Sete Passos para Stellate Células

Células estreladas hepáticas são fígado residente células de estrelas, como morfologia e estão localizados no espaço de Disse entre fígado sinusoidal células endoteliais e hepatócitos ^1,2. Células estreladas são derivados de precursores da medula óssea e armazenar até 80% do total do corpo de vitamina A ^{1, 2.} Após a ativação, as células estreladas diferenciar em miofibroblastos para produzir matriz extracelular, contribuindo para a fibrose hepática ^3. Base na sua capacidade de contratar, as células estreladas miofibroblástica pode regular o tom vascular associada à hipertensão portal ^4. Recentemente, nós demonstramos que as células estreladas hepáticas são células antígeno apresentando potentes e podem ativar as células NKT, bem como convencionais linfócitos T ^5.

Aqui apresentamos um método eficiente para a preparação de células estreladas hepáticas do fígado do rato. Devido à sua localização perisinusoidal, o isolamento de células estreladas hepáticas é um processo multi-passo. A fim de tornar as células estreladas acessíveis ao isolamento do espaço de Disse, fígado de camundongos são perfundidos in situ com a enzimas digestivas pronase E e perfusão colagenase P. Em seguida, o tecido hepático é submetido a tratamento enzimático adicionais com pronase E e P colagenase em vitro. Posteriormente, o método tira proveito da enorme quantidade de gotículas de vitamina A de armazenamento de gordura nas células estreladas hepáticas. Este recurso permite a separação de células estreladas de outros tipos de células hepáticas por centrifugação em um gradiente Nycodenz 8%. O protocolo aqui descrito produz uma população altamente pura e homogénea de células estreladas. Pureza das preparações podem ser avaliados através da coloração para a molécula de proteína glial fibrilar ácida marcador (GFAP), antes da análise por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo. Além disso, microscopia de luz revela a aparência única em forma de estrela de células hepáticas estreladas que abrigam grandes quantidades de gotículas lipídicas.

Tomados em conjunto, nós apresentamos um protocolo detalhado para o isolamento eficiente de células estreladas hepáticas, incluindo imagens representativas de sua aparência morfológica e expressão GFAP que ajudam a definir a entidade de células estreladas.