Seven Steps to Cells Stellate

Hepatische Sternzellen sind Leber-residenten Zellen des sternförmigen Morphologie und sind in den Raum der Disse zwischen Leber sinusförmige Endothelzellen und Hepatozyten ^1,2 liegt. Sternzellen sind aus dem Knochenmark Vorstufen abgeleitet und bis zu 80% der gesamten Körper Vitamin A ^{1, 2.} Nach der Aktivierung, Differenzierung Sternzellen in Myofibroblasten um extrazelluläre Matrix produzieren und damit einen Beitrag zur Leberfibrose ^3. Auf der Grundlage ihrer Fähigkeit zur Kontraktion kann myofibroblastischer Sternzellen regulieren den Gefäßtonus mit portaler Hypertonie ⁴ zugeordnet. Kürzlich haben wir gezeigt, dass Lebersternzellen sind potente Antigen-präsentierende Zellen und können NKT-Zellen als auch konventionelle T-Lymphozyten ^{5 zu} aktivieren.

Hier präsentieren wir eine Methode zur effizienten Erstellung von hepatischen Sternzellen aus Maus-Leber. Aufgrund ihrer perisinusoidal Lokalisation, ist die Isolierung von hepatischen Sternzellen in einem mehrstufigen Prozess. Um Sternzellen zugänglich Isolierung aus dem Raum der Disse machen, Maus Leber in situ mit den Verdauungsenzymen Pronase E und Collagenase P. Nach Perfusion perfundiert werden, wird das Lebergewebe, um zusätzliche enzymatische Behandlung mit Pronase E und Collagenase P in unterzogen vitro. Anschließend findet die Methode den Vorteil der großen Menge an Vitamin A-Speicherung Fetttröpfchen in hepatischen Sternzellen. Diese Funktion ermöglicht die Trennung von sternförmigen Zellen aus anderen Leber Zelltypen durch Zentrifugation auf einem 8% Nycodenz Gradienten. Die hier beschriebene Protokoll ergibt sich eine sehr reine und homogene Population von Sternzellen. Die Reinheit der Präparate können durch Färbung für die Marker-Molekül sauren Gliafaserproteins (GFAP), vor der Analyse mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie beurteilt werden. Zeigt ferner, wie die Lichtmikroskopie das einzigartige Erscheinungsbild der sternförmigen Lebersternzellen, dass große Mengen von Fetttröpfchen Hafen.

Zusammen bilden wir ein detailliertes Protokoll für die effiziente Isolierung von hepatischen Sternzellen, darunter repräsentative Bilder ihrer morphologischen Erscheinungsbild und GFAP Ausdruck, der den sternförmigen Zellen Einheit definieren helfen.