オルガ鼻記小脳スライス培養におけるプルキンジェ細胞生存

インビトロモデリングは、生物医学研究に不可欠なツールです。これにより、研究者は、制限された細胞型、または隔離されたシステム/器官内の特定のメカニズムを研究し、厳密に制御することができます。オルガノイトスライス培養は、特に神経科学¹の分野で、インビトロ技術で広く使用されている。この方法は、ローラーチューブ技術²を用いて脳スライスを培養したゲーウィラーによって最初に確立され、後に山本らによって改変され、皮質スライス培養^を行うために微多孔膜の使用を導入した3。一次細胞培養と比較して、組織皮症スライス培養物は、組織の細胞建築、ならびに組織セクションの平面における天然細胞間接続を維持するという利点を提示する。

組織図スライスは、海馬^4、皮質^5、線条体^6、小脳^4、7、および脊髄^8、9などの中枢神経系の多くの部分から培養されている。彼らは創薬研究¹⁰の強力なツールであることが証明されています。神経活性分子の効果は、免疫染色および生化学アッセイを用いた生存および神経変性、神経回路形成、または電気生理学とライブイメージングを用いた破壊など、多くの方法で評価することができる。

この研究の目的は、小脳の発達をインビトロで模倣する関連モデルであることが知られている組織性小脳スライス培養を行う簡単な方法を記述することです。特に、プルキンエ細胞発達死の研究に着目した。生体内では、プルキンエ細胞は、出生後の最初の週にアポトーシスを受け、出生後3日目^(P3)11でピークに達する。小脳スライス培養においても同じパターンが観察され、P1とP8の間の動物からセレベラを採取するとプルキンエニューロンがアポトーシスによって死亡し、ピークは^P34、12である。組織性小脳スライス培養物の使用は、いくつかの神経保護分子^7、13を同定することを可能にし、ならびにこのプログラムされた細胞死^14、15、16に関与するメカニズムの一部を理解することを可能にした。ここでは、海^{馬における}Stoppiniらの研究に基づくプロトコルを記述し、Dusartら⁴による小脳に適応した出生後セレベラの急速な解剖および切り刻みが含まれる。神経保護治療の有無にかかわらず、微多孔膜を含む細胞培養インサートに培養をスライスする。および免疫蛍光染色は、神経細胞の生存を評価する。