Zeven Stappen naar cellen stellatum

Stellaatcellen zijn lever-ingezeten cellen van ster-achtige morfologie en bevinden zich in de ruimte van Disse tussen lever sinusoïdale endotheelcellen en hepatocyten ^1,2. Stellaatcellen zijn afgeleid van het beenmerg precursoren en opslaan van maximaal 80% van het totale lichaam vitamine A ^{1, 2.} Bij de activering stellaatcellen differentiëren in myofibroblasten aan de extracellulaire matrix te produceren, en aldus bijdragen tot leverfibrose ^3. Op basis van hun vermogen om contract, kan myofibroblastic stellaatcellen reguleren van de vasculaire tonus geassocieerd met portale hypertensie ^4. Onlangs toonden we aan dat leverstellaatcellen zijn potente antigeen presenterende cellen en kan activeren NKT-cellen evenals conventionele T-lymfocyten ^5.

Hier presenteren we een methode voor de efficiënte voorbereiding van leverstellaatcellen van muis lever. Door hun perisinusoïdale lokalisatie, de isolatie van leverstellaatcellen is een multi-step proces. Met het oog op stellaatcellen toegankelijk voor isolatie van de ruimte van Disse maken, muis levers worden perfusie in situ met de spijsverteringsenzymen pronase E en Collagenase P. Na perfusie, is de lever weefsel onderworpen aan een extra enzymatische behandeling met pronase E en Collagenase P in vitro. Vervolgens heeft de methode maakt gebruik van de enorme hoeveelheid vitamine A-opslag van lipide druppels in leverstellaatcellen. Deze functie kan de scheiding van stervormige cellen uit andere lever celtypen door centrifugeren op een 8% Nycodenz verloop. Het protocol hier beschreven geeft een zeer zuivere en homogene populatie van stellaatcellen. Zuiverheid van de voorbereiding kan worden beoordeeld door kleuring voor de marker molecule gliale fibrillaire zuur eiwit (GFAP), voorafgaand aan de analyse van fluorescentie microscopie of flowcytometrie. Verder lichtmicroscopie onthult het unieke uiterlijk van stervormige leverstellaatcellen dat grote hoeveelheden van lipide druppels haven.

Samen genomen, presenteren we een gedetailleerd protocol voor de efficiënte isolatie van leverstellaatcellen, met inbegrip van representatieve beelden van hun morfologische uiterlijk en GFAP expressie die helpen om de stellaatcel cel entiteit te definiëren.