Microiniezione di cellule infermiere Drosophila: un metodo di consegna intracellulare
Published: April 30, 2023
Abstract
Fonte: Catrina, I. E., et al. J. Vis. Exp. (2019).
A causa delle loro grandi dimensioni e dell’organizzazione relativamente semplice, le cellule infermiere Drosophila sono ideali per gli studi di imaging di cellule vive. Questo video descrive un metodo di microiniezione per la consegna di composti esogeni nelle cellule, e il protocollo in primo piano dimostra la procedura con sonde oligonucleotidi fluorescenti chiamate fari molecolari (MB) utilizzati per visualizzare trascrizioni di mRNA endogeno.
Protocol
Questo protocollo è tratto da Catrina et al., Visualizzando e monitorando mRNA endogeni in Live Drosophila melanogaster Egg Chambers, J. Vis. Exp. (2019). 1. Progettazione di MB per l’imaging di cellule vive Piegare la sequenza di RNA di destinazione per prevedere la struttura secondaria della destinazione dell’mRNA utilizzando la “forma RNA” dal server mfold (<a href="http://unafold.rna.albany.edu/?q=mfold/RNA-Folding-Form" target="_bla…
Materials
Spectrofluorometer
Fluoromax-4 Horiba-Jobin Yvon
n/a
Photon counting spectrofluorometer
Quartz cuvette
Fireflysci (former Precision Cells Inc.)
701MFL
Dumont #5 tweezer
World Precision Instruments
501985
Thin tweezers are very important to separate out the individual egg chambers
Halocarbon oil 700
Sigma-Aldrich
H8898
Cover slip No.1 22 mm x 40 mm
VWR
48393-048
Dissecting microscope
Leica MZ6 Leica Microsystems Inc.
n/a
CO2 fruit fly anesthesia pad
Genesee Scienific
59-114
Tris-HCL pH 7.5
Sigma-Aldrich
1185-53-1
Magnesium chloride
Sigma-Aldrich
7791-18-6
NaCl
Sigma-Aldrich
7647-14-5
Spinning disc confocal microscope
Leica DMI-4000B inverted microscope equipped with Yokogawa CSU 10 spinning disc Leica Microsystems Inc.
n/a
Hamamatsu C9100-13 ImagEM EMCCD camera
Hamamatsu
n/a
PatchMan NP 2 Micromanipulator
Eppendorf Inc.
920000037
FemtoJet Microinjector
Eppendorf Inc.
920010504
Injection needle: Femtotips II
Eppendorf Inc.
930000043
Loading tip: 20 μL Microloader
Eppendorf Inc.
930001007
Micro Cover glasses no. 1 or 1.5, 22 mm x 40 mm
VWR
48393-026; 48393-172
Dry yeast
Any grocery store
n/a
Computer, > 20 GB RAM
Although processing can be carried out on most computers, higher capabilities will increase the speed of the processing