Выделение и культура взрослых данио мозга, полученных из нейросферах

Млекопитающие нервные стволовые клетки (NSC , ) были охарактеризованы в пробирке их способности расти в свободно плавающих культур как кластеры делящиеся клетки называются нейросферы ^1. В присутствии эпидермального фактора роста (EGF) и фактор роста фибробластов (FGF), NSC , делят либо симметрично , чтобы генерировать самообновлению NSCs, или асимметрично , чтобы генерировать два разных дочерних клеток, то есть., Дифференцирующим клеток – предшественников и новый НСК. Поэтому нейросфера культуры представляют собой смесь нервных стволовых клеток / клеток- предшественников и более дифференцированных нервных клеток ^2-4 NSC , может, тем не менее, следует отличать от других типов клеток нейросфера двумя специфическими свойствами:. Они показывают долгосрочное самообновление в FREE- плавающей культур , и они могут дифференцироваться во все нейронных клеточных клонов (то есть, нейроны, астроциты и олигодендроциты) после снятия факторов роста и адгезии к внеклеточного матрикса подложках. В MAMMALS, система нейросфера культура была первая система в пробирке используется для демонстрации присутствия NSCs во взрослом мозге и остается наиболее часто используемым инструментом для анализа пролиферации, способность самообновления и мультипотентность нервных стволовых клеток и клеток – предшественников. Поэтому, несмотря на то, сфера формирования анализы страдают от некоторых недостатков и ограничений ^4, эта система культуры является ценным для оценки потенциала клетки , чтобы вести себя как стволовые клетки при извлечении его из своей ниши в естественных условиях ⁴ и играет важную роль в определении ключевых регуляторов НСК самообновлению и клеточной судьбы определения ^5-7.

В отличие от млекопитающих, которые имеют ограниченный нейрогенез, данио конститутивно производят новые нейроны вдоль всей оси мозга на протяжении всей их жизни. Данио мозг взрослого человека показывает множественные нейрогенные нишах укрывательство нервных стволовых / клеток-предшественников делает Zebrafish мощную модель организма для понимания тон стволовых активность клеток в головном мозге, а также молекулярные программы, необходимые для регенерации центральной нервной системы. За последние 17 лет, несколько исследовательских групп разработаны методики выделения и культивирования данио нервных клеток ^8,9. Эти исследования были направлены на получение эмбриональных нейронов и глиальных клеток в пробирке, но не при поддержании NSCs и исследовать их свойства. Хотя нейросферы были сформированы во взрослом Apteronotus leptorhynchus (Brown Дух Knifefish) ^10, A нейросфера формирования анализа в данио осталось установить.

Здесь мы опишем нейросфера формирования анализа , чтобы продемонстрировать роль микроРНК-107 во время данио нейрогенез ^11. Протокол позволяет: 1) совокупность взрослых нервных стволовых клеток / клеток-предшественников либо из данио всего мозга или из нескольких вскрытых областей мозга, таких как телэнцефалона, тектуме и мозжечка; 2) генерация фли с плавающей самообновляющихся нейросферы из взрослых клеток нервных стволовых / прогениторных; 3) понижающего и повышающей регуляции экспрессии генов , кодирующих или малых некодирующих РНК ¹¹ в нейросферах, для того , чтобы исследовать их роль в пролиферации и дифференцировки нервных стволовых клеток / клеток – предшественников.