骨髄由来マクロファージ由来の微小細胞外小胞ペプチドの同定

直径200nm未満の小さな細胞外小胞(sEV)は、ほぼすべての種類の体液に存在し、尿、汗、涙、脳脊髄液、羊水など、あらゆる種類の細胞から分泌されます¹。当初、sEVは細胞廃棄物を処分するための容器と見なされていたため、その後の10年間で最小限の研究につながり^{ました2。}最近、sEVに特定のタンパク質、脂質、核酸、およびその他の代謝物が含まれていることを示す証拠が増えています。これらの分子は標的細胞³に輸送され、細胞間コミュニケーションに寄与し、それを介して組織修復、血管新生、免疫4および炎症^5,6、腫瘍の発生および転移^7,8,9などの様々な生物学的プロセスに関与する。

sEVの研究を容易にするには、複雑なサンプルからsEVを分離することが不可欠です。sEVの密度、粒子サイズ、表面マーカータンパク質など、sEVの物理的および化学的特性に基づいて、さまざまなsEV分離方法が開発されています。これらの技術には、超遠心ベースの方法、粒子サイズベースの方法、イムノアフィニティー捕捉ベースの方法、sEV沈殿ベースの方法、およびマイクロフルイディクスベースの方法が含まれる¹⁰、^11、12。これらの技術の中で、超遠心分離ベースの方法は、sEV分離のゴールドスタンダードとして広く認識されており、最も一般的に使用されている技術です¹³。

ますます多くの証拠が、様々な生物のペプチド中に未発見の生物学的に活性なペプチドが多数存在することを示唆している。これらのペプチドは、成長、発達、ストレス応答14、^15、およびシグナル伝達¹⁶を調節することにより、多数の生理学的プロセスに大きく貢献します。sEVのペプチドドームの目的は、これらのsEVが担うペプチドを明らかにし、その生物学的機能の手がかりを提供することです。ここでは、示差超遠心によってsEVを単離し、続いてこれらのsEVからペプチドを抽出してペプチドドームをさらに分析するプロトコルを紹介します。