Микроинъекция клеток медсестры Дрозофилы: метод внутриклеточной доставки

Published: April 30, 2023

Abstract

Источник: Катрина, I. E., и др. Визуализация и отслеживание эндогенных mRNAs в Live Drosophila меланогастер яичные камеры. J. Vis. Exp. (2019).

Из-за их большого размера и относительно простой организации, Drosophila клетки медсестры идеально подходят для живых исследований изображений клеток. Это видео описывает метод микроинъекции для доставки экзогенных соединений в клетки, и рекомендуемый протокол демонстрирует процедуру с флуоресцентными олигонуклеотидными зондами, называемыми молекулярными маяками (МБ), используемыми для визуализации эндогенных транскриптов мРНК.

Protocol

Этот протокол выдержки из Катрина и др.,визуализации и отслеживания эндогенных mRNAs в Live Drosophila меланогастер яйцо камер, J. Vis. Exp. (2019). 1. Дизайн MBs для живой визуализации клеток Сложите последовательность РНК цели, чтобы предсказать вторичную структу?…

Materials

Spectrofluorometer Fluoromax-4 Horiba-Jobin Yvon n/a Photon counting spectrofluorometer
Quartz cuvette Fireflysci (former Precision Cells Inc.) 701MFL
Dumont #5 tweezer World Precision Instruments 501985 Thin tweezers are very important to separate out the individual egg chambers
Halocarbon oil 700 Sigma-Aldrich H8898
Cover slip No.1 22 mm x 40 mm VWR 48393-048
Dissecting microscope Leica MZ6 Leica Microsystems Inc. n/a
CO2 fruit fly anesthesia pad Genesee Scienific 59-114
Tris-HCL pH 7.5 Sigma-Aldrich 1185-53-1
Magnesium chloride Sigma-Aldrich 7791-18-6
NaCl Sigma-Aldrich 7647-14-5
Spinning disc confocal microscope Leica DMI-4000B inverted microscope equipped with Yokogawa CSU 10 spinning disc Leica Microsystems Inc. n/a
Hamamatsu C9100-13 ImagEM EMCCD camera Hamamatsu n/a
PatchMan NP 2 Micromanipulator Eppendorf Inc. 920000037
FemtoJet Microinjector Eppendorf Inc. 920010504
Injection needle: Femtotips II Eppendorf Inc. 930000043
Loading tip: 20 μL Microloader Eppendorf Inc. 930001007
Micro Cover glasses no. 1 or 1.5, 22 mm x 40 mm VWR 48393-026; 48393-172
Dry yeast Any grocery store n/a
Computer, > 20 GB RAM Although processing can be carried out on most computers, higher capabilities will increase the speed of the processing

Play Video

Cite This Article
Microinjection of Drosophila Nurse Cells: A Method of Intracellular Delivery. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20109, doi: (2023).

View Video