في هذه المقالة ، ونحن تصف تحديد النمط المصلي الفيروس الغدة المرتبطة 3 (AAV3) مثل ناقلات الأكثر كفاءة لاستهداف خلايا سرطان الكبد.
نواقل المؤتلف على أساس البارفو غير الممرضة للإنسان ، وقد تم تطوير هذا الفيروس الغدة المرتبطة 2 (AAV2) ، والمستخدمة حاليا في عدد من التجارب السريرية العلاج الجيني. في الآونة الأخيرة ، وعدد من المصليين AAV إضافية كما تم المعزولة ، والتي ثبت لعرض انتقائي الأنسجة tropism في مختلف النماذج الحيوانية الكبيرة والصغيرة 1. من الأنماط المصلية 10 AAV الأكثر شيوعا ، AAV3 هي حتى الآن في الأقل كفاءة transducing الخلايا والأنسجة في المختبر وكذلك في الجسم الحي.
ومع ذلك ، في دراساتنا المنشورة مؤخرا ، وقد وثقت لنا أن AAV3 ناقلات تنبيغ الإنسان بسرطان الكبد — ورم أرومي كبدي (HB) وسرطان الخلايا الكبدية (HCC) — خطوط الخلايا بكفاءة للغاية بسبب AAV3 يستخدم الإنسان مستقبلات عامل النمو الكبدية الخلوية كما شارك في لمستقبلات ملزمة والدخول في هذه الخلايا 2،3.
في هذه المقالة ، نحن تصف الخطوات اللازمة لتحقيق الكفاءة العالية تنبيغ من خلايا سرطان الكبد عن طريق ناقلات المؤتلف AAV3 يحمل الجين المراسل. قد تستخدم ناقلات AAV3 المؤتلف يحمل الجين العلاجي تؤدي في نهاية المطاف إلى العلاج الجيني المحتملة لسرطان الكبد لدى البشر.
وقد وضعت ناقلات المؤتلف على أساس البارفو غير ممرضة الإنسان ، والفيروس الغدة المرتبطة بها (AAV) ، والمستخدمة حاليا في عدد من التجارب السريرية العلاج الجيني 5. سابقا ، من الأنماط المصلية 10 AAV الأكثر شيوعا ، وقد تم الإبلاغ عن كفاءة تنبيغ من AAV3 ناقلات بصفة عامة لتكون منخفضة بشكل خاص ، سواء في المختبر والمجراة 1. ومع ذلك ، لدينا الملاحظة الأخيرة التي AAV3 ناقلات تنبيغ سرطان الكبد خطوط الخلايا البشرية بشكل جيد للغاية ، كما يحدد الكمية التي التدفق الخلوي 2 ، والتي تستخدم AAV3 النمو الكبدية البشرية مستقبلات عامل (hHGFR) كما شارك في مستقبلات الخلوية للدخول في هذه الملزمة و 3 خلايا ، توحي بقوة انتقائي الأنسجة tropism من AAV3 لخلايا الكبد البشرية بصفة عامة ، وخلايا سرطان الكبد بشكل خاص. ومع ذلك ، منذ AAV3 ناقلات تنبيغ أيضا خلايا الكبد البشرية العادية 2 بكفاءة ، واحتمال استخدامها في علاج الجينات السرطانية في الجسم الحي تطبيق ستتأثر سلبا. استراتيجية واحدة ممكنة للتحايل على هذه المشكلة المحتملة تشمل الترانسكربتي استهداف الخلايا السرطانية من خلال تحديد الجين المنتج الذي يتم انتاجه بشكل انتقائي من الورم ، ولكن ليس عن طريق خلايا الكبد الطبيعية. على سبيل المثال ، أظهرت الدراسات السابقة التي تستخدم مستويات مصل α – بروتين جنيني (اف ب) كعلامة محددة لتتبع وجود ، التقدم ، و / أو تكرار بعض أنواع سرطانات الكبد ، وخلايا الكبد الطبيعية منذ تنتج عادة كميات صغيرة جدا من هذا البروتين. في الواقع ، لقد استخدمنا AAV3 ناقلات تحتوي على مروج لوكالة فرانس برس في استهداف التعبير التحوير في خلايا سرطان الكبد ، ولكن ليس في خلايا الكبد الطبيعية 2 ، وتجري حاليا دراسات لاختبار فعالية هذا النهج في نموذج الفئران طعم أجنبي من سرطان الكبد. في دراساتنا إضافية ، لاحظنا أنه يمكن كفاءة تنبيغ مختلف ناقلات AAV المصلي زيادة ملموسة بنسبة الطفرات الموقع موجهة للمياه السطحية المعرضة للمخلفات في التيروزين الفيروسية capsids 14/06. حيث يتم حفظها أيضا 6 من 7 السطحية المعرضة للtyrosines في AAV3 ، وقد أجرينا موقع الطفرات الموجهة من هذه المخلفات وأشار إلى أن يتم تحسين كبير في كفاءة تنبيغ ناقلات AAV3 التيروزين ، متحولة في خلايا سرطان الكبد (بيانات غير منشورة). كما أن الدراسات التي تجري حاليا لتقييم سلامة وفعالية النواقل AAV3 التيروزين ، متحولة في نماذج طعم أجنبي الماوس لورم أرومي كبدي الإنسان وسرطان الكبد ، وإذا نجحت ، فإن الأمثل المصلي AAV3 التيروزين ، متحولة نواقل قد تكون مفيدة لاستهداف الكبد الإنسان السرطان العلاج الجيني لالمحتملين.
The authors have nothing to disclose.
نشكر الدكاترة. ر وجود Samulski شياو شياو للهدايا من نوعها AAV3 المؤتلف والبلازميدات AAV – EGFP ، على التوالي ، والدكتور توملينسون غيل بسخاء لتوفير خلايا Hep293TT. وأيد هذا البحث في جزء من دائرة الصحة العامة R01 المنح منحة HL – 076901 ، 097088 HL – R01 ، وP01 DK – 058327 (المشروع 1) من المعاهد الوطنية للصحة (ك).
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
DMEM | Cellgro | 10-0170CM | ||
PEI | Polysciences | 23966 | ||
Benzonase | Novagen | 70664-3 | ||
HiTrap Q HP column | GE Healthcare | 17-1154-01 | ||
Salmon sperm DNA | Fisher | NC9753983 | ||
Iodixanol gradient | OptiPrep | 1114542 | ||
G-50 Columns | GE Healthcare | 27-5330-01 |