Siete pasos para células estrelladas

Las células estrelladas hepáticas son residentes del hígado de las células de la estrella-como la morfología y se encuentran en el espacio de Disse entre el hígado y las células endoteliales sinusoidales ^1,2 hepatocitos. Las células estrelladas se derivan de los precursores de la médula ósea y almacenar hasta 80% de la vitamina A del cuerpo total de ^{1, 2.} Tras la activación, las células estrelladas se diferencian en miofibroblastos para producir la matriz extracelular, contribuyendo así a la fibrosis del hígado ^3. Con base en su capacidad para contratar, las células estrelladas miofibroblástico puede regular el tono vascular asociado a la hipertensión portal ^4. Recientemente, hemos demostrado que las células estrelladas hepáticas son potentes células presentadoras de antígeno y puede activar las células NKT, así como los linfocitos T convencionales ^5.

Aquí presentamos un método para la preparación eficaz de las células estrelladas hepáticas del hígado de ratón. Debido a su localización perisinusoidal, el aislamiento de las células estrelladas hepáticas es un proceso de múltiples pasos. A fin de que las células estrelladas accesible para el aislamiento del espacio de Disse, hígados de los ratones son perfundidos in situ con el Pronasa digestivo E enzimas colagenasa y la perfusión P. Después, el tejido hepático se somete a tratamiento enzimático adicional con pronasa E y P en la colagenasa vitro. Posteriormente, el método se aprovecha de la enorme cantidad de gotas de vitamina A de lípidos que almacena en las células estrelladas hepáticas. Esta característica permite la separación de las células estrelladas hepáticas de otros tipos de células por centrifugación en un 8% de pendiente Nycodenz. El protocolo descrito aquí produce una población muy pura y homogénea de las células estrelladas. Pureza de las preparaciones pueden ser evaluados mediante la tinción de la molécula de proteína glial fibrilar marcador ácida (GFAP), previo al análisis por microscopía de fluorescencia o citometría de flujo. Además, la microscopía de luz revela el aspecto único de la forma de estrella, las células estrelladas hepáticas que albergan grandes cantidades de gotitas de lípidos.

En conjunto, se presenta un protocolo detallado para el aislamiento eficiente de las células estrelladas hepáticas, incluyendo imágenes representativas de su aspecto morfológico y la expresión de GFAP que ayudan a definir la entidad de células estrelladas.