複数の蛍光染色および組織クリアリングアプローチを使用した3Dパターンでの毛状およびグラブラス皮膚神経支配の実証

皮膚は、環境への重要なインターフェースとして機能する体内最大の器官であり、多くの神経線維^1,2,3によって密に神経支配されている。皮膚神経支配は、全マウント皮膚および組織切片^4,5,6に対する染色など、様々な組織学的方法を用いて以前に広く研究されてきたが、皮膚神経線維の詳細な効果的な実証は依然として課題である^7,8。これを踏まえ、本プロトコールは、厚い組織切片において皮膚神経線維をより明確に示すための独自の技術を開発した。

切片の太さによる限界のため、神経支配皮膚神経線維の観察は、取得した画像情報からカルシトニン遺伝子関連ペプチド(CGRP)神経線維と局所組織・臓器との関係を正確に描くほど正確ではない。3D組織クリアリング技術の出現は、この問題を解決するための実行可能な方法を提供する^9,10。組織クリアリングアプローチの急速な発展は、近年、組織構造、器官全体、ニューロン突起、および動物全体を研究するための多くのツールを提供してきました¹¹。透明な皮膚組織は、共焦点顕微鏡によってはるかに厚い部分で画像化され、皮膚神経線維を視覚化するためのデータを得ることができる。

現在の研究では、ラット後足の足底および背部皮膚を、毛状およびグラブラス性皮膚の2つの標的部位として選択した³、^4、7。より長い距離で皮膚神経線維をトレースするために、皮膚組織を免疫組織化学的および組織化学的染色のために300μmの厚さでスライスし、続いて組織透明化処置を行った。CGRPは、感覚神経線維^12、13を標識するために使用した。さらに、組織背景上の皮膚神経線維を強調するために、ファロイジンおよびリンパ管内皮ヒアルロン酸受容体1(LYVE1)をさらに用いて、それぞれ血管およびリンパ管を標識した^14、15。

これらのアプローチは、皮膚神経線維の高解像度ビューを実証し、また、皮膚の神経線維、血管、およびリンパ管間の空間的相関を視覚化するために適用することができる直接的な方法を提供し、正常な皮膚の恒常性および病理学的条件下での皮膚の変化を理解するためのはるかに多くの情報を提供し得る。