Sept étapes pour Stellate Cellules

Cellules étoilées du foie sont le foie-résident des cellules de morphologie en forme d'étoile et sont situés dans l'espace de Disse entre les cellules endothéliales sinusoïdales du foie et de ^1,2 hépatocytes. Cellules étoilées sont dérivées à partir de précurseurs de moelle osseuse et de stocker jusqu'à 80% de la vitamine A totale du corps ^{1, 2.} Lors de l'activation des cellules étoilées se différencier en myofibroblastes pour produire la matrice extracellulaire, contribuant ainsi à ³ fibrose hépatique. Basé sur leur capacité à se contracter, les cellules étoilées myofibroblastique peut réguler le tonus vasculaire associée à l'hypertension portale ^4. Récemment, nous avons démontré que les cellules étoilées du foie sont des cellules présentant l'antigène puissants et peuvent activer les cellules NKT ainsi que les lymphocytes T conventionnels ^5.

Nous présentons ici une méthode pour la préparation efficace des cellules étoilées du foie à partir du foie de souris. En raison de leur localisation périsinusoïdales, l'isolement de cellules étoilées du foie est un processus multi-étapes. Afin de rendre accessibles les cellules étoilées à l'isolement de l'espace de Disse, foies de souris sont perfusées in situ avec le E enzymes digestives pronase et la collagénase P. perfusion Après, le tissu hépatique est soumis à un traitement enzymatique supplémentaire avec pronase E et P dans la collagénase vitro. Par la suite, la méthode tire parti de l'énorme quantité de gouttelettes lipidiques de vitamine A-stockage dans les cellules étoilées du foie. Cette fonctionnalité permet la séparation des cellules étoilées du foie d'autres types de cellules par centrifugation sur un gradient de 8% Nycodenz. Le protocole décrit ici donne une population très pure et homogène de cellules étoilées. Pureté de la préparation peut être évaluée par coloration de la molécule marqueur protéique fibrillaire gliale acide (GFAP), avant l'analyse par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux. En outre, la microscopie optique révèle l'aspect unique de la forme d'étoile cellules étoilées du foie qui abritent de grandes quantités de gouttelettes lipidiques.

Pris ensemble, nous présentons un protocole détaillé pour l'isolement efficace des cellules étoilées du foie, y compris des images représentatives de leur aspect morphologique et d'expression GFAP qui aident à définir l'entité de cellules étoilées.