM endogènes dans les chambres d’oeufs live drosophila melanogaster . J. Vis. Exp. (2019).
En raison de leur grande taille et de leur organisation relativement simple, les cellules infirmières de Drosophila conviennent parfaitement aux études d’imagerie cellulaire vivante. Cette vidéo décrit une méthode de microinjection pour l’administration de composés exogènes dans les cellules, et le protocole en vedette démontre la procédure avec des sondes oligonucléotides fluorescentes appelées balises moléculaires (MBs) utilisées pour visualiser les transcriptions endogènes de l’ARNm.
Protocol
Ce protocole est extrait de Catrina et coll.,Visualizing and Tracking Endogenous mRNAs in Live Drosophila melanogaster Egg Chambers, J. Vis. Exp. (2019). 1. Conception de MBs pour l’imagerie cellulaire en direct Pliez la séquence d’ARN cible pour prédire la structure secondaire de la cible de l’ARNm à l’aide de la « forme d’ARN » du serveur mfold <a href="http://unafold.rna.albany.edu/?q=mfold/RNA-Folding-Form" target="_bla…
Materials
| Spectrofluorometer | Fluoromax-4 Horiba-Jobin Yvon | n/a | Photon counting spectrofluorometer |
| Quartz cuvette | Fireflysci (former Precision Cells Inc.) | 701MFL | |
| Dumont #5 tweezer | World Precision Instruments | 501985 | Thin tweezers are very important to separate out the individual egg chambers |
| Halocarbon oil 700 | Sigma-Aldrich | H8898 | |
| Cover slip No.1 22 mm x 40 mm | VWR | 48393-048 | |
| Dissecting microscope | Leica MZ6 Leica Microsystems Inc. | n/a | |
| CO2 fruit fly anesthesia pad | Genesee Scienific | 59-114 | |
| Tris-HCL pH 7.5 | Sigma-Aldrich | 1185-53-1 | |
| Magnesium chloride | Sigma-Aldrich | 7791-18-6 | |
| NaCl | Sigma-Aldrich | 7647-14-5 | |
| Spinning disc confocal microscope | Leica DMI-4000B inverted microscope equipped with Yokogawa CSU 10 spinning disc Leica Microsystems Inc. | n/a | |
| Hamamatsu C9100-13 ImagEM EMCCD camera | Hamamatsu | n/a | |
| PatchMan NP 2 Micromanipulator | Eppendorf Inc. | 920000037 | |
| FemtoJet Microinjector | Eppendorf Inc. | 920010504 | |
| Injection needle: Femtotips II | Eppendorf Inc. | 930000043 | |
| Loading tip: 20 μL Microloader | Eppendorf Inc. | 930001007 | |
| Micro Cover glasses no. 1 or 1.5, 22 mm x 40 mm | VWR | 48393-026; 48393-172 | |
| Dry yeast | Any grocery store | n/a | |
| Computer, > 20 GB RAM | Although processing can be carried out on most computers, higher capabilities will increase the speed of the processing |
Cite This Article
Microinjection of Drosophila Nurse Cells: A Method of Intracellular Delivery. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20109, doi: (2023).