שבעה צעדים Stellate תאים

Stellate תאים כבדית הם הכבד תושב מורפולוגיה של תאים דמויי כוכב ממוקמים בחלל Disse בין תאים בכבד סינוסי האנדותל ^1,2 hepatocytes. תאים Stellate נגזרות מבשרי מח עצם לאחסן עד 80% של ויטמין הגוף הכולל ^{1, 2.} עם ההפעלה, stellate תאים להתמיין myofibroblasts לייצר תאי מטריקס, ובכך לתרום לייפת הכבד ^3. בהתבסס על יכולתם החוזה, תאים stellate myofibroblastic יכול לווסת את הטון כלי הדם הקשורים ליתר לחץ דם הפורטל ^4. לאחרונה, הראינו כי stellate תאים בכבד הם תאים אנטיגן חזק הצגת ויכול להפעיל תאים NKT וכן לימפוציטים מסוג T קונבנציונאלי ^5.

כאן אנו מציגים שיטה להכנת יעילה של תאים בכבד stellate מהכבד העכבר. בשל לוקליזציה perisinusoidal שלהם, בידוד של תאים stellate הכבד הוא תהליך רב שלבי. על מנת להבהיר תאים stellate נגיש במנותק מן החלל של Disse, כבדי העכבר הם perfused באתרו עם אנזימי עיכול Pronase E ו collagenase זלוף פ בעקבות, רקמת הכבד נתונה טיפול אנזימטי נוסף עם Pronase E ו-P ב collagenase במבחנה. כתוצאה מכך, השיטה מנצלת את כמות מסיבית של ויטמין A, אחסון טיפות השומנים בתאי stellate הכבד. תכונה זו מאפשרת הפרדה של תאים stellate של סוגי תאים אחרים הכבד על ידי צנטריפוגה על שיפוע Nycodenz 8%. פרוטוקול המתואר כאן התשואות אוכלוסייה טהור מאוד הומוגני של תאים stellate. טוהר ההכנות ניתן להעריך על ידי מכתים את מולקולת חלבון סמן גליה חומצי fibrillary (GFAP), לפני הניתוח על ידי מיקרוסקופ פלואורסצנטי או cytometry הזרימה. יתר על כן, במיקרוסקופ אור חושף את המראה הייחודי של בצורת כוכב stellate בתאי הכבד כי הנמל כמויות גדולות של טיפות השומנים.

יחדיו, אנו מציגים פרוטוקול מפורט עבור בידוד יעיל של stellate בתאי הכבד, כולל תמונות של נציג המראה המורפולוגי שלהם ביטוי GFAP המסייעים להגדיר את הישות תא stellate.