JoVE Journal > Medicine
Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Results
Discussion
Disclosures
Acknowledgements
Materials
References
Türkçe

Automatically Generated
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.
Medicine

Tavşanlarda Subretinal Cerrahi Adım Protokolle Bir Adım

Published: September 13, 2016
doi:
10.3791/53927
, , , , , , , , ,
1Department of Ophthalmology,University of Bonn, 2Department of Ophthalmology,National University of Singapore, 3Geuder AG, 4Department of Ophthalmology,University of Münster, 5Section on Epithelial and Retinal Physiology and Disease,National Eye Institute/National Institutes of Health, 6Surgical Retina Department,Singapore National Eye Centre

Summary

Retina pigment epiteli (RPE) yedek stratejileri ve gen temelli tedavi birkaç retinal dejeneratif koşulları için kabul edilir. Klinik çeviri için, büyük göz hayvan modelleri hastalarda uygulanabilir cerrahi teknikleri incelemek gerekmektedir. Burada çok yönlü ve maliyet-etkin bir RPE transplantasyon, yönelikse subretinal cerrahi için bir tavşan modeli sunuyoruz.

Abstract

Yaşa bağlı makula dejenerasyonu (YBMD), retinitis pigmentosa ve diğer RPE bağlı hastalıklar endüstriyel gelişmiş ülkelerde erişkinlerde görme geri dönüşümsüz kaybı en sık nedenleridir. RPE transplantasyonu, işlevsiz RPE yerine fonksiyonunu ve böylece görme geri olabilir, umut verici bir tedavi olarak görünmektedir.

Burada tavşanların subretinal alan (SRS) içine bir iskele üzerinde bir kültür RPE tek tabaka nakli için bir yöntem açıklanmaktadır. vitrektomi xenotransplants bir politetrafloroetilen (PTFE) kaplı piston ile 20 ayar metalik meme oluşan bir özel yapılmış tetikçi kullanarak SRS içine teslim edildikten sonra. Geçerli teknik 6 yılda 150'den fazla tavşan ameliyatları gelişmiştir. Post-operatif takip gibi perfüzyon sabit histoloji ardından spektral domain optik koherens tomografi (SD-OCT) olarak in vivo görüntüleme non-invazif ve tekrarlayan kullanılarak elde edilebilir.

the yöntemi kolay öğrenme ve yüksek başarı oranı için iyi tanımlanmış adımlar vardır. Tavşanlar klinik çeviri için klinik öncesi çalışmalarda yararlı bir büyük göz hayvan modeli olarak kabul edilir. Bu bağlamda tavşan diğer büyük göz hayvan modellerinde bir maliyet-etkin ve belki de uygun bir alternatiftir.

Introduction

o merkezi görme kaybına neden olur Yaşa bağlı makula dejenerasyonu (YBMD), endüstriyel gelişmiş ülkelerde 50 yaş ve üstü erişkinlerde görme bozukluğu en sık nedenidir. Bu hastaların yaklaşık olarak% 15'i neovaskülarizasyon koroid kaynaklanan ve retina fonksiyonu 1 bozan olan hastalığın "ıslak" formu, muzdarip. Bu varyant anti-anjiyojenik ilaçlar 2 tekrarlanan içi vitreal enjeksiyonu ile oldukça etkili bir tedavi ile tedavi edilebilir. Ancak, hastaların (~% 85) büyük çoğunluğu retina pigment epiteli (RPE) kapsamında dışı mevduat (örneğin, druzen) ile karakterize edilir kuru halde, muzdarip. Bu birikintiler makulada retina atrofiye lider RPE fonksiyon bozukluğuna yol açmaktadır. herhangi bir iyileştirici tedavi seçeneklerinin eksikliği göz önüne alındığında, AMD birçok farklı iyileştirici tedavi yaklaşımları test ediliyor bir yoğun gelişmekte araştırma alanında, evrilmiştir. Cerrahi RPE yerine geçerbir çekici gelecek olasılık bu zayıflatıcı hastalık 3 yenmek için.

Otolog subretinal RPE nakli makulada işlevsiz ya da kayıp RPE değiştirir ve onun fizyolojik fonksiyonu 4-9 geri potansiyeline sahiptir. Bu cerrahi teknik transplantasyon 10 bilim adamı RPE sınırsız hücre kaynağı vererek, insan embriyonik kök hücreleri (hESC) ve uyarılmış pluripotent kök hücreler (iPSC) den RPE farklılaşma protokolleri gelişmesiyle birlikte bir atılım vardı. RPE nakli artık kök hücre kaynaklı tedavi için cazip bir ilk giren insan bir uygulama olarak kabul edilmektedir. Göz in vivo izleme araçları 11-13 mükemmel cerrahi erişim ve sofistike sunmaktadır.

RPE nakli için, tek yönlü bir minimal invaziv teslimat daha iyi RPE özellikleri ve nakli fonksiyonunu korumak için, alternatif olarak, suni taşıyıcı substr bir hücre süspansiyonu kullanılarak ileRPE değiştirilmesi için ates (iskeleleri) 4,14,15 kabul ediliyor. Büyük hayvan modelleri klinik öncesi doğrulama, henüz hayvan taşıma ve cerrahi teknik tarihine 16-23 eksik olduğu ile ilgili ayrıntılı bilgiler için gereklidir.

O, güvenli kullanım sağlar tek tabakalı bütünlüğünü ve işlevselliğini korur gibi ve tersine 25 bazı kanıtlara rağmen, diğerleri 11,24, sert ama esnek taşıyıcı alt tabaka kullanımını önermektedir. Zamanla biz subretinal alan (SRS) içine hücre taşıyıcı desteklenen RPE nakli implantasyonu için birkaç özel tasarlanmış araçlar ve yardımcı teknikler test ettik. Biz implantasyon başarısı 14,26,27 değerlendirmek için spektral domain optik koherens tomografi (SLO / SD-OCT) ve histoloji ile birlikte in vivo tarayıcı lazer oftalmoskopide, intraoperatif video kayıtlarını kullanılmaktadır. Burada tavşanlarda subretinal RPE implantlar için mevcut tavsiye sağlamak,bu 150 prosedürlerde 5 farklı tavşan suşu, 7 hücre taşıyıcı malzemeler ve 4 RPE hücre kaynakları olarak test edildi.

Protocol

Oftalmik araştırmalarda hayvan elleçleme Etik: Biz Tıp Fakültesi, Bonn Üniversitesi Etik komitesi onayı alınan ve Vizyon Araştırma ve Oftalmoloji Derneği (ARVO) tarafından belirtilen kurallara uymak. Ayrıca, tüm işlemler Kuzey Ren-Vestfalya eyaleti düzenleyici otoriteler tarafından kabul edildi. Yiyecek ve su ücretsiz erişim ile standartlaştırılmış bireysel kafeslerde 20 ° C, normal gün ışığına maruz kalma, – Hayvanlar 18 arasındaki sıcaklıklarda ile klimalı bir odada özel bir tesiste kapalı gerçekleştirildi. Not: hayvanların ameliyat yakınlık sağlamak için, bir hayvan sağlığı puanı levha aşağıdaki kesin hayvan dışlama kriterleri içeren izlenir: kabulde ağırlığına oranla% 20 kilo kaybı; hayvan belirgin siyanoz; hayvan titreten, kramplar vardır ya da koordinasyon içinde hareket edemez; . ataksi / parestezi, örneğin, felç; ilgisizlik; Aşırı oto yaralama (cilt yaraları, kesik uzuvlar). </ P> 1. Alet Sterilizasyon ultrasonik banyoda tekrar kullanılabilir aletleri yerleştirin. 500 ml saf su ve alet dezenfektan 2 ml ekleyin. 15 dakika boyunca süpürme fonksiyonunu kullanarak temiz araçlar. ultrasonik banyo aletlerini çıkarın ve 5 dakika için damıtılmış su ile iyice yıkayın. otoklavda aletleri takın ve (20 dakika süreyle 121 ºC altında araçların sterilizasyon) standart programını kullanın. 2. Enstrüman Hazırlık Kurmak ve cerrahi önlük, maske ve saç kapağı giyen, kapalı bir odada çalışarak, steril bir alan sağlamak. Steril cerrahi eldiven giymeden önce elleri dezenfekte ediniz. Detaylı ele 28 bkz. steril bir örtü üzerine steril aletleri yerleştirin. Enjeksiyon için 27 G iğne, denge tuz solüsyonu (BSS) 10 ml şırınga bağlı 40 mg triamsinolon ile dolu 1 ml şırınga ve bir 5 ml şırıngaya o yerleştirinasmak f yağlayıcı. 3-0 ipek, 7-0 vicryl, göz sopa (sklera / konjunktival kanamayı durdurmak için) bir örtü üzerinde, kasırga gazlı bez sünger, yara kapama şeritleri (vitrektomi ucu boru sabitleşmek için), ve avize endoillumination elyaf teli yerleştirin. 25 G avize endoilluminator paketini ve steril teknikler kullanılarak ışık makineye bağlanmak (adım 2.1). Steril teknikler kullanılarak vitrektomi makineye yüksek hızda vitrektörle ve Venturi kaset de dahil olmak üzere vitrektomi setini bağlayın (adım 2.1). 500 ml BSS şişe açın ve üreticinin talimatlarına göre Venturi kaset çözüm bağlayın. Hayvan Anestezi ve Konumlandırma 3. hazırlanması Doğru ilaç dozu sağlamak için hayvan tartılır. 27 G iğne başlama 0.35 mg / kg ketamin ve 0.25 mg / kg medetomidini içeren 1 şırınga kullanarak kas içi (IM) anestezi hazırlayın. karıştırmak için şırıngayı çevirin. 1/3 t 2 şırınga hazırlayınO operasyon sırasında anestezi korumak için dozlar. % 5 glukoz çözeltisi ve bir intravenöz infüzyon alternatif olarak deri altına enjeksiyon için 18 G iğne 20 ml ihtiva eden şırınga hazırlayın. midriatik gözün 3 x 1 damla dilatasyon için vitrektomi öncesinde düşer verin. battaniye ile kapak tavşan, anestezi enjeksiyonu öncesi sakin 30 saniye süreyle enjeksiyon yeri çevresinde arka bacak (gluteal kas) ve masaj enjekte etmek. Not: IM anestezi ilk atış yaklaşık 1 sürer – 2 saat. Tavşan büyüklüğü, ilaç toleransı, yağ tabakası, stres ve vücut sıcaklığına bağlı olarak. 45 dk – kayboluyor anestezi ilk işareti sonraki enjeksiyonlar son yaklaşık 30 (cerrah tarafından izlenmesi gerekir) bir nistagmus olduğunu. hipnoz, hiporefleksi, analjezi ve hayvanın kas gevşemesi doğrulayarak, uygun anestezi onaylayın. Tavşan bilinçsiz bir kez, boyun derisi kat subkutan enjeksiyon (Pt. 3.3) verin. methylc eklemeellulose yağlayıcı her 5 – ameliyat gözde 10 dakika, sigara ameliyat gözde yağ ve teyp kapakları ekleyin. Böyle bir optimal pozisyonda bir pamuk battaniye gibi bir örtü ile bol dökümlü cerrahi masaya kaplı tavşan yerleştirin (biraz battaniye bir kalıp içinden yükselmiş burun, bu nedenle göz yüzeyi ile aynı düzeye) Cerrahi mikroskop altında. objektif mikroskop dik göz hizalayın. Rektal termometre (Normotermi 39 ± 1 ° C) 29 kullanılarak düzgün vücut çekirdek sıcaklığını sağlamak. makas (bıçak bazı merhem) kullanılarak kesilmiş kirpik postoperatif enfeksiyonları azaltmak için. topikal 1 dakika süreyle 0.1 g / ml Povidon-İyot 3 damla ve steril BSS ile durulayın – 2 kullanılarak göz dezenfekte edin. göz için ortada önceden kesilmiş açılması ile steril örtü ile göz kapağı ve sonra (yapışkan) cerrahi kesi asmak 12 x 17 cm ile kaplayın. 4. Vitrektomi 3-0 ipek inv kullanarak Proptose ve güvenli bir gözerted kumpas ve bir konjonktiva kesi yaparlar. kan damarlarının yeterince limbus yakındır ama bir vannas makas (~ 1 mm mesafe) ile konjonktivayı İnsizyon. "T-cut" oluşturarak konjonktivayı teşrih. 7 mm – İlk Limbus ve daha sonra yaklaşık 6 için "T" şeklinde dikey konjonktivayı kesilirken makas paralel kesi büyütmek. Dikkatle açıkça konjonktivayı ayırın. dikkatle optik sinir doğru yönde bıçak keskin ucu takarak sağ göz / OD (sol göz / OS üzerinde 04:00) 8 saat 23 G mikrovitreoretinal (MVR) bıçak kullanarak bir sklerotomi gerçekleştirin. Yavaşça aynı yönde bıçak geri çekin ve sklerotomi büyütme kaçının. Yerleştirin ve dikiş özel yan port infüzyon kanülü 27 24 mmHg 7-0 ipek sütür ve set göz içi basıncı (göz içi basıncı) kullanarak. OD (10 o '2 saat 25 G düz kafa trokar ile sklerotomi gerçekleştirin; 4.2 adıma benzer OS üzerinde saat). Yapışkan bant ile sabitlemek ve yaklaşık% 30 ışık kaynağı açmak, düz kafa trokar içine 25 G avize ışığı yerleştirin. Gerekirse, daha iyi göz içi görüntülenmesi için bir 20. neşter kullanılarak ödemli kornea epiteli kaldırın. OD 10 saat (OS 02:00), (ön) yer düğüm atarak olmadan sklerotomili etrafında 7-0 sütür şekilli U-ve eklemek vitrektomi kesici ucu da 4.2 adıma benzer bir sklerotomi gerçekleştirin. Optik disk ve max küçük parçalar halinde vitreus mizah keserek yüksek hızda vitrektörle kullanarak fibrae medullares üzerinde devam, sonra giriş liman çevresinde vitrektomi 30 başlatın. 2000 – max aspire / dak 3.000 keser. Vitrektomi makinesinin belirtilen parametre kurulumu kullanarak 200 mmHg (Tablo 1) arka kutup a üzerinde yüksek hızda vitrektörle tutarak retinadan vitreus mizah ayırarak Arka vitreus dekolmanı (PVD) gerçekleştirinnd (nazikçe mümkünse) disk 31 sadece max aspire ederken üstün. kesmeden 200 mmHg. Intravitreal vitrektomi sırasında arka kutup ve midperiphery üzerinde yüzen vitreus kaldırılmasını görselleştirmek ve (toplam) yakınındaki kolaylaştırmak için yaklaşık 50 ul (20 mg) triamsinolon veya seyreltilmiş floresein (yaklaşık 0.1 mg / ml) enjekte edilir. mercek altında kapısı üzerinde kaçının. gaz tamponadı isteniyorsa bir (yetenekli) asistan tarafından periferik vitrözü tıraş girinti tavsiye edilir. BSS infüzyon çözeltisi içine 0.001 mg / ml nihai konsantrasyona kadar 20 birim / ml heparin ve 0.5 mg epinefrin ekleme paralel veya adım 4.10 sonra. Not: heparin / epinefrin içi enjekte edilmez gibi etkileri infüzyon akış hızına bağlı olarak geciktirilir. 5. Yükleme Shooter Not: Burada açıklanan çalışma Helsinki Bildirgesi ilkelerine girmez; insan hasta dahil etmedi. Burada, staard RPE hücreleri cenin insan gözü, kültürlenmiş ve kaplanmamış 10-mikron kalınlığında polyester farklılaştırılmıştır (PET) daha önce yayınlanmış bir protokol 14'e göre ekler izole edilmiştir. insan fetal malzeme ile çalışmak için bir izin Bonn Üniversitesi etik komitesi elde edilmiştir. Seçenek olarak ise, HES-RPE da Vaajasaari ve arkadaşları tarafından tarif edilen tekniğe uygun kültürlenmiştir Skottman laboratuar (. PREP Eser), sevk edilen 32.; Bu hücreler için bir izin R. Koch Enstitüsü'nün, Berlin, Almanya elde edilmiştir. önce göz dereceli BSS ile implant 3x hazırlanmasına hücre kültürü durulayın. 10 ml göz dereceli BSS ile standart hücre kültürü çanak (100 x 20 mm) doldurun. BSS içine hücre kültürü insert ekleme ve ışık mikroskobu altında çanak merkezi. Düz, fasulye şeklinde substratı elde etmek için bir künt, oval, ısmarlama bir iğne ile 2.4 x 1.1 mm implant dışarı Punchİki uzun kenarları ve iki yuvarlak kenarlı. Yavaşça BSS dolu ısmarlama yükleme istasyonu (Şekil 1) içine implantı dışarı floş BSS ile ikinci bağlantı noktası üzerinden iğne sel. İsteğe bağlı olarak, sadece, bir üçüncü kenar elde etmek için, implant (<0.5 mm), bir yuvarlak ucu kesin. İmplant tek tabakalı hücre taşıyıcı üzerinde yukarı yönlü olmasını sağlayarak doğru yönde olduğundan emin olun. dikkatlice iki neşter kullanmak konumlandırma değiştirmek için. implantın tüm ucunun içinde emniyete kadar iğne tutucu kullanarak atıcı aracı haline yavaşça ve tamamen implant itin. piston geri kalmalıdır. implantasyon anına kadar BSS altında yükleme istasyonu "yüklü" tetikçi ucu tutun. 6. İmplantasyon Bir gaz geçirmez şırınga bağlı uzatılabilen 41 G subretinal enjeksiyon iğnesi ile nöral retina Yaklaşımı (tüm hava kabarcıkları tahliye edildi emin olunborudan!). subretinally (kalsiyum ve magnezyum / CM ile) BSS enjekte edilir ve böylece yaklaşık 2 kabarcık retina dekolmanı (BRD) oluşturmak – 3 disk çapına (GG). Göz başına iki BRD güvenle kaldırılabilir. Dikey 23 G VR-makas ile 1,5 mm retinotomi büyütün. subretinal boşluk şimdi implantasyon veya daha fazla manevra için erişilebilir. 20 G yaklaşımına bir 1.4 mm kesi bıçakla sklerotomi (tam) uzatın. Yüklenen atıcı pürüzsüz, henüz rahat bir geçiş sağlamak için gerektiği gibi büyütmek, 20 G atıcı kukla kullanarak sklerotomili geçerek çalışıldı. 24 mmHg ideal sklerotomili üzerinden yüklenen atıcı 27 geçirin. kenar retinotomi Yaklaşım ve Epiretinal pozisyondan subretinally implantı çıkarmak. makul uzakta retinotomi gelen retina- altında iyi konumlandırılmış olduğundan emin olmak için yarı kapalı 23 G makas, forseps veya 41 G iğne ile implantı ayarlayın. 7.İşlem biten 25 G avize ve infüzyon kanülü çıkarın. Tüm sklerotomiden sütür. (Önceki dikilmesi son sklerotomi kadar) 08:00 sklerotomili 25 ul (10 mg) triamsinolon enjekte edilir. / Check palpasyonla göz içi basıncı ayarlayın ve gerekirse, 30 G iğne / şırıngayla BSS enjekte edilir. 7-0 vikril ile sütür konjonktiva. yavaş yavaş 3-0 ipek askı proptosing çıkarın (derin orbital venöz pleksus kaçının!). Kapağın altında deksametazon / antibiyotik merhem ekleyin. 1 saat pozisyon işletilen göz (hava / gaz) aşağı (gaz w / o) yukarı bakacak şekilde, ya da battaniye ile kaplı. sternal recumbence korumak için yeterli bilinç kavuşur kadar sahipsiz hayvan bırakmayın. Anestezi tamamen kaybolur önce tavşan taşımayın, bu verilen medetomidin'den miktarına eşit ajan ters medetomidini enjekte edilerek hızlandırılabilir edilebilir. 8. Post-operatif Hayvan Bakımı tutmakUygun koşullarda (sıcaklık, ışık, gıda, su, uzay, vb.) ve özel bir tesiste yakın izlemedeki tavşan. Bu hayvan iyi dinlenmiş, yani. Sağlayın, yiyecek veya su yoksunluk hiçbir genişletilmiş dönemleri. Özellikle enjeksiyon sitelerinde, herhangi bir yara veya yaralanma olup olmadığına bakın. enfeksiyonları önlemek için kuru yaralar tutun. enfeksiyon şüphesi olduğunda antibiyotik vermek: deksametazon 1 mg / g, neomisin sülfat 3,500 IU / g, 6,000 IU / g merhem göz yüzeyine 1 hafta postoperatif için günde iki kez uygulanan polimiksin B sülfat. Daha iyi oküler yüzey yenilenme ve düşük ameliyat sonrası ağrı için günde iki kez sonraki 7 gün postoperatif için deksametazon / antibiyotik merhem ekleyin. sistemik analjezikler Ver (Carprofene 4 mg / günde iki kez kg) ilk 48 saat boyunca. sternal recumbence korumak için yeterli bilinci yerine kadar gözetimsiz bir hayvan bırakmayın. bir hayvan iade etmeyin oTamamen iyileşene kadar diğer hayvanların şirkete ameliyat geçirmiş. Gereksiz sıkıntı hayvanları maruz bırakmayın. 9. SLO / SD-OCT Rehberlik Hazırlayın ve 27 G iğne başlama 0.175 mg / kg ketamin ve 0.125 mg / kg medetomidini içeren 1 şırınga kullanarak kas içi (IM) anestezi enjekte. karıştırmak için şırıngayı çevirin. net SD-OCT görüntüleme gözü nemlendiren ve korumak için en az her 5 dk bir yağlayıcı ekleyin isteğe bağlı özel bir kontakt lens kullanılabilir. Gerekli pozisyonda hayvan stabilize başlığın bir çelik platformu takın. prob dik gözü yerleştirerek, çelik platform üzerine tavşan yerleştirin. trakea kaçınarak alt yanak kemiği (mandibula) den tavşan başını tutun. kabaca 45º SD-OCT prob doğru ile tilt hayvanın kafası implant görüntüleme açısı optimize etmek. 30 derecelik lens ve opt aşağıdaki parametreleri kullanınminimal- Ekim görüntüleme [HS]: Tek hat için 30 derece ayarları 100 (ortalama alma) ayarlanmış ART modu ve 15 set ART modu ile hacim taramaları için 20 x 20 derecelik ayarları ile tarar; yüksek çözünürlük modunda gerekli değildir. İmplant (. Şekil 2A) odak düzlemi bulmak için SLO kızılötesi yansıma görüntüleme kullanın; Optimal odak implant kenarları 14 keskin olduğunda (tümü) ulaşılır. Bittiğinde kapağın altında deksametazon 1 mg / g, neomisin sülfat 3,500 IU / g, polimiksin B sülfat 6,000 IU / g merhem ekleyin.

Representative Results

Retina çekirdek vitrektomi yapıldı zaman% 61 yaklaşık bir başarı oranı vardı ve arka vitreus dekolmanı oluşturuldu% 76 e yükseldi altında subretinal implantasyon için açıklanan yönteme sonuçları Tablo 2. Aşı gösterilmiştir. Bu rakamlar ya intraoperatif ya da ilk 3 ameliyat sonrası günlerde ölen hayvanların% 21 Takriben içerir. Bu teknik, aynı zamanda, bir gözü farklı retina alanlarda iki iskeleleri implante etmek için kullanılabilir. Tavşan Stanzel ve arkadaşları tarafından tarif edildiği gibi, in vivo olarak, postoperatif SD-OCT ve histolojik işlem kullanılarak takip yapıldı. 27 (Şekil 2). Şek. 2A komplikasyonsuz naklinden sonra polyester membran (PET) implante kültür RPE tarayıcı lazer oftalmoskop kızılötesi yansıma görüntü gösterir.implant çevresindeki halo atrofi fotoseptör karşılık gelir. Şek. Implanta komşu nöral retina normale yakın yansıma bantları gösterirken 2B, karşılık gelen SD-OCT, haber retina, özellikle dış nükleer tabaka (onl) incelme, implant üzeri SD-OCT üzerinde hiper yansıtıcı bant gösterir. Bu sonuçlar atravmatik teslimat göstermektedir. Şekil. 2C iyatrojenik manipülasyon sonucu olasıdır retinotomi çevresinde subretinal yara ve onl zayıflatır implantın Hematoxiline / Eosin (H / S) lekesini göstermektedir, PET üzerindeki bitişik yapılmamış düzensiz pigmentli katmanı. İmplant altında Bruch membranı da bitişik olduğu ortaya çıktı ve koryokapillaris bazı dağınık eritrositler içerir. Bu morfolojik sonucu SD-OCT karşılaştırılabilir ve atravmatik teslim tezini güçlendirmektedir. incir ure 1: PET Hücre Carrier İnsan iPSC-RPE kültüre ile yükleme Shooter. A) ölçüye göre iğne. B) hücre kültüründen kesilmiş Bean şeklinde implant kullanan bir implant yumrukluyor gösterir. Implantın C) Konumlandırma önce yükleme. D) implant atıcı Yükleniyor. Bu rakamın büyük halini görmek için tıklayınız . Şekil 2: Kültür İnsan embriyonik kök-RPE PET Hücre Taşıyıcı Tavşan Subretinal Uzayda 4 Hafta. A) yeşil çizgi Şek kesitini demarcates, SLO kızılötesi yansıma görüntüsünü gösterir. 2B. B) İlgili SD-OCT. C) H / E leke, ayrıntılar için metne ya da 26,27 bkz.ove.com/files/ftp_upload/53927/53927fig2large.jpg "target =" _ blank "> bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız. Parametre Kullanılan ayarlar vitrektomi 6.000 kesim / dk Vakum 200 mmHg Yükseliş zamanı 1 saniye Hava 24 mmHg Sulama 24 cmH2O Diathermy % 30 Tablo 1: Vitrektomi Machine Parametre Ayarı. vitrektomi implant Tavşanlar ameliyat başarılı implant başarısız implant Ölüm Başarı oranı% çekirdek vitrektomi EVCİL HAYVAN 30 19 4 7 63.33 PET + RPE 70 42 12 16 60 PVD, / PPV w plazmin ± EVCİL HAYVAN 28 21 2 5 75 PET + RPE 22 17 2 3 77,27 Tablo 2: Yöntem ve İmplant Tipi dahil Son 150 Operasyon Özeti.

Discussion

Bir tavşan modeli kullanarak, güvenli ve tekrarlanabilir bir yöntem özel tasarlanmış atıcı alet ile subretinal boşluğa hücre taşıyıcıları kültüre RPE transvitreal teslimat için sunulmuştur. o subretinal manevralar ile vitrektomi standart teknikler içerir olarak tanımlanan yöntem, kolay öğrenme için kısa / optimize cerrahi teknik sunmaktadır. Sonuç büyük ölçüde düşük GİB'in de bleb retina dekolmanı (BRD) indükleyici retina ve kuruluk ile sklera hasar ve tavşan uygun konumlandırma önlenmesi, implantasyon sitesi üzerinden sıvı türbülansı önler temiz vitreoretinal arayüzü ve göz içi infüzyon ile kolaylaştırılır.

Biz örneğin, implantasyon başarısı engelleyen, her zaman oluşabilecek çeşitli intra-operatif komplikasyonlar olarak, ancak dikkatli göz içi kanamalar, anestezi gibi implantasyon gibi hayati adımlar sırasında kapalı solmaya nedeniyle enstrüman manipülasyon ya da oküler hipotoni ile BRD çöken, rhipoksik beyin hasarı veya hipertermi neden uzun çalışma sırasında anestezi, düşük kan basıncı aşırı doz nedeniyle abbit ölüm. hızla ele ve cerrahi ekibin deneyimi artırarak çözümlenir henüz bu komplikasyonlar zamanla azalır.

Bazı komplikasyonlar basit bir kaç ama önemli adımları izleyerek azaltılabilir. operasyon sırasında kornea, sklera ve konjonktiva zarar görmesini önlemek için, ve net bir göz içi medya, kurutulmuş olarak / kararmış sklera da oküler hipotoni ve neden yara ayrışmasına bir nedeni olabilir korumak için 10 dakika – yağlayıcı her 5 eklenmelidir / veya sklerotomisi gelen intraoperatif kaçak. Heparin özellikle subretinal implantasyon zorlu ve aynı zamanda epinefrin heparin 16 altında kanamayı azaltmak için ekleme yapan bir fibrin filmin oluşumunu önlemek için ilave edilmelidir. Çok uzun heparin / epinefrin maruz kalma süreleri (> 1 saat) kornea EDE önlemek için kaçınılmalıdırendotel dekompanzasyon 33, hipertansif kriz veya intraoperatif ölüm ile ma. Titiz vitreus kaldırma retinal ve / veya koroid müfrezeleri önlemek için cihaz (giriş) bağlantı yapılmalıdır. Göziçi araçlar mercek dokunuş (iatrojenik katarakt oluşumuna yol açar) veya (giriş sitesi) retina zarar vermemek için arka kutupta doğru işaret edilmelidir. böylece kontrol edilemeyen retinotomi yırtılmasını ve brd çökmesini önlemek, implantasyon alanı çevresinde hava akımını azaltır gibi bir göz içi yan bağlantı infüzyon kanülü, kullanılmalıdır. BRD orta hatta indüksiyon (optik sinir dikey eksen) ya da optik medulla liflere yakın geniş iyatrojenik retina dekolmanı önlemek için kaçınılmalıdır. Son olarak, son ama en BRD bir retina hasarına yol açabilir aşırı akış oranları kullanılarak (örneğin., Germe) subretinal BSS enjeksiyon önlemek için, düşük GİB'in de teşvik edilmelidir değil.

hücre carrie gibi pek çok çalışma değişkenlerir varyantları, fetal, yetişkin ya da kök hücre elde edilen RPE hücre kaynakları, immünsüpresifler için seçimler, vb., 14,26,27,34 keşfedilebilir. Bu tür serum serbest RPE kültür yöntemleri, subretinal alanda xenoRPE karakterizasyonu, implant demirleme için konak RPE tabakasının 14 veya stratejilerin çıkarılması gibi daha da geliştirilmesi devam eden mevcut iş vardır.

açıklanan teknikler chinchilla piç, Chinchilla piç / KBL melezleri, Yeni Zelanda Beyaz / Kırmızı Haç, Yeni Zelanda Beyaz (albino) ve Hollandalı kuşaklı olmak üzere 5 farklı tavşan suşları, kullanılan bugüne dek. erkek ve kadın tavşan Hem ameliyat edildi tavşanların en az 1,5 kg veya yaş 2 ay (türüne göre). 3 kg – En ameliyatları ağırlıkları 2,5 ile arası pigmentli tavşanlarda (chinchilla piç ya da chinchilla piç melezleri) idi.

Biz çalışmak için fırsat oldu tavşan suşları Tüm bazı özellikleri var gibi görünüyor. exclus verilen2009-13 yılında Almanya'da chinchilla piç suşu pigmentli tavşan ive kullanılabilirliği, biz bu hayvanların en deneyimi topladık. Ne yazık ki üreme durdurulan beri, artık mevcut değil, fakat ikincisi daha avantajlı kalın sklera ve daha büyük göz hacimleri hariç Yeni Zelanda Beyaz / Kırmızı Haç çok iyi karşılaştırır. Chinchilla pislik hibridleri önemli bir ameliyat fibrin oluşumunu başarılı ve retina altı manevralar sağlamak için, yukarıda belirtildiği gibi heparin / epinefrin kullanılmasını gerektirir. Bu protokol aynı zamanda, pigmente olmayan albino tavşanlarda (Yeni Zelanda Beyaz) yapılan, ancak özellikle brd oluşturma ve subretinal implantasyon azaltılmış kontrast takdir verilen daha zorlu olmuştur. Arka vitreus dekolmanı uyaran fizibilitesi bizim elimizde bağımlı tavşan gerginlik görünmüyordu.

Transvitreal subretinal teslim çoğu comm olduğunu verilen büyük olasılıkla seçim gelecekte cerrahi strateji güzergah üzerinde günümüzde klinik retina erişmek için. Taşıyıcı hayvan çalışmaları 11,15,23,35 destekler bir sonucu olarak birçok diğer gruplar kültür RPE için böyle teknikler sunduk. Aramant ve ark., 36 yerleştirir ziyade subretinal hedef siteye kendi hidrojel kapsüllü yumuşak implant iter bir enstrüman var. Thumann ark tasarımı. Akışkan enjeksiyonu 19 aracılığıyla kapalı yüzen taşıyıcı destekli grefti bültenleri bir oyuk spatula kullanmaktadır. Her ikisi de eski stratejiler bir epiretinally appositioned enstrümana göre bizim görüşümüze göre, komplikasyonlara daha eğilimli enstrüman, subretinal sokulmasını gerektirir. Montezuma ve ark., 22 domuzlar subretinal çip implantlar teslimi için subretinal yerleştirici enstrüman açıklanan ancak daha fazla çalışma bilgimiz bu yana yayınlanmıştır. Biz domuz bazı değişikliklerle açıklanan tekniği uzatmak mümkün olmuştur.

jove_content "> Bizim tercih hücre taşıyıcıları 10 mikron kalınlığında polyester tereftalat (PET) membranlar bulunmaktadır. cerrahi açıdan bakıldığında, bu malzeme hücre kültürü deneyleri sırasında geniş yönlülük yanı sıra, olumlu sertlik ve elastikiyet parametreleri vardır. Biz genişletilmiş tetrafloroetilen ile benzer deneyimleri bulundu 37 veya nano membranlar PET, poli-laktik / capronolactic asit (PLCL) ya da poli electrospun (ePTFE) -. laktik-ko-glikolik asit (PLGA) gibi kompozit nano (PLGA ya da PET) ve ultra ince PET 26 zaman PET membranlar bizim metalik atıcı alet kullanılır, bunlar Ultrathin poliimid membranlar elimizde yukarıda özetlenen protokol ile subretinal alanda implante edilemedi 27. atıcı kendi ejeksiyon meydan elektrostatik yük, sergilemek için arada bir eğilim var mı ( lığa).

Mermer ve ark. sistematik spontan reso okumuşiyatrojenik lokalize retina dekolmanı 38-41 subretinal sıvı rption. Hatta subretinal alanda manipülasyon sonrasında, bu olaysız ameliyatlarda ameliyat sonrası 4. günde tarafından emilir bulundu. Lazer retinopeksi retinotomi kenarlarını sabitlemek için yapılmaz. İnsan cerrahi ile karşılaştırıldığında beklenenin aksine zaman da, hava / gaz tampon gerekli değildir. Periferik vitreus titiz çıkarılması sağlanabilir sürece, özellikle üstün kadranda, bu aslında retinotomi kaynaklanan dev retinal yırtık neden olabilir. Sadece intraoperatif iatrojenik retina dekolmanı veya belirli bir implant pozisyonu güvenli gereken durumda kurtarma sonraki% 20 SF6 gaz tamponadı ile sıvı hava değişimini gerçekleştirmek için tavsiye edilir.

Nöral retinanın mekanik kaynaklı ablasyon tavşanlarda 42,43 RPE ve fotoreseptör hasarına neden olabilir rağmen, kapsamı büyük ölçüde (hatta normal BSS ile) de değişirvb germe böylece uyarılan retina ile birlikte kullanıldığında GİB'in, şırınga tipi, enjeksiyon hacmi, gibi faktörlere bekleyen. Ayrıca çoğu zaman önerilen Ca / Mg içermeyen BSS dekolmanı 42-44 kolaylaştırılmış test edilmiş, ancak bu (özellikle yüksek bir sıcaklıkta) ile ameliyat sırasında lensi kesafeti neden olur ve önemli ölçüde geciktirilir, hatta retina yeniden eki 27 bozar bulmuşlardır. 20 Yavaş subretinal enjeksiyonu – 100 ul şırınga ile düzenli BSS 30 ul hacminde bu nedenle tavsiye edilir; enjeksiyon iğne hareketleri etrafında retinotomi mühürler kadar az olması ve Bruch membranı zarar görmesini önlemek gerekir. Iatrojenik hasar Bazı RPE yara iyileşmesi tarafından çözüldü ve tekrar yerine yerleştirildikten sonra onl kalınlığı gözlenen göreli korunması, aynı zamanda başkaları 45 tarafından açıklandığı gibi RPE / fotoreseptör kompleksi, bu bozukluk tahammül düşündürmektedir olabilir.

Hücre-temelli tedaviler veya retinal protez preklinik anima gerektirirl testi öncesinde düzenleyici onayına ve insan güvenliği çalışmalarının başlatılması. Eski ülkeden ülkeye değişir. Burada anlatılan tavşan modeli kurulması, hatta düzenleyici otoriteler tarafından tüm gereksinimleri yerine getirmek için bir maliyet-etkin ve daha az zorlayıcı bir platform olarak hizmet edebilir. Ayrıca, daha sonra nihai çok merkezli klinik çalışmalarda ya da yol boyunca tekniğin daha fazla ilerleme cerrahların eğitimi için hizmet edebilir.

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

2008 ve 2010 (BVS), BONFOR / GEROK Burs O-137,0015 (BVS), BONFOR / GEROK Burs O-137,0019 (FT), Deutsche Forschungsgemeinschaft / DFG (BVS) STA 1135 / 2-1, Çince Rüdiger Vakfı hibe tarafından desteklenen Burs Konseyi sayılı 2008627116 (ZL) ve Geuder AG, Heidelberg (Şek. 2) tarafından sınırsız hibe. H. Skottman laboratuarında üyeleri, Tampere, Finlandiya Üniversitesi minnetle Şekil 2'de görülen RPE türetilmiş hes sağlamak için kabul edilmiştir.

Materials

s30 ultrasonic cleaning unit Elmasonic 100 4631 2.75L
DE-23  autoclave Systec C 2209 23L
Syringe  BD  300013
300995 
301285
300294
300330 		 1ml x3
2ml x3
5ml x1
10ml x1
20ml x1
Needle  BD 305196
305136		 18G x 1 
27G x5
Scalpel Feather 2975#20 blade#20 x3
Surgical drape HARTMANN
LOHMANN & RAUSCHER		 277 502
25 440		 60×40 cm x2
12×17 cm
Ocular sticks LOHMANN & RAUSCHER 16 516 66×5 mm
Twister gauze sponges HARTMANN 481 274 x2
Closure strips HARTMANN 540 686 x4
Opmi Visu CS Microscope Zeiss N/a incl. fundus imaging system BIOM II
Chandelier endoillumination Geuder G-S03503 +
G-S03504		 25G incl. trocar
Light machine Geuder G-26033 Xenotron III
Vitrectomy machine Geuder G-60000 MegaTRON S4 S4/ HPS
Vitrector Geuder G-46301 MACH2 vitreous cutter 23G
Venturi cassette  Geuder G-60700
Sideport-infusion cannula Geuder custom  1x23G
3-0 silk suture ETHICON V546G x1
Caliper Geuder G-19135 x2
Vannas scissors Geuder G-19777 x1
Sclerotomie blade Ziemer 21-2301 1x23G
1x20G
7-0 silk suture ETHICON EH6162H x1
Needle holder Geuder G-32320 x2
Iris forceps Geuder G-18910 x1
Colibri forceps Geuder G-18950 x1
Extendible subretinal injection needle DORC 1270.EXT 41G
VR scissor Geuder G-36542 25G
Grieshaber forceps holder Alcon 712.00.41 23G
Curved scissor forceps tips Alcon 723.52 23G
Implant loading station Dow Corning 3097358-1004 SYLGARD 184 Silicone Elastomer Kit
blunt oval implant trephine  Geuder custom-made  2.4 x 1.1 mm 
Shooter dummy Geuder G-32227 x1
Shooter Geuder G-S03443 x1
Flute needle DORC 1281.SD 20G (Vacuum)
Manual microliter syringe Hamilton 24535 100µl
Tissue culture plates Greiner bio-one  664160 100 x 20 mm
Spectralis Multi-Modality
Imaging System		 Heidelberg
Engineering		 N/a Spectralis HRA
 + OCT
Drugs and solutions
Name Company Active agent Comments
Mucadont-IS Merz Hygiene virucidal instrument disinfectant  2L
Mucocit T Merz Hygiene Aldehyde-free instrument disinfectant 2L
Ketamin 10% WDT Ketamine  10ml (100mg/ml)
Domitor Orion Pharma Medetomidine hydrochloride 10ml (1mg/ml)
Antisedan Orion Pharma Atipamezole hydrochloride 10ml (5mg/ml)
Neosynephrin POS 10% URSAPHARM Phenylephrine HCl 10ml
Mydriacyl Alcon Tropicamid 10ml (5mg/ml)
Methocel 2% Omni Vision hydroxypropyl methylcellulose 10g
PURI CLEAR ZEISS Balance salt solution (BSS)  500ml
Glucose 5%   B.Braun Glucose 5%  solution 100ml
Heparin-Natrium-25 000 Ratiopharm Heparin 5ml (2500 unit/ml)
Suprarenin SANOFI Epinephrine 1ml (1mg/ml)
Triamcinolone University of Bonn pharmacy preservative-free Triamcinolone  1ml (40mg/ml) 
Isoptomax eye ointment Alcon dexamethasone 1 mg/g
neomycin sulfate 3,500 IU/g
polymyxin B sulfate 6,000 IU/g		 10ml
Betaisodona Mundipharma Povidon-Iod 30ml (1g/10ml)
Optive ALLERGAN sodium carboxymethylcellulose glycerol 10ml
DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Fine, A. M., et al. Earliest symptoms caused by neovascular membranes in the macula. Arch Ophthalmol. 104, 513-514 (1986).
  2. Lim, L. S., Mitchell, P., Seddon, J. M., Holz, F. G., Wong, T. Y. Age-related macular degeneration. Lancet. 379, 1728-1738 (2012).
  3. Holz, F. G., Strauss, E. C., Schmitz-Valckenberg, S., van Lookeren Campagne, M. Geographic Atrophy: Clinical Features and Potential Therapeutic Approaches. Ophthalmology. 121, 1079-1091 (2014).
  4. Binder, S., Stanzel, B. V., Krebs, I., Glittenberg, C. Transplantation of the RPE in AMD. Prog Retin Eye Res. Prog Retin Eye Res. 26, 516-554 (2007).
  5. da Cruz, L., Chen, F. K., Ahmado, A., Greenwood, J., Coffey, P. RPE transplantation and its role in retinal disease. Prog Retin Eye Res. 26, 598-635 (2007).
  6. Del Priore, L. V., Tezel, T. H., Kaplan, H. J. Maculoplasty for age-related macular degeneration: reengineering Bruch’s membrane and the human macula. Prog Retin Eye Res. 25, 539-562 (2006).
  7. Gouras, P., Marmor, M. F., Wolfensberger, T. J. . The retinal pigment epithelium. , 492-507 (1998).
  8. Lund, R. D., et al. Cell transplantation as a treatment for retinal disease. Prog Retin Eye Res. 20, 415-449 (2001).
  9. Blenkinsop, T. A., Corneo, B., Temple, S., Stern, J. H. Ophthalmologic stem cell transplantation therapies. Regen Med. 7, 32-39 (2012).
  10. Hirami, Y., et al. Generation of retinal cells from mouse and human induced pluripotent stem cells. Neurosci Lett. 458, 126-131 (2009).
  11. Carr, A. J., et al. Development of human embryonic stem cell therapies for age-related macular degeneration. Trends in neurosciences. 36, 385-395 (2013).
  12. Schwartz, S. D., et al. Human embryonic stem cell-derived retinal pigment epithelium in patients with age-related macular degeneration and Stargardt’s macular dystrophy: follow-up of two open-label phase 1/2 studies. Lancet. 385, 509-516 (2015).
  13. Jha, B. S., Bharti, K. Regenerating Retinal Pigment Epithelial Cells to Cure Blindness: A Road Towards Personalized Artificial Tissue. Curr Stem Cell Rep. , 1-13 (2015).
  14. Stanzel, B. V., et al. Human RPE Stem Cells Grown into Polarized RPE Monolayers on a Polyester Matrix Are Maintained after Grafting into Rabbit Subretinal Space. Stem Cell Reports. 2, 64-77 (2014).
  15. Hynes, S. R., Lavik, E. B. A tissue-engineered approach towards retinal repair: scaffolds for cell transplantation to the subretinal space. Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 248, 763-778 (2010).
  16. Szurman, P., et al. Experimental implantation and long-term testing of an intraocular vision aid in rabbits. Arch Ophthalmol. 123, 964-969 (2005).
  17. Bhatt, N. S., et al. Experimental transplantation of human retinal pigment epithelial cells on collagen substrates. Am J Ophthalmol. 117, 214-221 (1994).
  18. Nicolini, J., et al. The anterior lens capsule used as support material in RPE cell-transplantation. Acta Ophthalmol Scand. 78, 527-531 (2000).
  19. Thumann, G., et al. The in vitro and in vivo behaviour of retinal pigment epithelial cells cultured on ultrathin collagen membranes. Biomaterials. 30, 287-294 (2009).
  20. Del Priore, L. V., Tezel, T. H., Kaplan, H. J. Survival of allogeneic porcine retinal pigment epithelial sheets after subretinal transplantation. Invest Ophthalmol Vis Sci. 45, 985-992 (2004).
  21. Pritchard, C. D., Arner, K. M., Langer, R. S., Ghosh, F. K. Retinal transplantation using surface modified poly(glycerol-co-sebacic acid) membranes. Biomaterials. 31, 7978-7984 (2010).
  22. Montezuma, S. R., Loewenstein, J., Scholz, C., Rizzo, J. F. Biocompatibility of Materials Implanted into the Subretinal Space of Yucatan Pigs. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 47, 3514-3522 (2006).
  23. Brantfernandes, R. A., et al. Safety study in Mini Pigs of transplanted Human Embryonic Stem Cell Derived Retinal Pigment Epithelium (hESC-RPE). Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 53, 312 (2012).
  24. Lu, B., Zhu, D., Hinton, D., Humayun, M. S., Tai, Y. C. Mesh-supported submicron parylene-C membranes for culturing retinal pigment epithelial cells. Biomed Microdevices. 14, 659-667 (2012).
  25. Boochoon, K. S., Manarang, J. C., Davis, J. T., McDermott, A. M., Foster, W. J. The influence of substrate elastic modulus on retinal pigment epithelial cell phagocytosis. Journal of biomechanics. 47, 3237-3240 (2014).
  26. Liu, Z., Yu, N., Holz, F. G., Yang, F., Stanzel, B. V. Enhancement of retinal pigment epithelial culture characteristics and subretinal space tolerance of scaffolds with 200 nm fiber topography. Biomaterials. 35, 2837-2850 (2014).
  27. Stanzel, B. V., et al. Subretinal delivery of ultrathin rigid-elastic cell carriers using a metallic shooter instrument and biodegradable hydrogel encapsulation. Invest Ophthalmol Vis Sci. 53, 490-500 (2012).
  28. AORN Recommended Practices Committee. Recommended practices for maintaining a sterile field. AORN J. 83 (2), 402 (2006).
  29. Hong, S. B., et al. Physiologic characteristics of cold perfluorocarbon-induced hypothermia during partial liquid ventilation in normal rabbits. Anesth Analg. 94, 157-162 (2002).
  30. Machemer, R. The development of pars plana vitrectomy: a personal account. Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 233, 453-468 (1995).
  31. Los, L. I., van Luyn, M. J., Nieuwenhuis, P. Organization of the rabbit vitreous body: lamellae, Cloquet’s channel and a novel structure, the ‘alae canalis Cloqueti’. Exp Eye Res. 69, 343-350 (1999).
  32. Vaajasaari, H., et al. Toward the defined and xeno-free differentiation of functional human pluripotent stem cell-derived retinal pigment epithelial cells. Mol Vis. 17, 558-575 (2011).
  33. Iverson, D. A., Katsura, H., Hartzer, M. K., Blumenkranz, M. S. Inhibition of intraocular fibrin formation following infusion of low-molecular-weight heparin during vitrectomy. Arch Ophthalmol. 109, 405-409 (1991).
  34. Thieltges, F., et al. Subretinal implantation of human embryonic stem cell derived RPE on ultrathin polyester carriers in rabbits. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 56, 1824 (2015).
  35. Kamao, H., et al. Characterization of human induced pluripotent stem cell-derived retinal pigment epithelium cell sheets aiming for clinical application. Stem Cell Reports. 2, 205-218 (2014).
  36. Seiler, M. J., Aramant, R. B. Intact sheets of fetal retina transplanted to restore damaged rat retinas. Invest Ophthalmol Vis Sci. 39, 2121-2131 (1998).
  37. Stanzel, B. V., et al. SD-OCT Complements Histology in Evaluation of Potential Bruch’s Membrane Prosthetics. Invest Ophthalmol Vis Sci. 51, 5241 (2010).
  38. Marmor, M. F., Abdul-Rahim, A. S., Cohen, D. S. The effect of metabolic inhibitors on retinal adhesion and subretinal fluid resorption. Invest Ophthalmol Vis Sci. 19, 893-903 (1980).
  39. Frambach, D. A., Marmor, M. F. The rate and route of fluid resorption from the subretinal space of the rabbit. Invest Ophthalmol Vis Sci. 22, 292-302 (1982).
  40. Kita, M., Negi, A., Marmor, M. F. Lowering the calcium concentration in the subretinal space in vivo loosens retinal adhesion. Invest Ophthalmol Vis Sci. 33, 23-29 (1992).
  41. Marmor, M. F. Control of subretinal fluid: experimental and clinical studies. Eye. 4 (Pt 2), 340-344 (1990).
  42. Faude, F., et al. Facilitation of artificial retinal detachment for macular translocation surgery tested in rabbit. Invest Ophthalmol Vis Sci. 42, 1328-1337 (2001).
  43. Szurman, P., et al. Ultrastructural Changes after Artificial Retinal Detachment with Modified Retinal Adhesion. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 47, 4983-4989 (2006).
  44. Fang, X. Y., et al. Effect of Ca(2+)-free and Mg(2+)-free BSS Plus solution on the retinal pigment epithelium and retina in rabbits. Am.J.Ophthalmol. 131, 481-488 (2001).
  45. Ivert, L., Kjeldbye, H., Gouras, P. Long-term effects of short-term retinal bleb detachments in rabbits. Graefes Arch.Clin.Exp.Ophthalmol. 240, 232-237 (2002).

Tags

Subretinal SurgeryRabbit ModelRPE ReplacementAge-related Macular DegenerationCell-based TherapyVitrectomyIntraocular SurgeryAnesthesiaDisinfectionProptosisConjunctival PeritomyMicrovitreoretinal BladeScleral Incision

Play Video
PDF
DOI
DOWNLOAD MATERIALS LIST
Cite This Article
Al-Nawaiseh, S., Thieltges, F., Liu, Z., Strack, C., Brinken, R., Braun, N., Wolschendorf, M., Maminishkis, A., Eter, N., Stanzel, B. V. A Step by Step Protocol for Subretinal Surgery in Rabbits. J. Vis. Exp. (115), e53927, doi:10.3791/53927 (2016).
Download Citation
Reprints and Permissions

View Video

✖

To prove you're not a robot, please enter the text in the image below

CAPTCHA Image
Play CAPTCHA Audio
Refresh Image