唾液圏または単層としての体外増殖のためのヒト唾液腺からの唾液上皮細胞の単離

哺乳類では、唾液腺は、耳下腺、顎下腺、および言語下腺の3組の主要な唾液腺に編成される。また、舌の上に位置し、口腔1全体に散在する一連のマイナー腺が存在する。主要な腺は、2を生成した唾液のバルク量を担当しています.分泌因子を介して抗菌保護を提供することに加えて、唾液は食^道2を通過する食品を噛み、潤滑する過程で重要である。したがって、唾液腺機能不全は、十分な唾液を産生することができない患者が、歯科空洞や口腔カンジダ症3などの病気を発症しやすい医学的問題を表す。さらに、唾液の減少は、生活の質に大きな影響を与える食べ物を食べたり消化するのが難しくなります。

唾液腺機能不全は、主にシェーグレン症候群、自己免疫疾患、または照射療法を受けた頭頸部癌患者3,4,5に罹患している患者に見られる。 ⁶.自己免疫または放射線療法の結果として腺内の損傷した分泌性アチーニは自己更新を受けず、不可逆的な損傷を受けた患者を生きる6.唾液腺の研究はまた、ウイルス病因のメカニズムに興味を持つ注目や研究者を集めています。ヒトサイトメガロウイルス(HCMV)のような一部の病原体は、唾液腺内で持続的に複製し、唾液7、8を介して新しい宿主に新しい宿主に新しい宿主に伝染することを可能にする。したがって、唾液腺組織の堅牢で再現性の高いモデルを開発し、多様な医学的問題に取り組み、理解する必要があります。

マウス唾液腺系のいくつかのモデルは、唾液腺9、10を形成する異なる上皮細胞を理解し、特徴付ける出発点として使用されている。ヒトとマウスの唾液^腺11の間には明らかな大きな違いがある。最も顕著なヒト耳下腺は、下顎腺に関連して大きいのに対し、マウスの顎下腺および耳下腺は、サイズ1、2、11でかなり類似している。不死化ヒトのマンディビバル細胞株は存在するが、不死化細胞が原発組織の表現型を正確に維持しておらず、不死化細胞が実際に由来していないという二次的懸念が大きな懸念がある。唾液上皮自体¹².これらの理由から、ヒトから一次唾液組織を研究する興味と必要性があります。

ここでは、組織培養のためのヒト唾液腺から原発上皮細胞を分離するプロトコルについて説明する。私たちのプロトコルは、一般的に彼らの手順を簡素化するために行われた変更を加えたPringle et al. と Tran らの作品に基づいています^13,14.まず、Tran et al.のプロトコルは唾液組織を酵素的に消化するための長い5時間のインキュベーションを必要としますが、私たちの改変されたプロトコルは、プリングルらと同様に、わずか1時間のインキュベーションで成功しています。第二に、我々は組織消化のために異なる酵素を使用し、最も顕著なのは、元のTranらプロトコルで使用されているようにトリプシンを使用せず、代わりにジスパーゼとコラゲナーゼの混合物を使用します。我々は、最近の研究がトリプシンによる唾液組織の初期消化が細胞生存率の低下をもたらすことを示唆したように、初期消化ステップでトリプシンを避けることを好む、おそらくまれな幹細胞^集団15の喪失によって。最後に、気管支上皮細胞の伝播のために処方された市販の培地を用いて、基塩膜マトリックス(BMM)の表面に唾液を培養する。私たちのプロトコルは、唾液細胞を耳下腺、顎下腺、および言語下腺から単離するために使用することができます。これらの細胞は唾液アミラーゼおよび他の唾液特異的遺伝子を発現し、唾液アシナー上皮細胞7と同様の表現型を維持することを示す。この方法論を用いて、>50の一次ヒト組織サンプルから唾液培養物を生成することに成功しました。さらに、一次唾液細胞は、後日使用するために容易に凍結保存することができる。